耐福美双的哈茨木霉菌株诱导及其几丁质酶生防特性研究

用紫外线诱变与药剂驯化相结合的方法,以哈茨木霉Th-30为出发菌株诱导得到4株能在含杀菌剂福美双2.0×105μg/L的培养基上正常生长的耐受性提高近10倍变异菌株。其中变异菌株UV-4在高浓度福美双培养基能正常生长并产生具有生防功能的几丁质酶,该几丁质酶能抑制黄瓜炭疽病菌产孢能力的85.43%,抑制致病力达68.88%,并能降解该病菌菌丝的细胞壁。UV-4菌株遗传稳定,具与福美双混用协同防治蔬菜上的真菌病害的潜力。     

哈茨木霉H-13液体发酵产几丁质酶的条件

文中以产几丁质酶的哈茨木霉H-13为实验菌株,在相同基本培养基上,采用每次同一浓度不同碳源,同一碳源不同氮源浓度;相同浓度碳源和氮源,不同pH、温度对木霉产几丁质酶能力的影响,筛选出产几丁质酶的最佳因子,提高木霉产几丁质酶发酵的效果,促进该项发酵产品的产业化。     

哈茨木霉T23对花生的促生增产作用*

 用哈茨木霉（Trichoderma harzianum）T23制剂处理花生。结果表明：哈茨木霉T23制剂不但可以促进花生出苗和植株健壮生长，而且可以促进花生分枝、增加花生结果数、 有籽果率和花生仁的百粒籽重，从而提高花生产量。     

哈茨木霉高产几丁质酶菌株的筛选及产酶条件研究

通过氮离子注入法诱变哈茨木霉(Trichoderma harzianum)野生菌,再以透明圈法对平板培养菌进行筛选,用DNS法测定液体培养菌的酶活,从中筛选出1株产几丁质酶能力高的哈茨木霉菌株H-13,并通过单因素试验和正交试验优化该目标菌株的发酵条件.单因素试验结果表明,添加1.0%蛋白胨时产酶量最高,1.0%胶体几丁质对菌体产几丁质酶的诱导性最强,初始pH 5.5、培养96 h时产酶量较高.正交试验表明,H-13以1.0%蛋白胨为氮源、0.5%胶体几丁质为碳源,在初始pH 5.0的培养基中培养96 h时,发酵液中的几丁质酶活可达到731.69 U?mL-1,比同样条件下的野生菌株酶活力提高1倍.     

哈茨木霉几丁质酶基因提高水稻抗病性研究

 以农杆菌介导法将木霉内切几丁质酶基因ThEn－42导入粳稻台北－309和农虎6号中。PCR检测表示ThEn－42己整合入水稻基因组中。在温室中进行的抗病性检测结果表明：T₀代转基因植株对纹枯病菌（Rhizoctonia solani Kühn）的抗性得到了明显的提高。T₀代转基因植株的离体叶片也表现出对纹枯病菌的抗性。     

生防哈茨木霉菌株产木聚糖酶的条件研究

    通过对影响4种生防哈茨木霉菌株NF9、P1、CT22,TC3产生木聚糖酶活性的培养条件的研究,优化哈茨木霉菌株产生未聚糖酶的pH、温度、表面活性剂Tween 80浓度和培养时间等参数.结果表明.在丰固体培养基和振荡培养条件下,不同的哈茨木霉菌株中最适木聚糖酶产生的条件不同.哈茨木霉菌株NF9产生最大木聚糖酶活性的条件是PH 5.0、30℃、0.7%(表面活性剂Tween 80浓度)和72h;在P1中是pH 4.0、27℃、1.2%和84 h;在CT22中是pH 5.0、27℃,0.7%和84 h;在TC3中是pH4.0、30℃、0.7%和96 h.     

哈茨木霉几丁质合酶基因ThChsC的克隆及序列分析

 【目的】克隆哈茨木霉几丁质合酶基因全序列,并对序列进行生物信息学分析。【方法】利用多聚酶链式反应（PCR）和染色体步移技术（genome walking）克隆几丁质合酶基因全序列;应用生物信息学软件对获得的基因序列及编码的蛋白序列进行分析;通过同源建模,对蛋白质的三维结构进行预测。【结果】从哈茨木霉（Trichoderma harzianum Th-33）中扩增得到几丁质合酶基因ThChsC（GenBank登录号HQ419000）,编码区（CDS）长为2 835 bp,由4个外显子和3个内含子组成,开放阅读框（ORF）长2 688 bp,编码895个氨基酸。序列比对和同源性分析显示,该基因与串珠状赤霉（Gibberella moniliformis,ACY08039.1）和禾生刺盘孢菌（Colletotrichum graminicola,AAL23718.1）几丁质合酶基因相似性最高,分别为80%和81%;相应的氨基酸序列同源性均为80%,系统进化分析表明,ThChsC属于III型几丁质合酶亚家族。几丁质合酶ThChsC含有1个Chitin_synth_1结构域,1个Chitin_synth_1N结构域,1个Chitin_synth_2结构域,3个跨膜结构域,不含信号肽,为膜结合蛋白。对预测的三维结构分析表明,ThChsC含有糖基转移酶的保守DHD结构域。【结论】从哈茨木霉Th-33中克隆得到几丁质合酶基因ThChsC,对该基因的深入研究有助于探索哈茨木霉几丁质合成的机制。     

哈茨木霉TR-12对番茄褐斑病菌的拮抗作用

PDA平板拮抗试验表明,哈茨木霉对番茄褐斑病菌有强烈的拮抗作用,其孢子悬浮液的含孢量为105~108个/mL时,对番茄褐斑病菌的抑制率高达82.5%。比较测定了哈茨木霉菌液和4种药剂对番茄褐斑病菌的抑制效果。哈茨木霉对番茄褐斑病菌的抑制作用较50%速克灵WP和50%退菌特WP相对较差,哈茨木霉菌孢子悬浮液含孢量106个/mL的抑制效果与75%百菌清相近,含孢量108个/mL的抑制效果与70%甲基托布津相当。     

一株生防木霉菌株的鉴定及其对番茄保护酶的诱导作用

采用形态鉴定和5.8S rDNA-ITS序列分析对土壤中分离得到菌株进行鉴定.结果表明,其形态特征与哈茨木霉非常接近,5.8S rDNA-ITS序列分析表明.其与哈茨木霉的同源性达到99%,因此,鉴定其为哈茨木霉新菌株.用其孢子悬浮液对番茄灰霉病进行防治,测定植物苯丙氨酸解氨酶(PAL)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化物...     

哈茨木霉对几种植物病原真菌拮抗作用及其抗药性的室内测定

室内通过对峙培养法测定了在不同的温度处理下哈茨木霉TH-1对棉疫病菌PB-1、番茄枯萎病菌TF-5、棉花枯萎病菌WF-3、西瓜枯萎病菌SF-1和水稻恶苗病菌FF-2的拮抗作用。结果表明,不同的温度处理下．哈茨木霉对供试植物病原茵的抑制作用不一,其中,以30℃黑暗条件哈茨木霉对病原菌菌丝生长的抑制作用最强,对峙培养72h后,木霉菌TH-1对PB-1、TF-5、WF-3、SF-1和FF-2的抑制率分别达到81．1％、74．1％、77．8％、65．7％和60％;25℃条件下次之;10℃、15℃和35℃条件下木霉菌菌丝扩散速度较慢,且孢子产生量少,不能有效地压制病原菌菌丝的扩展。表明环境温度过高或过低对木霉菌菌丝的生长及分生孢子的产生均有较大影响。试验还镜检了木霉菌与病原菌在培养基中菌丝间的相互作用．主要表现为营养及空间的竞争、菌丝间的缠绕以及抑茵物质的影响。同时,哈茨木霉TH-1对多菌灵、扑海因和甲霜灵的敏感性测定结果显示,TH-1对多茵灵极敏感,而对甲霜灵具有很强的抗性．表明该木霉菌可与甲霜灵混用降低化学药剂的使用量,延缓病菌抗药性的产生。     

哈茨木霉TR-12对多主棒孢霉菌的拮抗作用

PDA平板拮抗试验表明,哈茨木霉对黄瓜褐斑病菌--多主棒孢霉菌有较强的拮抗作用,其孢子悬浮液的含孢量为105～108个·mL-1时,对多主棒孢霉菌的抑制率高达98.2%.通过哈茨木霉菌液与4种杀菌剂对多主棒孢霉菌抑制效果的比较试验,结果表明,哈茨木霉对多主棒孢霉菌的抑制作用较50%多菌灵和50%扑海因相对较差,但哈茨木霉菌孢子悬浮液含孢量为106个·mL-1的抑菌效果与75%百菌清相当,含孢量为108个·mL-1的抑菌效果与70%甲基托布津相当.     

哈茨木霉突变菌株hc-9对病原菌的拮抗作用

以哈茨木霉(Trichoderma harzianum)突变菌株hc-9和出发菌株hc为试验材料,在25℃条件下,将其分别与四种病原真菌(立枯丝核菌、茄镰孢菌、核盘菌和茄链格孢菌)进行对峙培养,以明确哈茨木霉突变株对病原菌的拮抗作用。结果表明:哈茨木霉突变菌株hc-9与出发菌株hc相比,对四种病原真菌(立枯丝核菌、茄镰孢菌、核盘菌和茄链格孢菌)的抑制率不同,但对同种病原菌抑制率相近。由此可知,哈茨木霉突变菌株hc-9拮抗能力没有因抗性突变而降低,且哈茨木霉突变菌株hc-9的重寄生能力与哈茨木霉出发菌株hc相比没有明显差异。     

高产IAA哈茨木霉突变株M95的筛选及其对黄瓜的促生作用

[目的]本文通过高能射线照射筛选获得哈茨木霉(Trichoderma harzianum)高产生长素(IAA)突变株M95,并研究其对植物的促生效应。[方法]利用X射线照射获得哈茨木霉突变体库,结合Salkowski比色法和高效液相色谱(HPLC)法筛选出IAA产量最高的突变株M95;利用Biolog FF微孔板法研究IAA高产突变株的碳源利用特性;利用荧光定量PCR法测定M95生长素生物合成相关基因的表达水平,并通过水培和盆栽试验探究M95对黄瓜的促生效果。[结果]从突变体库中筛选到38株优势菌株,其中M95的IAA产量较野生株NJAU 4742(WT)提高了20.51%;Biolog FF微孔板试验结果表明,M95在以D-果糖为唯一碳源的条件下生长速度最快并显著高于WT;荧光定量结果表明,M95中吲哚乙酰胺水解酶基因(iaaH2)和腈水解酶基因(nit2)的转录水平比WT分别提高了32.68和14.58倍。M95处理对黄瓜幼苗的促生作用显著优于WT处理,相对于WT处理,M95处理黄瓜株高、叶面积、地下部鲜重和干重,在水培条件下分别增加了14.79%、16.84%、31.41%和47...     

紫外光诱导哈茨木霉产生对多菌灵抗药性的菌株

在含多菌灵药物培养基上,采用紫外光重复诱导处理的方法,对拮抗性哈茨木霉T24进行改良,选育出对多菌灵具有显著耐药性的菌株T24—4和T24—6。结果表明,多菌灵浓度为300mg·L^-1时,对突变菌株T24—4和T24—6的抑制率分别为9．4％和3．0％。同时两菌株对速克灵和甲基托布津也有交互抗性。经过菌和药协同作用研究发现：木霉菌T24—6菌剂与多菌灵重量配比为8：2时,协同抑菌率高达85．0％,明显高于分别单独使用T24—6和多菌灵的抑菌率（70．3％和69．6％）。分别用菌和药,药,菌1000倍稀释液进行草莓活体拮抗性测定,其对草莓灰霉病的防治效果分别为83．9％、67．9％和64．2％,进一步表明菌和药协同作用效果优势更明显。在使用木霉T24—6菌剂防治农作物病害时,添加少量的多菌灵,可降低植物病原菌的活性和侵染力,从而提高生防效果。     

生防菌株哈茨木霉H-13固体发酵条件的研究

研究了生防菌株哈茨木霉H-13固体发酵的条件,探索了碳源、氮源、磷酸盐、固料比、接种量及发酵温度对产孢量的影响.通过单因素试验和正交试验确定固体发酵最佳条件为:麸皮、玉米粉按3∶1比例配伍,固料比水为 1∶0.4(g·mL-1),蔗糖1.5%,蛋白胨1.5%,硝酸铵1%,磷酸二氢钾0.05%,NaH2PO4 -Na2HPO4(0.5%～0.50%),接种量为9%(mL·g-1);发酵温度为24℃～22℃～26℃,在此条件下发酵10 d,产孢量高达1.0×1010个·g-1以上.固体发酵生产木霉分生孢子,与液体相比具有制作简单、成本低廉、孢子含量高、易于保存和运输等特点.     

哈茨木霉对甜瓜枯萎病病原菌的生防效果

为促进哈茨木霉菌在生产中的应用,通过培养皿试验和盆栽试验分析了哈茨木霉菌对枯萎病病原菌的抑制作用以及对甜瓜枯萎病抗性的影响。结果表明,在培养皿对峙试验中,发现哈茨木霉菌菌株DQ002及其挥发性物质和发酵液均能有效抑制枯萎病病原菌菌丝的生长,最高抑制率分别为77.18%、18.73%和22.79%;盆栽试验发现哈茨木霉DQ002可以有效缓解甜瓜枯萎病的发生,并且提高了甜瓜幼苗叶片和根部的PAL酶和β-1,3-葡聚糖酶活性。总之,哈茨木霉菌DQ002通过空间竞争及其发酵液和挥发物质明显抑制了枯萎病病原菌菌丝的生长,并通过提高甜瓜幼苗PAL和β-1,3-葡聚糖防御酶活性增强了甜瓜对枯萎病的抗性,降低了甜瓜枯萎病的发生率。     

哈茨木霉菌T6对茄子幼苗根部防御酶系的研究

以茄子的不同抗、感黄萎病品种为材料,研究苗期感染黄萎病菌后,根部组织内防御酶系的活性变化。结果表明:经哈茨木霉T6处理的不同抗、感茄子品种幼苗根系的PAL、POD、PPO和SOD存在明显变化,4种酶活性与对照相比均有一定程度的升高,但抗病品种的酶活性增加幅度高于感病品种。证明茄子根系经诱导后可产生植保素等相关物质参与抵抗黄萎病。     

芽孢杆菌两菌株对香蕉炭疽病菌的抑制作用及其机制*

 分离了两个芽孢杆菌（Bacillus sp.）菌株25-1和25-17,均对香蕉炭疽病菌（Colletotrichum musae Berket Curt.）有较强的拮抗作用。平板对峙培养出现明显的抑菌环;以凹玻片法,用两菌株培养滤液处理病原菌分生孢子,其孢子萌发率降低53%~ 69%;将细菌培养滤液和孢子悬浮液涂布于PDA平板上,则两者均能抑制香蕉炭疽病菌分生孢子的形成。普通光学显微镜和扫描电子显微镜观察显示,两菌株均可抑制香蕉炭疽病菌菌丝生长,造成菌丝分支增多,顶端和中央膨大,随着时间的延长畸变结构增加,菌丝成念珠状或菌丝分支显著增多,且顶端细胞变形膨大聚集成簇,菌丝壁穿洞,内含物质泄漏,终使细胞崩解和消融,变成球状的空泡。     

哈茨木霉菌诱导烟草抗黑胫病代谢差异的研究

为研究哈茨木霉菌对NC89接种烟草疫霉菌前后抗病相关代谢途径的影响,以烟草品种NC89为试验材料,设置四个处理：接种清水（NC89CK）、接种烟草疫霉菌谷（NC89_P）、接种哈茨木霉菌（NC89_T）、接种哈茨木霉菌后接种烟草疫霉菌谷（NC89_T_P）,利用超高效液相色谱与质谱联用技术（liquid chromatography-mass spectrometer,LC/MS）比较各处理抗病相关代谢通路的变化差异。结果表明,哈茨木霉菌对烟草疫霉菌有着较好的生防作用。代谢组学分析表明,筛选到893个差异代谢产物及其富集的代谢通路,涉及抗病相关的代谢途径20条;各处理间脂肪酸及其衍生物、黄酮和类黄酮、萜类、苯丙氨酸及其次生代谢物和泛酸等物质的含量存在显著差异,为进一步探究哈茨木霉菌对烟草疫霉菌的抑制机理奠定了基础。     

绿色木霉与哈茨木霉对黄瓜幼苗促生作用机理的研究

为探究绿色木霉和哈茨木霉对黄瓜幼苗生长的影响,设置4种处理:以绿色木霉和哈茨木霉混合菌液灌根处理的黄瓜幼苗、绿色木霉灌根处理的黄瓜幼苗、哈茨木霉灌根处理的黄瓜幼苗、PD培养基灌根处理的黄瓜幼苗,对株高、茎粗、叶宽、叶绿素含量和荧光特性、丙二醛(MDA)含量、过氧化物酶(POD)活性等进行测定。结果表明,与对照相比,施加混合木霉的黄瓜幼苗株高、叶宽、茎粗、叶绿素含量显著增加,最大光化学效率(F_v/F_m)、PSⅡ潜在活性(F_v/F_o)、光化学淬灭系数(q_P)、光合电子传递速率(ETR)、PSⅡ实际光量子产量[Y(Ⅱ)]以及POD活性显著增加,同时非光化学淬灭系数(NPQ)及MDA含量显著降低,表明绿色木霉和哈茨木霉混合菌液能够显著促进黄瓜幼苗生长,效果优于施加单种菌液。