6种植物中内生镰刀菌的分离和鉴定

对6种植物的内生镰刀菌进行分离和培养,通过显微形态观察对获得的菌株进行分类鉴定,并测定菌落生长速度和ITS序列,初步分析植物中内生镰刀菌的种类和分布情况.结果表明,共分离出62株内生镰刀菌,分属于6种镰刀菌,62株内生镰刀菌中以尖孢镰刀菌和茄病镰刀菌最为常见.     

篦子三尖杉内生真菌的分离鉴定和抑菌活性分析

珍稀濒危药用植物篦子三尖杉(Cephalotaxus oliveri Mast)是临床白血病药物三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的重要来源,因此,篦子三尖杉的内生真菌具有潜在的药用价值.通过从篦子三尖杉中分离纯化,筛选出16株外观差异较大的菌株,其中4株无产孢结构.经显微结构和ITS分子鉴定,发现其中11株属于链格孢属.抑菌试...     

一株拮抗香蕉枯萎病菌内生细菌的抑菌机制研究

采用生物化学方法,分析了一株香蕉内生细菌BEB99发酵液的乙酸乙酯粗提物对香蕉枯萎病菌4号小种(FOC4)的抑菌机制,结果表明,其对香蕉枯萎病菌菌丝脂质过氧化、麦角甾醇含量、蛋白质含量及果胶酶活性均有一定的影响,但不能产生几丁质酶。     

一株具有抑菌活性的平榛内生真菌的鉴定

[目的]本研究对平榛内生真菌zs-14进行形态学及分子鉴定,并筛选其对不同供试菌株的抑菌活性。[方法]活化斜面试管保藏的内生真菌菌株zs-14,液体发酵培养3～5d,采用液氮研磨法提取菌株zs-14的基因组DNA,应用PCR方法对内生真菌zs-14的ITS序列扩增,扩增产物经测序分析,同时结合菌落形态及乳酸-棉兰染色法的显微观察,最终鉴定内生真菌zs-14的种属;采用纸片扩散法筛选zs-14菌株的抑菌活性。[结果]zs-14菌株产生的分生孢子呈球形状,其菌落为毡毛状,菌落薄,皱缩,菌丝较致密,菌落中心呈浅绿色,最外层为白色。系统进化树结果显示其与Phoma sp聚为一类,因此鉴定内生真菌zs-14为茎点霉菌;纸片扩散法结果显示zs-14菌株发酵后只对金黄色葡萄球菌有抑制活性。[结论]平榛内生真菌zs-14具有产生抑菌活性物质的能力,研究结果可为下一步深入研究其抑菌代谢产物的种类提供科学依据。     

白术真菌病害的分离鉴定

2011年6— 8月份在浙江磐安地区采集到白术病害根、茎和叶片样本,经过室内分离试验得到4个根茎真菌分离物（分别记为R1~R4）与8个叶片真菌分离物（分别记为L1～L8）。依据科赫法则进行致病性测定,R1,R2为白术茎腐病病原菌,L3为白术叶斑病病原菌。通过形态学观察及分子鉴定方法确定R1为尖孢镰刀菌Fusarium oxysporum,R2为半裸镰刀菌Fusarium incarnatum,L3为长柄链格孢菌Alternaria longipes。     

1株大蒜内生真菌的分离鉴定及抗病原真菌活性

大蒜(Allium sativum L.)为百合科葱属多年生草本植物,富含生物活性成分及营养物质。采用组织分离法对新鲜健康的大蒜蒜瓣进行内生真菌的分离纯化,获得一株乳白色真菌KLBMPGC013;通过形态特征和ITS序列分析鉴定该菌株为白地霉(Geotrichum candidum);将该菌株菌悬液接种在健康大蒜蒜瓣上进行培养,大蒜蒜瓣未出现明显病斑,说明该菌株对大蒜无致病性影响;以4种植物病原真菌为指示真菌检测该菌株的抑菌活性,结果显示,该菌株能抑制2种指示真菌的生长;采用蒽酮硫酸法检测该菌株产胞外多糖含量,结果显示,其胞外多糖浓度为2.89 mg/mL。通过提取该菌株胞外粗多糖并检测其抑菌活性发现,该内生真菌粗多糖对大蒜白腐小核菌的抑制作用较好,对西瓜壳二孢稍有抑制作用。     

一株来自红树内生拮抗真菌的鉴定

红树内生真菌在病害的生物防治方面有重要作用。本研究从秋茄的叶片和茎部共分离获得15株内生真菌,经对峙培养试验,有61.54%的菌株对目标病原菌蓖麻枯萎病菌有拮抗作用,其中从叶片组织中分离的内生真菌菌株MKA-5作用最明显。经形态学研究显示,该菌株菌落浅灰色至深灰黑色。分生孢子暗褐色,倒棒形或椭圆形,多数无喙,有纵横隔膜,分隔处溢缩,壁光滑,大小为7.0-18.5×3.0-8.8 μm,形态特征与链格孢 (Alternaria alternata)一致。进一步对该菌株的分子生物学研究,结果表明该菌株的ITS系列与链格孢模式菌株的同源性为100%。综合分析,拮抗菌株MKA-5鉴定为链格孢(A. alternata)。该菌株的鉴定对蓖麻枯萎病的生物防治有重要作用。     

通过ITS序列分析鉴定云南重楼内生真菌

采用组织分离法从云南重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)根、根状茎和叶3个部位的组织块中分离出内生真菌,并对这些内生真菌进行了传统形态学和分子生物学(ITS序列)鉴定。共分离到内生真菌26株,鉴定为8属9种,其中从叶中分离出24株,从根中分离出2株,鉴定为1属1种,即球毛壳菌(Chaeto miumglobosum)。在分离出的9种内生真菌中,优势菌种为1号菌和3号菌,分别被鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和博宁炭疽菌(Colleto trichumboninense),分离率分别为23.07%和19.23%。     

曼陀罗内生真菌代谢产物抗皮肤致病真菌活性成分研究

[目的]研究曼陀罗植物内生真菌Ym311977菌株代谢产物的抑菌活性及其有效成份。[方法]对Ym311977菌株进行扩大发酵培养,从发酵产物中分离单体化合物,并研究单体化合物对2株皮肤致病真菌的体外抑制活性。[结果]分离到的4种单体化合物中的1种对2株皮肤致病真菌（石膏样小孢子菌、石膏样毛癣菌）的最低抑菌浓度分别为50、200μg/ml;该化合物经1HNMR及13CNMR分析,确定其结构为5-丁基吡啶甲酸,即镰刀菌酸。[结论]该研究首次报道了曼陀罗内生真菌代谢产物镰刀菌酸对2株皮肤致病真菌具有抑制活性。     

通过ITS序列分析鉴定云南重楼内生真菌

采用组织分离法从云南重楼(Paris polyphylla var.yunnanensis)根、根状茎和叶3个部位的组织块中分离出内生真菌,并对这些内生真菌进行了传统形态学和分子生物学(ITS序列)鉴定。共分离到内生真菌26株,鉴定为8属9种,其中从叶中分离出24株,从根中分离出2株,鉴定为1属1种,即球毛壳菌(Chaeto miumglobosum)。在分离出的9种内生真菌中,优势菌种为1号菌和3号菌,分别被鉴定为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和博宁炭疽菌(Colleto trichumboninense),分离率分别为23.07%和19.23%。     

除虫菊愈伤组织的诱导和继代

以除虫菊茎尖为外植体,MS培养基为基本培养基,对除虫菊愈伤组织的诱导和继代进行了系统研究。结果表明:外源激素2,4-D与KT的9种配比中,1.0与0.4mg/L的激素组合对除虫菊愈伤组织的诱导率可达88.0%;当蔗糖质量浓度为10～40g/L时,蔗糖质量浓度的大小与愈伤组织增长量成正比,与褐变开始时间呈负相关关系,当质量浓度为25g/L时,愈伤组织日平均生长量可达0.127g;适宜的光照时间可延长愈伤组织保存期并维持良好的组织结构,光照时间为4h/d时,愈伤组织褐化开始时间保持在27d左右。     

盐碱土壤中唐古特白刺内生真菌分离与鉴定

为探明唐古特白刺（Nitraria tangutorum Bobr.）的内生真菌种属及其组织分布特性,采用传统组织块法从生长于盐碱土壤的白刺中分离内生真菌,运用形态学和真菌ITS序列分析进行种属鉴定,并通过MEGA7.0构建系统发育树。结果显示,从白刺（根、茎、叶）分离得到23 株内生真菌,共鉴定出21 株,其中链格孢属（Alternaria）13 株,毛壳菌属（Chaetomium）1株,篮状菌属（Talaromyces）3 株,细基格孢属（Ulocladium）4 株,主要分布于唐古特白刺的根部,叶次之,茎则无。表明白刺内生真菌分布具有组织差异,根是其侵染和定殖的主要部位。     

双孢蘑菇内生菌分离鉴定研究

利用组织分离法、研磨法、印迹法3种分离方法对双孢蘑菇内生菌进行分离,共分离出内生细菌7株、内生真菌1株;对分离出的菌株进行纯化,并进行抑菌试验.结果表明,内生细菌AB-21菌株对青霉病原菌表现出强的抑制作用,进而对该菌株进行分类鉴定,形态学观察显示,该菌株为革兰氏阳性菌(G+),杆状,有芽孢;生理生化特性鉴定结果与病原库中芽孢杆菌属相符,同源率为95％;进一步对该菌株进行16S rDNA基因的扩增、测序,结果经美国国立生物技术信息中心(NCBI)数据库比对,与库中解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)相似度达100％.初步确定内生细菌AB-21为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens).     

杜仲内生真菌的分离及其鉴定

从杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的根、茎、叶中分离得到80株内生真菌,经显微形态特征观察鉴定为14个属,其中根部33株涉及10个属,茎部26株涉及9个属,叶部21株涉及6个属。结果表明,杜仲的不同部位内生真菌的数量、分布和种群存有差异。     

核桃内生真菌的分离鉴定

从核桃的根、茎、叶内分离到72株内生真菌,依据其形态特征,共鉴定出47种真菌;并对分离材料的表面消毒方式做了筛选,结果表明用75%的酒精消毒3min效果最佳。     

板栗内生真菌的分离及其鉴定

以研究板栗内生真菌的分布特性为目的,采用组织分离法,从板栗(Castanea mollissima)的叶、叶柄、茎韧皮部、茎木质部得到69株内生真菌,并利用直接调取制片法和裁片培养法,鉴定为14个属,其中叶部32株涉及8个属,叶柄11株涉及4个属,茎韧皮部25株涉及10个属,茎木质部1株涉及1个属。鉴定结果表明:板栗的不同部位内生真菌的数量、分布、种群及其组成存有明显差异性。为板栗的病虫害防治的进一步研究提供了一定的理论基础,具有一定的参考意义。     

大豆疫霉病拮抗内生真菌的鉴定与筛选

[目的]筛选出拮抗致病大豆疫霉的真菌菌株,为深入研发生物菌剂提供依据。[方法]采用平板对峙法测定40株野生大豆真菌对疫霉菌的抑制作用。[结果]供试的40株菌株,不同菌株间菌落型态差异较大。从光滑程度分析,36份菌落表面不光滑,3份表面光滑并显浅黄色;从菌落颜色分析,正面以白色为主,其次是黄色和粉色;反面则以紫色为主,其次为黑色和绿色;从菌落生长型态分析,大多数菌落呈白色絮状突起或羊毛状菌丝;11株野生大豆内生真菌的抑菌率变化幅度为62%~81%,80%以上共1株Y4-S(Ⅰ),75%~80%共2株,70%~75%共3株,其余5株均低于70%。抑菌率从大到小依次为Y4-S(Ⅰ)、Y5-r(Ⅱ)-1、Y6R-15-1、Y1-r-3和Y5R4、Y6S-26、Y5LB、Y5r-12、Y2-5(Ⅱ)、Y2-S、Y5R18-2-1。[结论]最强拮抗菌株Y4-S(Ⅰ)、Y5-r(Ⅱ)-1、Y6R-15-1显微型态相似,呈枝状,有隔,初步判断可能来源同一属,具体属种需要进一步判断。     

软枣猕猴桃内生真菌的分离纯化及分子鉴定

以软枣猕猴桃(Actinidia arguta)枝条为试验原料,采用内生真菌三步消毒法(乙醇-次氯酸钠-升汞)对样品进行表面消毒,从软枣猕猴桃枝条组织分离出一株内生真菌菌株,命名为Y1,对Y1进行核糖体18S rDNA克隆测定,获得长度为1 020 bp的18S rDNA序列,在NCBI数据库上进行同源性比对,构建18S rDNA系统发育树,并进行系统发育分析,鉴定该菌为子囊菌(Sac fungi)。     

中国红豆杉中产紫杉醇内生真菌的分离与鉴定

为了开发生产紫杉醇的新途径,以中国红豆杉根、茎、叶为试验材料,对其中产紫杉醇的内生真菌进行分离和鉴定。结果表明:从中国红豆杉中共分离出10株内生真菌,在PDA液体培养基中发酵后经薄层层析法检测,出2株能够产生紫杉醇,对产紫杉醇的菌株进行形态学鉴定表明,其中一株为青霉属,另一株为芽枝霉属。     

一株耐盐植物内生真菌的筛选与鉴定

[目的]研究盐田原生态系统中的耐盐植物内生真菌。[方法]对38株从海南省莺歌海盐场和东方盐场分离的菌株进行耐盐生长测试。[结果]发现了1株在8%Na Cl浓度下生长较好的真菌,并根据其形态特征,ITS扩增序列聚类进化树分析,显示其分类地位为黑酵母菌(Hortaea werneckii)。经过高效液相色谱分析其代谢产物,发现该真菌在0、2%、4%、8%Na Cl浓度下的发酵产物均有所不同。[结论]盐田生境中存在特殊的植物内生真菌区系,其中黑酵母菌Hortaea werneckii具有一定代表性,有深入研究的价值。