蜜蜂囊状幼虫病RT-PCR快速检测方法的初步应用

蜜蜂的囊状幼虫病是中华蜜蜂常见且为害严重的疾病,病原为小正链RNA病毒。实验通过RT-PCR的方法检测出了该病毒,经序列测定发现与广东的蜜蜂囊状幼虫病毒基因序列有所差别,推测可能是由于地区和蜜蜂种类差异导致的。     

谈谈中蜂囊状幼虫病的防治

谈谈中蜂囊状幼虫病的防治广东韶关市农业局（５１２０２６）戴元高中蜂囊状幼虫病（简称中囊病）是中蜂最难根治的一种传染病，它危害中蜂幼虫，来势凶猛，给各地发展中蜂生产带来很大威胁，严重时可使全场覆没。此病１９７０年在广东佛冈、黄花河等地猖獗，尔后逐渐蔓延...     

布鲁氏菌PCR快速检测方法的建立

布鲁氏菌病(简称布病)是重要的人兽共患传染病之一,它危害严重、流行广,每年因布病所造成的经济损失巨大,而且近十几年来布病又有上升的趋势.     

猪圆环病毒2型PCR快速检测方法的建立

根据GenBank公布的猪圆环病毒2型保守序列设计了一对引物,建立了检测猪圆环病毒2型PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该PCR方法对猪圆环病毒2型的扩增结果为阳性,而对对照毒株的扩增结果均为阴性;对猪圆环病毒2型检测的灵敏度为1pg总DNA量。以上结果表明该PCR方法特异性强、敏感性高、简便、快速,可用于猪圆环病毒2型的早期确诊和病毒鉴定。     

牛瘟PCR检测方法的建立

建立一个可以识别牛瘟病毒亚洲株的PCR方法。根据已发表的牛瘟病毒 7个毒株的F基因序列 ,设计合成了一对扩增跨幅为 43 6bp的引物 ,这对引物对日本之中村 系兔化牛瘟病毒感染的 Vero细胞毒和日本之中村 IV系兔化牛瘟病毒感染的兔血毒、组织毒进行 RT-PCR扩增 ,结果该方法对该牛瘟病毒 RNA的扩增取得了与预期大小一致的 RT-PCR产物 ,而对照样品的扩增全为阴性 ,说明具有很好的特异性 ;该方法最低可检测到 0 .1 6ng的牛瘟病毒RNA,具有很好的敏感性     

中华蜜蜂囊状幼虫病防治方法综述

中华蜜蜂囊状幼虫病(以下简称中囊病)是蜜蜂中常见的高传染性、高致病的蜂病,其致病性可能会导致患病蜂群覆灭,对中蜂养殖业造成巨大损失.总结了中囊病的诱发因素、发病规律、表征及防治方法等,以期为中蜂健康高效养殖及科学防治提供参考.     

辽宁地区中华蜜蜂囊状幼虫病的RT--PCR检测

蜜蜂的囊状幼虫病是中华蜜蜂常见且危害严重的疾病。通过RT-PCR方法,我们在辽宁地区检测出了该病,并且辽宁地区的蜂囊状幼虫病病毒与早期我国在广东地区检测到的中蜂囊状幼虫病病毒基因序列有所不同,推测中蜂囊状幼虫病病毒可能存在地区的差异性。     

蜜蜂球囊菌荧光PCR快速检测方法的建立及应用

以蜜蜂球囊菌ITS1、ITS2和5.8 S rDNA保守序列(U68313)为参考,设计一对特异性引物和一条TaqMan探针,建立了一种快速检测蜜蜂球囊菌的荧光PCR方法。该方法灵敏度达1 ng/μL的阳性DNA比常规PCR高10倍。检测的特异性高,与蜜蜂幼虫芽胞杆菌、蜂房蜜蜂球菌、蜜蜂败血杆菌无交叉反应,同时可避免常规PCR因电泳造成的污染。应用该方法对蜜蜂及蜂制品的实际样品和模拟样品进行检测,结果显示所建立的荧光PCR检测方法在4 h内即可报告结果,与传统病原菌分离培养、常规PCR相比较,该方法具有快速、灵敏、特异、重复性好等优点,可以用于蜜蜂及其制品中蜜蜂球囊菌的快速检测和进出境检疫。     

鸭瘟病毒PCR快速检测方法的建立及应用

根据Gen Bank公布的鸭瘟病毒UL30基因保守序列设计了1对引物,建立了检测鸭瘟病毒PCR方法,并对其特异性、敏感性进行了研究。该PCR方法对DPV扩增结果为阳性,对照毒株扩增结果均为阴性;对鸭瘟病毒检测的灵敏性为1pg总DNA量。以上结果表明该PCR方法特异性强、敏感性高、简便和快速,可用于鸭瘟的早期确诊和病毒鉴定。     

辽宁地区中华蜜蜂囊状幼虫病的RT-PCR检测

蜜蜂的囊状幼虫病是中华蜜蜂常见且危害严重的疾病。通过RT-PCR方法,我们在辽宁地区检测出了该病,并且辽宁地区的蜂囊状幼虫病病毒与早期我国在广东地区检测到的中蜂囊状幼虫病病毒基因序列有所不同,推测中蜂囊状幼虫病病毒可能存在地区的差异性。     

鳕鱼物种特异性鉴定的PCR方法研究

为了建立可对鳕鱼DNA进行特异性检测的PCR方法,应用在出口贸易中的鳕鱼疑似样品和保护执法工作中难以检查辨认的鳕鱼产品的物种鉴定,从GenBank数据库下载7个鳕属及其他5种鱼类的mtDNA细胞氧化酶Ⅱ(COXⅡ)基因序列,并用DNA Star7.0软件对上述不同鳕鱼的该基因碱基序列进行比较.在此基础上,综合考虑了设计...     

牛胚胎性别鉴定荧光定量PCR方法的优化与应用

旨在建立一种可检测牛早期胚胎性别的复合探针体系,减少常规PCR方法电泳所带来的污染,提高鉴定准确率,降低鉴定成本.本研究以SRY为牛胚胎性别鉴定的目标基因,以进口YCD-PCR性别鉴定试剂盒为对照组(n=9543),荧光定量PCR的单引物分别扩增体系(荧光单扩,FSPSA,n=6570)和双引物混合扩增体系(荧光双扩,...     

应用PCR方法检测奶牛乳房炎主要病原菌

为建立一种在分子水平快速检测乳房炎主要病原菌的方法,根据GenBank已发表的序列设计了3对特异性引物,结果可同时检测奶牛乳房炎的3种主要病原菌:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌。其特异性为100%,敏感性检测的最低浓度为:1.25×103cfu/mL。     

应用PCR方法检测奶牛乳房炎主要病原菌

为建立一种在分子水平快速检测乳房炎主要病原菌的方法,根据GenBank已发表的序列设计了3对特异性引物,结果可同时检测奶牛乳房炎的3种主要病原菌:金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌.其特异性为100%,敏感性检测的最低浓度为:1.25×103 cfu/mL.     

1种布鲁氏菌微滴式数字PCR检测方法的建立

本研究旨在构建1种布鲁氏菌(Brucella)微滴式数字PCR方法(droplet digital PCR,ddPCR).以布鲁氏菌BCSP31基因为靶基因,选取保守区域设计引物和探针,构建了布鲁氏菌微滴式数字PCR方法.然后优化了ddPCR反应中的引物、探针浓度及退火温度,并进行方法的灵敏度、特异性和重复性试验.结果...     

鸭疫里默氏菌的分离培养和PCR鉴定

对某鸭场送检的发病雏番鸭进行临床症状、病理变化观察、病原的分离和纯化,同时以外膜蛋白(OMPA)保守区设计一对特异性引物,PCR扩增,回收目的条带,进行测序与序列分析.结果表明,该菌为革兰氏阴性、无芽孢小杆菌,在TSA培养基上形成光滑圆形透明菌落,有荧光,不发酵糖,初步怀疑为鸭疫里默氏菌;PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳,在600 bp处扩增出了一条清晰的条带,回收目的条带,测序,并与genebank中序列比对,确诊该菌为鸭疫里默氏菌.     

PCR方法特异性鉴定狮源性制品

目的建立可对狮DNA进行特异性检测的PCR方法,应用在检验检疫过程中获得的狮疑似样品和保护执法工作中难以检查辨认的狮产品进行物种鉴定。方法针对狮属动物线粒体细胞色素b(Cytb)基因设计特异性引物,用该引物分别对从亚洲狮、非洲狮和虎、豹、熊等14种非狮源性哺乳动物的肌肉、血液、毛发和肉骨粉中提取的DNA进行PCR(聚合酶链反应)扩增。结果试验表明所设计的引物对狮DNA具有特异性,从而达到了对该物种进行特异性检测鉴定的目的。检测灵敏度可达到在骨粉中检出0.5%含量的狮源性成分。结论该PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复好等特性,可用于狮源性制品的检测鉴定。     

PCR法鉴定雏鸽性别的初步研究

雏鸽的雌雄外貌形态差别甚微,极难区别。为有效准确地鉴别雏鸽的性别,淘汰非目的性别,从而降低饲养成本,提高经济效益。本研究通过采用PCR方法,选定特殊的性别CHD1基因及鉴定引物,克隆出雏鸽特定性别基因序列鉴定雏鸽的雌雄。结果表明:在雏鸽雌性样本中扩增出1条带(777 bp),而雄性中未见扩增带,显示出CHD1基因的性别特异性,PCR扩增性别鉴定结果与样本解剖后对性腺观察的形态学鉴定结果也完全一致。在87份样品中,阳性克隆结果为25,阴性克隆结果为62,故87只雏鸽中雌鸽25只,雄鸽62只,其准确率达100%。     

猪胸膜肺炎放线杆菌快速PCR检测方法的建立

根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的 apx A基因序列设计了 1对可扩增 1个4 2 2 bp片段的特异性引物 ,成功地建立了一种检测 APP的快速 PCR方法 ,并确定了其特异性和灵敏性。对血清 1～ 13型等 13个 APP标准株均能扩增出预期 4 2 2 bp的特异性条带 ;对猪副嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌的扩增结果为阴性。对 APP菌液最低检出浓度为 6 8CFU/ m L(D6 0 0 为 0 .0 0 3)。 12株临床分离菌的 PCR扩增结果与生化鉴定结果是一致的。该方法能从病料中分离培养 8h的混合菌群中快速检测APP,可用于 APP的快速诊断和流行病学的调查。     

多重PCR对禽分枝杆菌亚种鉴定的初步应用

为了建立禽分枝杆菌多重PCR方法,给禽分枝杆菌亚种鉴定及禽结核病的诊断提供参考。本实验根据国外报道的诊断方法设计4对特异性引物,选用我国禽结核参考菌株（CVCC 68201）基因组DNA为模板,优化了退火温度,测定了DNA最小检测量,并进行了特异性检验。采用优化好的多重PCR体系,对国家兽医微生物菌种保藏中心保存的禽分枝杆菌标准菌株进行检测和分类。实验结果表明,禽结核参考菌株（CVCC 68201）能很好的扩增出577 bp（IS901基因片段）、385 bp（IS1245基因片段）和140 bp（dnaJ基因片段）三条目的条带,基因组DNA的最小检测量为0.38 ng/μL,目的条带在退火温度50 ℃～62 ℃之间均能得到有效扩增。对23株禽分枝杆菌菌株检测,并设立牛分枝杆菌作为阴性对照,最终将禽分枝杆菌菌株分为三大类：禽亚种/森林土壤亚种、副结核亚种、人猪亚种,与国家兽医微生物菌种保藏中心的分类结果相比不仅一致且更加详尽而有临床意义。因此,基于分子生物学方法建立的多重PCR方法可以对禽分枝杆菌亚型进行快速鉴定并对禽结核病的诊断提供参考。