寄生海水养殖鱼类的拟格拉夫涡虫的流行、危害与防治

自2000年10月中旬,在罗源湾发现一种罕见的能够寄生鱼类的涡虫,对其流行病学、形态学以及进化地位进行了大量的研究,结果表明：这种涡虫是一种未被报道过的新种,在福建省的各海水养殖区广泛流行,能够寄生于眼斑拟石首鱼（Sciaenops ocellatus）、大黄鱼（Pseudosciaena crocea）、鮸鱼（Miichthys miiuy）、牙鲆（Paralichthys olivaceus）、黑鲷（Sparus macrocephalus）和横纹东方鲍（Takifugu oblongus）等海水养殖鱼类的鳃、鳍及体表,造成寄生部位的严重损伤,鱼因呼吸困难或细菌的继发性感染而造成大量死亡,死亡率可达20％-60％;流行季节主要为秋季（8-11月）;水温22-26℃,盐度25-30。此外,提出了使用地下水,降低盐度、温度,合理用药等切实可行的防治本涡虫病的建议。     

翘嘴红鲌肝脏G6Pase催化亚基的克隆以及摄食和饲料中碳水化合物对其表达的影响

本文采用RT-PCR和RACE法分离、克隆了翘嘴红鲌G6Pase催化亚基基因全长cDNA,共1900 bp [不含poly(A)], 包括49 bp 5'非翻译区,1068 bp阅读框以及含Poly(A)信号AATAAA的778 bp 3'非翻译区[不包括Poly(A)].阅读框共编码355个氨基酸,分子量为39.89 ku.序列比对分析表明翘嘴红鲌G6Pase与斑马鱼G6Pase的相似性高达95%,与鼠、狗、人G6Pase的相似性为63%,和光滑爪蟾、金头鲷、河豚等G6Pase的相似性分别为69%、55%、76%,并具有G6Pase特有的3个保守基序.为了研究摄食以及饲料中碳水化合物对G6Pase的影响,使用实时定量RT-PCR分别测定了饲喂等能但不含碳水化合物和含23.98%碳水化合物的饲料的翘嘴红鲌肝脏G6Pase基因的表达水平,在使用上述饲料饲喂8周后,禁食48 h, 然后测定禁食和摄食后3、6、12、24 h G6Pase mRNA的表达量,结果显示摄食后12 h,两组G6Pase的表达明显增加,说明摄食影响G6Pase基因的表达,禁食和摄食后3～12 h,含糖组G6Pase基因的表达量为无糖组的2～4倍,这表明碳水化合物可以诱导G6Pase mRNA的表达.     

翘嘴红鲌PEPCK基因的克隆和序列分析

采用RT-PCR和RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）法,分离和克隆翘嘴红鲌（Erythroculter ilishaeformis）磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）基因的全序列,得到2 564bp[不含poly（A）]的全长cDNA,包括111bp5′非翻译区,1 911 bp阅读框以及含Poly（A）信号AATAAA的542 bp3＇非翻译区[不包括Poly（A）].阅读框共编码636个氨基酸,计算的分子量为69.65 kD.该序列含有PEPCK特有的结合草酰乙酯的结构域以及与GTP三磷酸链和Mg^2＋结合的激酶1和2基序.与其他鱼PEPCK的相似性高达83%～96%,和爪蟾、变形虫等其他动物的相似性为50%～69%.[中国水产科学,2006,13（3）：389 396]     

翘嘴红肝脏G6Pase催化亚基的克隆以及摄食和饲料中碳水化合物对其表达的影响

采用RT-PCR和RACE法分离、克隆了翘嘴红G6Pase催化亚基基因全长cDNA,共1900 bp ［不含poly(A)］, 包括49 bp 5′非翻译区,1068 bp阅读框以及含Poly(A)信号AATAAA的778 bp 3′非翻译区［不包括Poly(A)］。阅读框共编码355个氨基酸,分子量为39.89 ku。序列比对分析表明翘嘴红G6Pase与斑马鱼G6Pase的相似性高达95%,与鼠、狗、人G6Pase的相似性为63%,和光滑爪蟾、金头鲷、河豚等G6Pase的相似性分别为69%、55%、76%,并具有G6Pase特有的3个保守基序。为了研究摄食以及饲料中碳水化合物对G6Pase的影响,使用实时定量RT-PCR分别测定了饲喂等能但不含碳水化合物和含23.98%碳水化合物的饲料的翘嘴红肝脏G6Pase基因的表达水平,在使用上述饲料饲喂8周后,禁食48 h, 然后测定禁食和摄食后3、6、12、24 h G6Pase mRNA的表达量,结果显示摄食后12 h,两组G6Pase的表达明显增加,说明摄食影响G6Pase基因的表达,禁食和摄食后3～12 h,含糖组G6Pase基因的表达量为无糖组的2～4倍,这表明碳水化合物可以诱导G6Pase mRNA的表达。图5参21 关键词：快速扩增cDNA末端;葡萄糖6磷酸酶;碳水化合物;翘嘴红;实时定量PCR E-mail:gexp@ffrc.cn     

饲料脂肪对翘嘴红鲌生长、葡萄糖激酶和葡萄糖-6-磷酸酶活性与基因表达的影响

选用360尾翘嘴红鲌(Erythrocutler ilishaeformis Bleeker),体质量约40g。随机分成为2组,分别为高脂组(脂肪质量分数19.93%,碳水化合物质量分数14.45%)、低脂组(脂肪质量分数9.92%,碳水化合物质量分数12.38%),每组设3个重复,饲养8周。分别于摄食后0h、3h、6h、12h、24h测定血液指标、糖代谢酶葡萄糖激酶(Glucokinase,GK,E.C.2.7.1.1)以及葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase,E.C.3.1.3.9)活性及基因表达,并分析高脂肪与低脂肪水平日粮对翘嘴红鲌生长的影响。与低脂水平日粮相比,高脂水平日粮组血液甘油三酯水平和游离脂肪酸水平分别在摄食后3h、12h有增加现象,肝胰脏粗蛋白与脂肪含量有显著增加(P<0.05)。与低脂水平日粮相比,在摄食后3～12h高脂肪水平日粮组糖代谢酶GK的mRNA水平显著增加(P<0.05),但是日粮脂肪水平并不能显著影响GK活性(P>0.05)。在摄食后3～24h高脂肪水平日粮组糖代谢酶G6Pase的mRNA水平得到显著促进,并在摄食后24hG6Pase活性显著增加(P<0.05)。因此,摄食高脂肪水平日粮能增加肝胰脏粗蛋白与脂肪含量,造成翘嘴红鲌高血糖效应,诱导G6Pase酶活性及基因的表达,这可能是影响翘嘴红鲌碳水化合物利用的原因之一。     

横锦水库网箱养殖翘嘴红鲌的初试

利用2只5m×5m×2.5m无结节PE封闭式网箱,投放平均尾重0.24g、全长70～100mm翘嘴红鲌苗种计1.1万尾,放养密度为220尾/m2;经304d饲养,平均尾重达到200g,最大个体350g;群体净增重43.98倍,饲料系数1.51,成活率92%,净增产1979kg,利润801.60元/m2,投入与产出之为12.94.     

浙江省翘嘴红鲌养殖的问题与对策

翘嘴红鲌(Erythroculter ilishaeformis)分类上隶属鲤科、舶亚科、红鲌属，俗称白鱼。其广泛分布于我国长江中下游地区各大水域，肉质鲜美，是闻名遐迩的”太湖三白”之一。长期以来由于受捕捞强度及污染等各种因素影响，天然野生资源日趋减少，加之人民群众消费水平的提高，需求量不断上升，因此市场供求矛盾突出。     

兴凯湖翘嘴鲌的生物学研究与养殖概况

兴凯湖翘嘴鲌Culter alburnus是淡水珍品,也是黑龙江省鸡西市兴凯湖的特产鱼类。本文概括介绍了兴凯湖翘嘴鲌的生物学研究和养殖概况。兴凯湖翘嘴鲌生长快、快速生长期持续时间长。上世纪的过度捕捞,导致兴凯湖翘嘴鲌资源衰退,近年来采取了多项保护措施,兴凯湖鱼类资源已有所恢复。目前,兴凯湖翘嘴鲌已成为新兴的名优养殖鱼类,实现了全人工繁殖,开展了商品化苗种生产和食用鱼饲养,其增养殖在东北地区得到推广。近年来,诸多学者在兴凯湖翘嘴鲌的生物学特性、渔业资源现状、肉质性状、人工繁殖和胚胎发育特点、营养饲料研制等方面开展了深入研究,为科学保护与有效开发兴凯湖翘嘴鲌这一名贵鱼类资源提供了理论依据。     

翘嘴红鲌胃、肠道及肝胰脏主要消化酶活力的研究

对翘嘴红鲌胃肠道及肝胰脏的淀粉酶、脂肪酶、蛋白酶3种主要消化酶活力进行初步研究。结果表明:胃、肠道、肝胰脏的淀粉酶的最适pH均为6.0;脂肪酶的最适pH分别为8.0、8.0、7.5;胃蛋白酶最适pH为2.0,肠道、肝胰脏蛋白酶的最适pH分别为7.0、7.5。同时研究了在最适pH条件下,不同反应温度对3种主要消化酶的活性影响。结果表明:翘嘴红鲌淀粉酶在肝胰脏、肠道、胃的最适温度分别为30℃,30℃,25℃;脂肪酶的最适温度分别为40℃,30℃,35℃;蛋白酶的最适温度分别为50℃,50℃,40℃。在一定的温度范围内,3种消化酶的活力均呈先上升后下降趋势。最适反应温度下翘嘴红鲌脂肪酶与淀粉酶的活力分布均呈现肝胰脏>肠道>胃,蛋白酶活力肠道与胃接近,大于肝胰脏蛋白酶活力。     

翘嘴鲌、蒙古鲌形态特征及年龄与生长的研究

2005年12月对湖南津市西湖渔场采集的168尾翘嘴鲌和170尾蒙古鲌进行了形态特征及年龄与生长方面的研究。分别测定了其各种可数和可量性状,通过鳞片鉴定年龄,确定翘嘴鲌和蒙古鲌种群由1龄-6龄鱼组成。得出了两种鱼的形态特征,分析了体长、体重分布,年龄结构及体长、体重实测生长,并得到翘嘴鲌体长与体重的关系式为W=10^-2.1099L^3.0315（r=0．9900N=168）,蒙古鲌体长与体重的关系式为W=10^-1.8075L^2.8830（r=0．9319N=170）,用von Bertalanffy生长方程拟合,得翘嘴鲌Lt=82．2313（1-e^-0.2616（t-0.1964）,W=4960．8463（1-e^0.2616（t-0.1964）^3.0,体重生长拐点年龄约为ti=4．46a;蒙古鲌Lt=69．8625（1-e^0.2223（t＋0.1580）,Wt=3231．4675（1-e^0.2223（t＋0.1580）,体重生长拐点年龄约为ti=4．61a。     

鳜胃蛋白酶原基因cDNA全长的克隆与序列分析

利用RT–PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)克隆鳜(Siniperca chuatsi)胃蛋白酶原基因cDNA全长序列,并对该基因的结构特征和系统进化关系进行了分析。鳜胃蛋白酶原基因cDNA序列全长1367 bp,5′端非翻译区43 bp,3′端非翻译区187 bp,开放阅读框(ORF)1137 bp,共编码378个氨基酸。鳜胃蛋白酶原氨基末端存在信号肽和激活肽序列,序列中含有催化活性必需的2个天冬氨酸残基和构成二硫键的6个半胱氨酸残基。鳜胃蛋白酶原氨基酸序列与其他脊椎动物胃蛋白酶原氨基酸序列的同源性为59.9%～91.2%,表明胃蛋白酶原基因在脊椎动物的长期进化中比较保守。鳜胃蛋白酶原基因的成功克隆不仅为进一步研究该基因的时空表达奠定基础,而且为鱼类胃蛋白酶原的分子特征和进化提供了新的资料。     

缘管浒苔rbcL全长cDNA克隆与序列分析

对缘管浒苔光合作用第一关键酶Rubisco大亚基基因(rbcL)全长cDNA序列进行了克隆分离。首先应用RT-PCR方法获得了rbcL大片段cDNA序列,序列长度为1101bp,并进行了测序分析。然后分别应用5′RACE方法和3′RACE方法获得2个克隆序列,其序列长度分别为371bp和579bp,并进行了测序分析。在此基础上,将3个片段序列进行拼接,获得了Rubisco大亚基全长cDNA序列(1472bp),其中包括1425bp的编码区序列及47bp的前导序列(NCBI登录号:DQ813496),并推断出蛋白质序列(474个氨基酸)。对序列进行了相关生物信息分析和同源性比对,结果显示与已克隆出全长rbcL基因的7种绿藻比较具有较高同源性,核苷酸序列和蛋白质序列同源性分别达到了82.07%～85.78%和88.00%～94.11%,其中与蛋白核小球藻蛋白质序列同源性最高,为94.11%。在此基础上,使用生物信息学软件对缘管浒苔rbcL氨基酸序列与其它植物或藻类进行了多序列比对,并且进一步应用在线软件程序进行了蛋白质的二级结构分析和三级结构预测。     

RACE法分离团头鲂生长抑素全长cDNA及其序列测定

生长抑素具有抑制脑垂体GH释放的作用，是调控鱼类生长的主要激素之一。本研究采用RT和RACE(rapid amplification of cDNA ends)法，分离和测定了团头鲂脑中生长抑素PSSI cDNA的全长核苷酸序列，并对该基因进行了结构和系统进化分析。3’RACE扩增得到700bp左右的片段，5’RACE分离得到500bp左右的片段，把3’片段与5’片段拼接得到全长cDNA。cDNA全长735bp[不含poly(A)]，5’端非翻译区有100nt。3’端290bp[不包含poly(A)]，阅读框(open reading frame，ORF)345bp。该序列与金鱼PSSI cDNA序列同源性为90％，主要差异在5’端非翻译区。团头鲂生长抑素mRNA阅读框编码114个氨基酸，包括一些酶切位点，产生26个氨基酸的大分子态生长抑素，进一步加工成与人等结构相似的14个氨基酸的生长抑素；团头鲂生长抑素前体氨基酸序列与金鱼、虹鳟、鲶鱼、鲅鱇、蛙、牛、鼠、鸡、猴、人等的比较发现，它与金鱼的同源性最高达95％，与鮟鱇最低50％，与人68％。这说明生长抑素基因在长期的进化中相当保守，同时，也因为鱼类生活环境多样导致基因变异较大。     

西伯利亚鲟Sox9基因cDNA全长克隆、序列分析及其表达检测

为了研究Sox9基因在西伯利亚鲟侧线神经发育过程当中所起的调控作用,本研究利用RT-PCR和RACE方法获得了西伯利亚鲟Sox9基因cDNA全长序列,经序列分析表明,所克隆Sox9cDNA全长为1409bp,包括开放阅读框(open reading frame,ORF)1083bp,5′端非翻译区(untranslate dregion,UTR)19bp和3′端非翻译区(untranslate dregion,UTR)307bp。1083bp的ORF共编码360个氨基酸,相对分子质量为41221.7U。序列分析表明,其与施氏鲟的亲缘关系较近,其次是斑马鱼。经实时荧光定量PCR技术对西伯利亚鲟Sox9基因在各组织以及在胚胎发育各时期中的相对表达量检测发现,Sox9在西伯利亚鲟中的表达具明显的组织差异性和时间差异性。其中,在肝,肾,肌肉,胰中的相对表达量较低。然而,大脑组织中的表达量与以上4个组织相比,处于极高水平,达到胰脏中相对表达量8.9倍,达到表达量最低点肾脏中的近21倍。在胚胎发育的不同阶段,Sox9均有表达。在原肠期、神经胚期及视泡形成期,Sox9基因的表达量均较高,特别是在原肠期其表达量达到西伯利亚鲟...     

真鲷天然抗性相关巨噬蛋白全长cDNA的克隆与序列分析

Natural resistance associated macrophage protein (Nmmp) is an innate resistance protein to intracellular parasites, which is expressed plentifully in macrophage ceils. Nramp has been studied in mouse, human, cattle, rainbow trout and channel catfish.However, tittle was known about the structure of Pagrus major Nramp. In order to get the complete sequence of Pagrus major Nramp, a pair of primer is designed according to a 200bp known sequence of Pagrus major Nramp cDNA. By the use of SMART RACE, the full Nramp of Pagrus major cDNA about 5 000 bp was obtained, including about 200 bp 5‘ terminal region (UTR),complete encoding region and 3‘ terminal region. There were 3 ployA signals, which showed many possibilities of cutting at 3‘ terminal region. The character of Pagrus major Nramp nucleotide sequence and deduced amino acid sequence are analyzed. 12 putative transmembrane(TM) regions, a consensus transport motif (CTM), a predicted protein kinase C phosphroylation site and three predicted N-link glycosylation sites are indicated in its deduced amino acid sequence. The ‘consense transport motif‘ CTM is located etween TM8 and TM9. Furthermore, a protein kinase C phosphroylation site and three N-link glycosylation sites were predicted. The lignment of amino acid sequences between Pagrus major Nramp cDNA and several animals is analyzed and the deduced amino acid equence of Pagrus major Nrarnp had 77.8%, 83.0%, 82.3%, 80.0%, 81.1%, 60.4%, 70.3%, 58.5%, 69.5% identity ith rainbow trout α(AAD20721), rainbow trout β(AAD20722), channel catfish(AF400108), fathead minnow (AAF01778),common carp (CABal96), mouse 1 ( AAA39838 ), mouse 2 ( AAC42051 ), human 1 ( D50403 ), human 2 ( NP - 0(106(18 ),respectively. The alignment reveals high conservation in TM and CTM regions. Analysis result makes us get familiar with the structure nd character of fish Nramp, furthermore, offers some infonnat/on for the enhancement of immunity of fish and genetic amelioration on fish breeding.     

黄颡鱼脑P-450芳香化酶基因的克隆和组织表达

P-450芳香化酶（P450arom）是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶。本文采用RT-PCR和RACE法,首次分离和克隆了黄颡鱼脑P450芳香酶基因HP450aromB,并使用荧光实时定量RT-PCR对其组织表达进行了研究。结果表明HP450aromB cDNA全长2080bp（不包括poly（A））,5′端非翻译区有25bp,3′端555bp（不包含poly（A））,阅读框（open reading frame,ORF）1500bp,编码500个氨基酸,推测的蛋白质分子量为56kDa。同源性分析显示,HP450aromB的氨基酸序列与其它鱼脑P450arom具有70％以上的同源性,与其它鱼卵巢P450arom为60％左右同源,与人胚盘和鸡卵巢P450arom则为50％左右同源;但芳香化酶高保守区包括Ⅰ-螺旋区,芳香化酶特异保守区Ⅱ及血红系结合区Ⅲ和其它鱼芳香化酶相比同源性分别为83％～96％,78％～86％和85％～100％。系统发育分析表明HP450aromB与鱼类脑P450arom属于同一分支的,并且也显示了黄颡鱼和鲶鱼分类地位最近,这和传统的分类一致。实时定量RT-PCR研究显示,HP460arom B在前脑,下丘脑,垂体、卵巢、精巢均有表达,在肝脏没表达,表达量脑部高于性腺,但雌雄鱼脑部HP450aromB的表达总量没显著差异。     

广东紫菜Hsp70基因eDNA克隆与表达分析

为探索广东紫菜(Pyropia guangdongensis)叶状体Hsp70基因在温度刺激下机体耐温相关分子机制,为广东紫菜的栽培生产提供技术参考,本研究利用RACE技术获得了广东紫菜Hsp70基因(PgHsp70)全长序列,并在此基础上采用实时荧光定量PCR技术,研究广东紫菜叶状体分别在不同温度(22℃、27℃和31℃)条件下处理0、1/6、1/2、1、6、12、24和36 h后PgHsp70基因的差异表达。结果显示,PgHsp70基因序列长2004 bp,包含一个1866 bp的开放阅读框,可编码621个氨基酸,预测分子量为67.7 kDa,理论等电点为4.87。基因表达水平定量分析表明,温度对PgHsp70基因表达水平有显著影响,PgHsp70基因在不同温度的表达水平变化趋势基本一致,均呈现先上调后下降的趋势,且均于1 h表达量到达最高水平,其中,在31℃ 1 h表达量最高,为未经高温处理组的11倍,说明PgHsp70基因在应答高温胁迫中发挥着重要的作用。