复合酶制备抗氧化活性核桃多肽工艺优化

以碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶复合水解核桃蛋白制备抗氧化活性多肽的工艺条件优化为对象,通过研究酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力的影响,并利用正交试验优化工艺条件,以提高核桃蛋白多肽对DPPH·的清除率。结果表明,酶解时间、酶解温度、酶与底物浓度比及复合酶比例对核桃蛋白酶解物清除DPPH·能力有一定影响;当木瓜蛋白酶与碱性蛋白酶复合酶解温度为45℃、时间1.5h、酶与底物浓度1500U/g、pH值7.0、复合酶比例为2∶1时,酶解物清除DPPH·的能力最强,清除率达78.7%。     

碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化特性研究

采用碱性蛋白酶对核桃粕蛋白进行酶解,测定了不同酶解时间下的酶解液抗氧化性;用葡聚糖凝胶分离活性肽段并测定其抗氧化性。结果表明,酶解条件为酶用量3 000 U/g底物、底物质量浓度为40mg/mL、pH为8.5、温度为50℃下酶解210 min,酶解液的抗氧化活性较高,OH.清除率为72.3%,氧自由基清除率为83.1%,DPPH.清除率为102.6%,总抗氧化能力为162.986 U/mL;通过葡聚糖凝胶分离并与已知标准品对照表明碱性蛋白酶酶解核桃粕蛋白产物抗氧化活性多肽的分子量主要集中在1 321~607 u,该多肽片段对OH.清除率为70.23%,氧自由基清除率为62.57%,DPPH.清除率为99.56%,总抗氧化能力为118.987 U/mL。     

木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件优化及水解物抗氧化活性研究

[目的]研究采用木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的工艺条件及水解物的抗氧化活性。[方法]采用正交试验法确定木瓜蛋白酶水解核桃蛋白的最适工艺条件,采用Sephadex G-25凝胶色谱分离酶水解物,通过测定羟自由基（OH·）和超氧阴离子自由基清除能力研究了酶水解物的抗氧化活性。[结果]核桃蛋白木瓜蛋白酶水解的最优奈件是温度55℃,底物浓度4％,酶浓度60000U／g,pH值8．0;在水解度达到38．4％时,其酶解产物对羟自由基（OH·）和超氧阴离子自由基（O2·）的清除率分别为22．5％和46．4％。采用Sephadex G-25凝胶柱层析对水解度38．4％的酶水解物进行分离得到了A、B、C和D4个肽片段,其中肽片段c的自由基清除能力最大。[结论]核桃蛋白木瓜蛋白酶水解物具有一定抗氧化活性。     

牡蛎抗氧化活性肽的酶解工艺研究

以木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为工具酶,利用正交试验法确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备牡蛎抗氧化活性肽的最佳酶解工艺。结果表明:当时间为150 min、酶用量为6%、温度为45℃、pH为7.0时,木瓜蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强;当时间为110 min、酶用量为3%、温度为65℃、pH为6.0时,中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强。用SephadexG-15葡聚糖凝胶柱层析分析的结果表明,木瓜蛋白酶酶解液中最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1 191和826左右,中性蛋白酶酶解液最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1 074和735左右,其抗氧化活性峰值与蛋白肽在280 nm下的吸收峰值分别相吻合。     

牡蛎抗氧化活性肽的酶解工艺研究

以木瓜蛋白酶和中性蛋白酶为工具酶,利用正交试验法确定了木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解制备牡蛎抗氧化活性肽的最佳酶解工艺。结果表明：当时间为150min、酶用量为6％、温度为45℃、pH为7．0时,木瓜蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强;当时间为110min、酶用量为3％、温度为65℃、pH为6．0时,中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性最强。用SephadexG-15葡聚糖凝胶柱层析分析的结果表明,木瓜蛋白酶酶解液中最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1191和826左右,中性蛋白酶酶解液最佳抗氧化活性组分的相对分子质量为1074和735左右,其抗氧化活性峰值与蛋白肽在280nm下的吸收峰值分别相吻合。     

酶解鳙鱼蛋白制备活性肽的研究

以鳙鱼(Aristichthysnobilis)鱼肉蛋白为原料,采用木瓜蛋白酶对鳙鱼蛋白进行酶解,制备具有抗氧化活性的可溶性肽。研究酶浓度、底物浓度、温度、时间、pH对水解度和DPPH·自由基清除率的影响。通过正交试验设计对酶解工艺进行优化。结果表明,酶解的最佳条件是酶浓度1 400 U/g,底物浓度3.0%,温度60℃,酶解2 h,pH 7.0,在此条件下,所得可溶性肽的活性最高,对DPPH·自由基的清除率为69.09%,对羟自由基的清除率为75.22%,对O_2~-·自由基的清除率为61.92%。     

核桃蛋白中性蛋白酶水解物的制备及其抗氧化活性研究

[目的]研究制备核桃蛋白水解物的最佳工艺条件及水解物的抗氧化活性。[方法]以核桃蛋白为底物,采用正交试验研究制备其中性蛋白酶水解物的工艺条件,通过测定自由基清除能力研究酶水解物的抗氧化活性。[结果]制备核桃蛋白酶水解物的最优工艺条件为:温度40℃、底物浓度4%、酶浓度4 000 U/g、pH值8.0;核桃蛋白酶水解物的水解度与其对羟自由基(OH.)和超氧阴离子自由基(O2.)的清除能力有关,其水解度为24.2%时对羟自由基(OH.)和超氧阴离子自由基(O2.)的清除率分别为17.0%和52.0%。[结论]采用Sephdex G-25凝胶柱层析对水解度为24.2%的酶水解物进行分离,得到了A、B、C和D 4种肽混合物,其中,肽混合物C的自由基清除能力最大,肽混合物D最小。     

米糠蛋白抗氧化肽的制备及初步分离

试验以米糠蛋白为原料,制备米糠蛋白抗氧化肽。以DPPH自由基清除率为指标,采用正交试验,优化碱性蛋白酶酶解米糠蛋白制备抗氧化肽的工艺条件;采用超滤、SephadesG-25柱层析分离纯化米糠蛋白抗氧化肽。试验结果表明,制备米糠蛋白抗氧化肽的最优工艺条件为：酶解温度45℃,pH9．0,时间60rain,米糠蛋白底物浓度3％,碱性蛋白酶加酶量3000U·g-1。在米糠蛋白酶解产物中,Mrs〈5KDa组分的抗氧化活性最强,其对DPPH自由基清除率为68．7％。通过SephadexG-25凝胶层析柱进一步分离得到4个混合组分,混合组分Ⅱ活性最强,其DPPH自由基清除率为75．83％。     

酶法水解螺旋藻蛋白研究

[目的]研究木瓜蛋白酶对螺旋藻蛋白的水解作用。[方法]采用正交试验设计分析温度、酶浓度、pH值、水解时间对水解度的影响,利用葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25层析测定螺旋藻多肽分子量。[结果]木瓜蛋白酶水解螺旋藻蛋白的最适宜工艺参数为:温度55℃,酶与底物比0.4%,时间3 h,pH值6.0。[结论]当水解度为82.6%时,2个螺旋藻多肽洗脱峰的分子量分别为2 992和231 Da。     

复合酶法提取金银花多糖及其抗氧化性

本文旨在优化金银花多糖的复合酶法提取工艺,并评价金银花多糖的抗氧化活性。以不同复合酶(纤维素酶、果胶酶、木瓜蛋白酶)配比、液料比、pH、酶解温度、酶解时间为试验因素,以金银花多糖得率为考察指标,正交试验筛选复合酶法提取的最佳工艺条件;采用自由基清除能力体系评价金银花多糖的抗氧化活性。结果表明,复合酶最佳配比为纤维素酶2.0%,果胶酶2.0%,木瓜蛋白酶0.5%;复合酶酶解金银花提取多糖的工艺条件为液料比25:1(m L/g)、pH为4.5、酶解温度50℃、酶解时间60 min,在此条件下金银花多糖得率为12.36%;金银花多糖具有较强的抗氧化活性,对DPPH和O2-·自由基的半数抑制浓度分别为0.811 mg/m L、1.363 mg/m L,但与维生素C比较,抗氧化活性较弱。金银花多糖提取工艺方便可行,得率较高,提取到的多糖具有较强的抗氧化活性。     

鲮鱼蛋白酶解条件的研究

采用木瓜蛋白酶水解鲮鱼鱼蛋白,对酶解的工艺条件进行优化研究,分析酶浓度、底物浓度、温度、pH值、反应时间等因素对鲮鱼蛋白水解的影响。试验结果表明,木瓜蛋白酶水解鲮鱼蛋白的最佳条件为:酶浓度1.5%,底物浓度2.5%,酶解温度60℃,pH值6.0,反应时间3 h,在此条件下木瓜蛋白酶酶解鲮鱼蛋白所得酶解液中游离氨基态氮含量为585.20 mg/L。     

中性蛋白酶酶解谷朊粉制备抗氧化多肽研究

以谷朊粉为原料,采用中性蛋白酶制备抗氧化多肽,并对其酶解工艺进行优化。结果表明,对中性蛋白酶酶解谷朊粉制备抗氧化多肽的影响顺序依次为酶解温度>加酶量>酶解时间;通过响应面分析优化酶解条件为底物浓度8%,加酶量2 800 U/g,温度52℃,时间280 min,此时酶解液羟自由基清除率达到65.3%,多肽含量为60.4 mg/mL。     

木瓜蛋白酶水解罗非鱼蛋白质的工艺研究

[目的]探讨采用木瓜蛋白酶水解罗非鱼蛋白质制备多肽水解液的方法。[方法]通过单因素试验研究了不同因素对木瓜蛋白酶水解罗非鱼蛋白质的影响,并以水解度为指标通过正交试验确定了木瓜蛋白酶水解罗非鱼的最佳水解工艺。[结果]单因素试验表明,在酶解时间约5h、底物浓度为4%、加酶量约5500U/g、pH值为7.0～7.5范围内,温度为50℃时,木瓜蛋白酶水解罗非鱼效果较好。正交试验表明,3因素的影响顺序为:加酶量>底物浓度>水解时间;最佳水解工艺为:水解液pH值7.5,加酶量为5500U/g,底物浓度为4%,温度50℃,水解6h,在此条件下水解度可达到37.89%。[结论]采用木瓜蛋白酶进行水解可获得较高水解度的酶解液,且鱼香浓郁,颜色正常,可用于制作调味品、口服液等。     

河蚬酶解液抗氧化作用的研究

以河蚬为原料,对六种蛋白酶的酶解液清除羟自由基的能力进行研究。结果表明:河蚬经酶解后可提高清除羟自由基能力;不同蛋白酶酶解液对羟自由基清除率不同,木瓜蛋白酶酶解液清除能力最强;通过正交优化试验条件:底物质量浓度为40 g/L,木瓜蛋白酶用量为22000 U/g蛋白质,酶解温度45℃,pH=7.5,酶解2 h的酶解液,对羟自由基(.OH)的清除率可达到57.89%。     

响应面法优化酶解海洋低值鱼肉制备抗氧化肽工艺

[目的]优化碱性蛋白酶制备海洋低值鱼抗氧化肽的工艺。[方法]以DPPH自由基清除率为指标,在酶解温度、pH、加酶量、底物浓度等条件下进行单因素试验,在此基础上运用响应面法优化碱性蛋白酶酶解低值鱼肉制备抗氧化肽的工艺条件。[结果]在温度54℃、pH 8.8、底物浓度200 g/L、加酶量2 500 U/g的条件下酶解3 h,得到抗氧化肽的DPPH自由基清除率理论值为62.66%,实际值为61.87%,相对误差为1.26%。[结论]该研究为低值鱼抗氧化肽的开发利用提供理论依据。     

木瓜蛋白酶水解鸡骨泥制备短肽工艺优化

为了探究酶解鸡骨泥制备抗氧化肽的最佳工艺,研究了以木瓜蛋白酶酶解鸡骨泥时各因素对短肽得率的影响,以及制备的抗氧化肽对羟自由基、超氧阴离子自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除能力。试验探究了酶解过程中不同底物质量分数、加酶量、反应温度和反应时间对短肽得率的影响。采用响应曲面优化得到了以短肽得率为目标的木瓜蛋白酶酶解鸡骨泥的最优工艺,反应条件为:底物质量分数11.44%,加酶量211.11 mg·g~(-1),反应温度57℃,反应时间3 h,在该条件下酶解液短肽得率预期为59.20%,实测为58.87%±0.51%。采用优化工艺制备的抗氧化肽,在达到32 g·L~(-1)时与维生素C清除羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的能力相近,说明鸡骨泥肽具有一定的抗氧化活性。     

青蛤酶解物抗氧化活性研究

以DPPH自由基清除活性为指标对青蛤酶解条件(即时间、温度、pH、酶添加量和固液比)进行正交试验设计,研究了青蛤蛋白酶解物的抗氧化活性。结果表明,酶解条件为温度40℃、pH 11.5、酶添加量3000U/g原料以及固液比为1∶2(w/w)时,酶解物的DPPH自由基的清除活性最高。对最佳水解条件下所获得的酶解物进行抗氧化活性测试,内容包括DPPH自由基清除活性、超氧阴离子清除活性、羟基自由基清除活性和还原能力。结果显示,酶解物有较低超氧阴离子清除活性,但却具有较高DPPH自由基清除活性、羟基自由基清除活性和还原能力。     

宽体金线蛭抗氧化活性肽的分离纯化及体外活性研究

采用三水平四因素的正交试验,用木瓜蛋白酶酶解,以肽含量为指标确定了宽体金线蛭最佳酶解工艺,即加酶量7 500 U·g-1底物,酶解温度40℃,料液比1∶4(m/V),酶解时间4 h,最初p H 8.5;测定了酶解原液及其经CM Sepharose FF分离纯化后活性较强部分清除ABTS自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基的活性。结果显示,宽体金线蛭短肽有较高的抗氧化活性,尤其经CM Sepharose FF分离纯化后的组分清除ABTS、羟基自由基活性明显强于抗坏血酸,但其清除超氧阴离子自由基活性较抗坏血酸弱。收集合并经CM Sepharose FF分离后活性强的部分,用Sephadex G-25脱盐,Q-TOF检测,抗氧化活性肽分子量大多为130.96~330.34 u。     

鲍鱼性腺小肽的制备及抗氧化活性的初步研究

以雄性皱纹盘鲍性腺为原料,建立了蛋白酶酶解制备抗氧化活性蛋白肽的工艺条件．分别对木瓜蛋白酶和中性蛋白酶进行单因素研究,并以二者的复合酶为工具酶进行响应面分析．结果显示,雄性鲍鱼性腺的最优酶解条件为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶的比例为1：4、pH=6．6、酶解温度为53．7℃、酶解时间为70．4min．高效液相色谱（HPLC）分析结果表明,酶解液中多肽的分子质量主要分布在1ku以下．制备的酶解液具有较强的清除自由基效果,清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）的EC50值为6．8mg／mL,还原力的AC0.5值为12．87mg／mL．     

林蛙卵多糖的提取工艺及其抗氧化作用研究

【目的】研究木瓜蛋白酶解法提取林蛙卵多糖的最佳工艺,测定提取的林蛙卵多糖的抗氧化活性。【方法】以林蛙卵为材料,通过单因素试验和正交试验分析料(g)液(mL)比、木瓜蛋白酶加酶量、pH值和酶解时间对多糖提取率的影响,确定林蛙卵多糖的木瓜蛋白酶法最佳提取工艺;应用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法测定林蛙卵多糖的抗氧化活性。【结果】木瓜蛋白酶提取林蛙卵多糖的最佳条件为:料(g)液(mL)比1∶20,酶添加量为每g样品70mg,pH 6.0,酶解时间2.5h,在此条件下,林蛙卵多糖提取率为2.67%。林蛙卵多糖对DPPH自由基的半数清除率为1.81mg/mL。【结论】木瓜蛋白酶法对林蛙卵多糖的提取效果较好,林蛙卵多糖具有明显的抗氧化作用。