致蜜蜂大肚病黄杆菌的分离与鉴定

为更好地预防和控制蜜蜂大肚病的发生和蔓延,从患“大肚病”的蜜蜂中分离出致病菌,通过细菌镜检和培养,结果表明:此致病菌为G-球杆菌,不溶血,在普通肉汤培养基上呈乳白色圆形菌落,在SS培养基上不生长;该菌接触酶试验为阳性,不产生H2S,不能还原硝酸盐;经血清鉴定该菌为黄杆菌属.进一步药敏纸片试验分析表明,庆大霉素、硫酸阿米卡星对该菌的半数抑菌量(IC50)分别为8.73和36.92IU·mL-1,该菌对菌必治、环丙沙星高度敏感.用20~30IU·mL-1剂量的庆大霉素可有效地预防“大肚病”的发生和蔓延.     

猕猴桃采后致病菌的分离及中草药提取物对其抑菌效果初探

猕猴桃果实在常温下极易软化和腐烂变质,即使放置于0~4℃的低温冷库中,也很容易产生各种霉菌。为深入研究猕猴桃采后果实的主要致病菌,以湖南猕猴桃主产区病果为试材,分离筛选出3种具有较强致病性且具有独特性状的致病菌。经过初步筛选发现,川芎和高良姜提取物对3种致病菌均有较好的抑制作用。     

环境变化对中国野生蜜蜂多样性的影响

目的研究自主分离的罗伊氏乳杆菌LP4的益生特性及其对东方蜜蜂成年工蜂存活率、肠道菌群结构和抗菌肽mRNA表达量的影响。方法采用MRS培养基从东方蜜蜂肠道中分离乳酸菌,并进行分子生物学鉴定,使用琼脂打孔扩散法和滤纸片扩散法检测菌株的抑菌活性和抗生素敏感性,得到具有良好益生特性的罗伊氏乳杆菌LP4;选择300只东方蜜蜂成年健康工蜂,随机分为对照组和试验组,对照组饲喂蔗糖溶液,试验组饲喂含LP4的蔗糖溶液,在第3、6和9天检测蜜蜂死亡率、肠道菌群数量和抗菌肽mRNA的表达量。结果分离得到5株乳酸菌均为罗伊氏乳杆菌,其中LP4对大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和福氏志贺氏菌的抗菌活性最强,且对7种抗生素敏感;与对照组相比,第3、6和9天试验组的存活率分别提高8.32%、22.46%和39.5%,乳酸菌数量显著增加(P<0.05),肠球菌数量显著降低(P<0.05),抗菌肽Abaecin和Defensin mRNA相对表达量显著或极显著增加(P<0.05或P<0.01);第9天PPO mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。结论罗伊氏乳杆菌LP4具有良好的益生特性,饲喂东方蜜蜂成年工蜂后可通过改善肠道菌群结构和增强肠道免疫功能,提高存活率。     

嗜酸乳杆菌和婴儿双歧杆菌对肠道致病菌的抑制性

通过实验菌株发酵液对三种肠道致病菌生长抑制的研究 ,得出嗜酸乳杆菌 PB1、A878和婴儿双歧杆菌 PBa对致病菌的抑制性较强 ,形成明显的抑菌圈。 PB1、A878、PBa的抑菌机理主要是有机酸 ,其他抗菌类物质作用不明显     

中国东方蜜蜂的形态学及生物地理学研究

 用形态学研究方法对中国的东方蜜蜂(Apis cerana)的形态特征进行研究。东方蜜蜂的标本从中国大陆的34个样点采集而来，这些样点代表了东方蜜蜂在中国大陆不同气候带或地理区域分布的不同类型。 34个点共采集了220群蜜蜂的样，每群蜂测定分析15只工蜂，形态的测定特征参照Ruttner 1988年提出的测定标准进行。每只蜂总共有38个测定的形态特征。测定的性状特征的数据进行因素分析，集合分析和区辨分析；形态性状与生态环境因子相关性分析；并与周边国家东方蜜蜂的相关数据进行比较，发现:生活在吉林长白山温带阔叶林的东方蜜蜂个体较大、体色较黑，与日本、韩国的东方蜜蜂较为相似；来自亚热带常绿阔叶林的东方蜜蜂（甘肃天水、湖北和湖南）与云南北部、北京、尼泊尔的东方蜜蜂聚集为一类；而居住在南方热带季雨林如：福建、广东、广西和云南部分南方的东方蜜蜂与低海拔亚热带常绿阔叶林的东方蜜蜂（越南、中国四川和安徽黄山）聚集为另一类； 云南南方如：景洪、思茅、河口、镇康、元江、屏边、蒙自草坝和开远的东方蜜蜂形成独特的一个分枝，与泰国和缅甸的东方蜜蜂非常接近，同时与亚热带常绿阔叶林的东方蜜蜂相邻；值得关注的是，来自高寒湿地的东方蜜蜂（甘肃岷县）是目前在亚洲已经发现的东方蜜蜂中，其个体最大、颜色最深。在因素分析和集合分析里，它具有独特的位置。     

云南东方蜜蜂Apis cerana Fabricius的研究

 本文通过对云南省17个地(州、市)92个县124个点的东方蜜蜂进行形态测定及生物学特性观察,论述了东方蜜蜂在云南的地理分布、形态分化、地理变异和生产性能等方面的问题,确立了云南省的东方蜜蜂有3个亚种:印度亚种Apis cerana indica Fabricius,西藏亚种Apis cerana skorikovi Maa和指名亚种Apis cerana cerana Fabricius,同时提出了资源的利用意见。     

基于中华蜜蜂幼虫肠道转录组数据对东方蜜蜂基因组的基因结构优化及新基因鉴定

利用前期获得的中华蜜蜂(Apis cerana cerana)幼虫肠道转录组数据对东方蜜蜂(Apis cerana)基因组的已注释基因进行结构优化、对未注释的新基因进行预测、分析和鉴定:利用Cufflink软件对reads进行转录本重构,通过与参考转录本序列进行比较,共对3 366个东方蜜蜂的基因结构进行了优化;利用Cuffcompare软件将重构转录本与参考基因组进行比对,共预测出527个东方蜜蜂的新基因,其中234个新基因在Nr数据库中存在注释信息;随机选取12个新基因进行PCR鉴定,有11个能够扩增出符合预期的目的片段,表明多数预测出的新基因真实存在;GO分类和KEGG代谢通路分析结果显示上述新基因可能在东方蜜蜂的生长发育、物质代谢、遗传信息传递等方面具有重要功能。本研究结果丰富和完善了东方蜜蜂基因组的基因结构与功能注释信息,也为新基因的功能研究打下基础。     

金华地区东方蜜蜂的形态特征

从浙江金华8个样点采集40群东方蜜蜂样本进行16个形态特征的系统测量,同时采集吉林和广东东方蜜蜂做对照,利用SPSS 23.0进行因子分析、判别分析、聚类分析以及与环境因子的相关分析。结果表明:金华东方蜜蜂16个形态特征之间均存在极显著的变异性;16个形态指标均极显著小于吉林样本;除翅长、翅宽、基跗节宽和第三背板长与广东样本差异不显著外,其他形态指标与广东样本显著差异。与外群东方蜜蜂遗传分析表明,金华东方蜜蜂和广东样本为1个地理种群,吉林样本单独为1个种群,群体距离与地理距离相符。金华东方蜜蜂内部遗传分化成2个种群,武义新宅、磐安方前、婺城北山、兰溪马涧为1个种群,婺城长山、武义宣平、婺城塔石、永康方岩为1个种群。金华地区东方蜜蜂种群内遗传变异丰富,且变异可能与海拔和温度相关。     

一株乳酸菌的分离鉴定及在香蕉饮料发酵中的应用

本研究从美人蕉属植物根际土壤中筛选获得一株产酸菌株,经形态学、生理生化特征研究和16S rRNA基因序列分析,鉴定为一株植物乳杆菌,命名为Lactobacillus plantarum SYBC psL;以香蕉为原料,将Lactobacillus plantarum SYBC psL应用于香蕉饮料发酵,结果表明,当香蕉与水比例为1∶2、蜂蜜添加量为2.0%时,氨基酸、乳酸和黄酮的含量明显升高;当果葡糖浆添加量为10%时,产品酵素的黏度适当、酸甜适口,具有较高的稳定性。     

云南德钦东方蜜蜂形态学及分类地位研究*

 从云南德钦县的霞若、托顶两个乡镇共采集了8群东方蜜蜂的样蜂，每群测定分析15只工蜂，每只工蜂总共有38个测定的形态特征。测定的性状特征数据进行因素分析、主成分分析和聚类分析,并与云南省内其它县东方蜜蜂的相关数据进行比较。结果表明，德钦东方蜜蜂个体较大，身上的绒毛较长，与云南省内其它东方蜜蜂分开，独自形成一个类群。     

山西东方蜜蜂形态类群的研究

研究从山西4个地区采集214群样本,按照国际蜜蜂研究者认可的蜜蜂形态测定指标对东方蜜蜂样本进行41个形态特征的系统测量和分析,利用SPSS10.0进行一系列因子分析、判别分析、聚类分析、变异分析以及与环境因子的相关分析。结果表明:山西东方蜜蜂形态特征呈现两个主因素,第一因素与经度和纬度呈显著正相关,与海拔呈极显著正相关,与年均气温呈显著负相关,与年均降雨量不呈相关关系;第二因素只与年均气温有显著正相关,与海拔、经度、纬度和年均降雨量没有明显相关关系,41项形态特征中有16项与环境因子以不同程度和不同形式相关。肘脉b、肘脉指数以及第三腹板蜡镜间距离在晋城、运城、长治和离石四地区间有显著差异,第一基跗节长、前翅长、前翅宽、第六腹板长、第六腹板宽、第三背板长、第四背板长、第四背板绒毛带宽度1、第四背板绒毛带宽度2、小盾片Sc区色度以及上唇色度在四地区间差异极显著。Q型层次聚类分析结果是山西四地区东方蜜蜂聚为三类,各地区间东方蜜蜂交叉聚类,晋城东方蜜蜂聚在同一类里,而长治、运城和离石东方蜜蜂却分散聚在三类里。山西东方蜜蜂与山东、河北、河南以及北京东方蜜蜂一同进行聚类分析发现山西东方蜜蜂与纬度相近的河南及山东几个地区东方蜜蜂遗传距离较近,而与北京房山以及河北兴隆遗传距离较远。为我国东方蜜蜂资源的研究提供科学的理论基础数据,并为开发和保护我国濒危的东方蜜蜂资源奠定坚实基础。     

意大利蜜蜂响应东方蜜蜂微孢子虫胁迫的免疫应答

【目的】通过对意大利蜜蜂（Apis mellifera ligustica,简称意蜂）工蜂中肠响应东方蜜蜂微孢子虫（Nosema ceranae）胁迫的差异表达基因（differentially expressed gene,DEG）及免疫通路进行深入细致的分析,揭示宿主的细胞和体液免疫应答,为关键免疫应答基因的筛选及功能研究打下基础。【方法】基于前期获得的正常及东方蜜蜂微孢子虫胁迫的意蜂7日龄和10日龄工蜂中肠（Am7CK、Am7T、Am10CK、Am10T）转录组数据,按照FDR≤1,P≤0.05和|log₂ fold change|≥1的标准筛选出各组的DEG,利用相关生物信息学软件对DEG进行Pearson相关性分析、Venn分析、GO分类和KEGG代谢通路富集分析,进而对免疫通路富集基因进行统计和分析,利用实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR,RT-qPCR）验证转录组数据的可靠性。【结果】 差异分析结果显示,Am7CK vs Am7T比较组包含472个上调基因和385个下调基因;Am10CK vs Am10T比较组包含611个上调基因和360个下调基因。Venn分析结果显示,两个比较组特有的DEG分别为739和853个,共有的DEG为118个。GO分类结果显示,Am7CK vs Am7T比较组中上调和下调基因分别涉及23和29个功能条目,其中富集上调基因数最多的前5位分别为结合、催化活性、代谢进程、细胞进程和单组织进程;富集下调基因数最多的前5位分别为代谢进程、单组织进程、催化活性、细胞进程和结合。Am10CK vs Am10T比较组中上调和下调基因分别涉及36和26个功能条目,其中富集上调基因数最多的前5位分别为单组织进程、结合、细胞进程、催化活性和代谢活性;富集下调基因数最多的前5位分别为结合、细胞进程、催化活性、代谢进程和单组织进程。KEGG代谢通路富集分析结果显示,Am7CK vs Am7T比较组中上调和下调基因分别富集在38和33条代谢通路,富集上调基因数最多的前5条分别为胆汁分泌、内质网蛋白加工、泛素介导的蛋白水解、PI3K-Akt信号通路和神经营养因子信号通路;富集下调基因数最多的前5条分别为胞质DNA传感通路、嘌呤代谢、嘧啶代谢、RNA聚合酶和核糖体;涉及泛素介导的蛋白水解等3条细胞免疫通路,以及PI3K-Akt信号通路等7条体液免疫通路。Am10CK vs Am10T比较组中上调和下调基因分别富集在54和43条代谢通路,富集上调基因数最多的前5条分别为Hippo信号通路、药物代谢-细胞色素P450、P450对外源物质的代谢、泛素介导的蛋白水解和鞘脂类代谢;富集下调基因数最多的前5条分别为mRNA监测、鞘脂类信号通路、果糖和甘露糖代谢、半乳糖代谢和鞘脂类代谢;涉及泛素介导的蛋白水解等7条细胞免疫通路,以及NF-κB信号通路等2条体液免疫通路。RT-qPCR验证结果显示6个随机挑选的DEG的表达量变化趋势与测序结果一致,证实了本研究中测序数据的可靠性。进一步分析发现意蜂7日龄和10日龄工蜂中肠的NF-κB信号通路均被东方蜜蜂微孢子虫激活,随即启动了3种抗菌肽apidaecin、defensin-1和hymenoptaecin的合成,体现了它们在宿主抵御东方蜜蜂微孢子虫入侵中的重要性。【结论】在转录组水平解析了意蜂工蜂中肠对东方蜜蜂微孢子虫的免疫应答,揭示宿主在胁迫前期同时作出细胞和体液免疫应答,前者可能在抵御病原入侵方面发挥主要作用;宿主的细胞免疫在胁迫后期持续增强,但体液免疫较大程度地减弱;泛素介导的蛋白水解通路及富集DEG,NF-κB信号通路及富集DEG,以及抗菌肽编码基因apidaecin、defensin-1和hymenoptaecin可能在意蜂工蜂对东方蜜蜂微孢子虫的免疫应答中起到关键作用。     

乌蒙山系东方蜜蜂的形态学及分类地位研究*

 从云南水富县太平乡（4群）和贵州六盘水市盘县（3群）共采集了7群东方蜜蜂Apis cerana样本,每群测定分析15只工蜂,每只工蜂总共有38个测定的形态特征。测定的性状特征数据进行主成分分析,聚类分析和因素分析,并与云南省内其它县东方蜜蜂A.cerana的相关数据进行比较。结果发现,水富东方蜜蜂A.cerana个体较大,体色较浅,贵州六盘水东方蜜蜂A.cerana个体较小, 体色较浅,与云南省内南部东方蜜蜂A.cerana分开,与德钦东方蜜蜂A.cerana形成一个类群。     

河南东方蜜蜂的形态特征研究*

 通过测定河南8个不同样点的20群东方蜜蜂,每群15只工蜂,每只工蜂共有38个形态特征,测定的性状特征数据进行因素分析、聚类分析和区辨分析;形态性状与环境因子相关性分析;并与其它省份的相关数据进行比较,发现:河南东方蜜蜂种群内遗传变异较为丰富,其形态性状特征表现出较明显的地理变异性。河南东方蜜蜂种群形态性状的多态性、多型性及其地理变异式样,均具有生态适应意义。     

东方蜜蜂微孢子虫对密林熊蜂的致病机理

【目的】明确东方蜜蜂微孢子虫（Nosema ceranae）对密林熊蜂（Bombus patagiatus）的侵染性及致病机理。【方法】采用传统生物学和电镜超微结构观察的方法,结合qPCR定量分析对东方蜜蜂微孢子虫在密林熊蜂上的致病机理进行探讨。【结果】感染初期工蜂除取食减少和行动迟缓外无明显外观染病特征,感染后期工蜂萎靡、衰弱、飞翔无力。解剖后镜检发现中肠仅存少量孢子,但充满大量细菌;熊蜂肠道组织切片发现东方蜜蜂微孢子虫侵染中肠上皮细胞后导致核膨大并变形、线粒体体积变小甚至解体,内质网紊乱,但孢子只侵染寄主细胞质而不侵入细胞核,最终导致线粒体解体,细胞破裂;qPCR定量分析得出接种后3-4 d中肠和脂肪体中微孢子虫的感染量达到最高值,其它组织则基本未检测到。【结论】东方蜜蜂微孢子虫可侵染异源寄主熊蜂,致病机理为微孢子虫引起寄主中肠上皮细胞内溶物发生病变,并导致整个中肠上皮细胞的破裂和凋亡。     

微小RNA介导意大利蜜蜂工蜂对东方蜜蜂微孢子虫的跨界调控

[目的]东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)感染意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)导致蜜蜂微孢子虫病.本研究结合前期已获得的miRNA和mRNA组学数据,通过生物信息学方法对意蜂工蜂中肠的差异表达miRNA(differentially expressed miRNA,...     

东方蜜蜂幼虫封盖信息素含量及生物合成通路

[目的]在蜜蜂中,甲基棕榈酸酯(MP)、甲基油酸酯(MO)、甲基亚油酸酯(ML)和甲基亚麻酸酯(MLN)是重要的封盖信息素成分,它们触发成年工蜂对幼虫的封盖行为.本研究旨在比较封盖信息素化学成分在不同封盖时期的东方蜜蜂(Apis cernana)工蜂与雄蜂幼虫体内的含量,并分析其在幼虫体内的生物合成通路,进一步探索蜜蜂...     

中华蜜蜂幼虫肠道中微小RNA的鉴定及分析

[目的]利用small RNA-seq(sRNA-seq)技术和生物信息学方法对中华蜜蜂(Apis cerana cerana,简称中蜂)幼虫肠道的微小RNA(microRNA,miRNA)进行全转录组鉴定和分析,旨在丰富中蜂的miRNA信息,并为深入研究miRNA调控中蜂幼虫肠道发育的分子机理提供依据.[方法]利用s...     

微小RNA介导东方蜜蜂微孢子虫侵染意大利蜜蜂工蜂的分子机制

【目的】通过对东方蜜蜂微孢子虫(Nosema ceranae)纯化孢子与侵染意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica,简称意蜂)工蜂的东方蜜蜂微孢子虫的差异表达miRNA(DEmiRNA)及其靶mRNA进行系统分析,筛选、分析和探讨病原毒力因子和侵染因子相关的DEmiRNA及调控网络,在miRNA组学层面揭示东方蜜蜂微孢子虫对意蜂的侵染机制。【方法】利用small RNA-seq(sRNA-seq)技术对东方蜜蜂微孢子虫感染7 d和10 d的意蜂工蜂中肠和东方蜜蜂微孢子虫纯化孢子(NcCK)进行深度测序,通过连续比对rRNA数据库、西方蜜蜂(Apis mellifera)基因组和东方蜜蜂微孢子虫基因组筛滤出处于侵染过程的东方蜜蜂微孢子虫(NcT1和NcT2)数据和东方蜜蜂微孢子虫孢子的测序数据。根据P≤0.05,|log2 fold change|≥1的标准,通过比较分析筛选出各比较组中的差异表达miRNA(differentially expressed miRNA,DEmiRNA)。通过相关生物信息学软件对DEmiRNA进行表达谱分析,靶mRNA预测及功能和代谢...     

竹叶等植物提取物对畜禽致病菌抑菌效果的研究

为了在畜禽疾病防治中能充分利用当地资源和为进一步开发植物药提供科学依据,采摘当地生长的竹叶、枸骨叶、十大功劳分别采用水提醇沉法和乙醇回流法进行提取,然后使用其提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行药敏试验,同时测定最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。结果显示：1）十大功劳的乙醇提取液对金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌具有一定的抑菌效果,但竹叶及枸骨叶的乙醇提取液抑菌效果不明显;竹叶、十大功劳水提液对金黄色葡萄球菌以及大肠杆菌均表现出较强的抑菌效果,枸骨叶的水提物抑菌效果不明显,且十大功劳的抑菌效果最佳。2）十大功劳和竹叶对所有供试细菌均具有较好的抑菌效果,3种植物的抑菌效果表现为：十大功劳＞竹叶＞枸骨叶。3）3种植物对金黄色葡萄球菌抑菌活性强于对大肠杆菌的抑菌活性。