桦褐孔菌碱溶多糖提取工艺条件优化研究

[目的]优化桦褐孔菌碱溶多糖的提取工艺。[方法]以桦褐孔菌为原料,通过稀碱法提取碱溶多糖,以多糖得率为指标,采用单因素分析和正交试验测定碱溶多糖的最佳提取工艺条件。[结果]试验得出,桦褐孔菌碱溶多糖的最佳提取工艺为碱液浓度0.5mol/L、料液比1∶30 g/ml、提取温度80℃,在此条件下,桦褐孔菌多糖得率可达3.83%。[结论]研究可为桦褐孔菌的开发利用提供理论依据。     

桦褐孔菌多糖的优化提取及对小鼠高糖高脂诱导的非酒精性脂肪肝的影响

通过正交试验优化桦褐孔菌(Phaeoporus obliquus J. Schroet)多糖的提取,并作用于高糖高脂诱导的非酒精性脂肪肝小鼠,来探讨桦褐孔菌多糖对小鼠高糖高脂诱导的非酒精性脂肪肝病的作用效果。通过正交试验优化桦褐孔菌多糖的提取,将多糖作用于高糖高脂诱导的非酒精性脂肪肝小鼠,用ELISA方法检测小鼠血清中的相关指标。结果表明,与正常组比较,模型组小鼠肝脏明显增大,肝指数明显升高(P0.01),与模型组比较,优化提取的不同浓度桦褐孔菌多糖提取物使小鼠肝脏指数明显下降,对肝脏有不同程度的改善,空腹血糖值下降明显(P0.01),高浓度给药组(120 mg/kg)使小鼠血清中TC、LDL-C、HDL-C及ALT水平下降较明显(P0.01),但TG水平变化不大。病理切片结果显示,桦褐孔菌多糖提取物给药组小鼠肝细胞破坏程度有明显改善,高浓度给药组小鼠肝细胞排列更紧密,中央静脉受累情况有明显改善,说明桦褐孔菌多糖提取物对高糖高脂诱导的小鼠非酒精性脂肪肝有一定的治疗效果,其机制可能是与降低血脂有关。     

桦褐孔菌多糖的提取及含量测定方法的研究

采用水提醇沉法提取桦褐孔菌粗多糖,并利用苯酚-硫酸比色法,以葡萄糖为标准品,测定桦褐孔菌菌核及其粗多糖中多糖的含量.结果表明,桦褐孔菌粗多糖得率为17%,桦褐孔菌菌核中多糖含量为2.068%,桦褐孔菌粗多糖中的多糖含量为22.43%.该方法桦褐孔菌粗多糖得率高,加样回收率在99%以上,且5 h内显色稳定,重现性好,适合用于中药桦褐孔菌多糖的提取及含量测定.     

桦褐孔菌粗多糖对急性弓形虫感染雄性小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

[目的]探讨桦褐孔菌粗多糖对弓形虫感染小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。[方法]用3种剂量桦褐孔菌粗多糖治疗弓形虫感染所致的睾丸生精障碍小鼠,使用流式细胞仪检测生精细胞凋亡率,并设立空白对照组、阴性对照组和阳性对照组进行对比。[结果]与阴性对照组比较,桦褐孔菌粗多糖高剂量组的睾丸生精细胞凋亡率极显著降低（P〈0.01）中剂量组及阳性对照组的睾丸生精细胞凋亡率显著降低（P〈0.05）。[结论]桦褐孔菌粗多糖具有修复睾丸病理损伤并降低睾丸生精细胞凋亡率的作用。     

桦褐孔菌发酵条件的优化及体外降糖作用的研究

[目的]研究桦褐孔菌的潜在应用价值,并分析其菌丝体多糖的降糖作用.[方法]以生物量和粗多糖含量为指标,通过单因素试验与正交试验设计方法对其发酵条件进行优化.将桦褐孔菌菌丝多糖对糖尿病模型小鼠进行灌胃,测定小鼠血糖变化.[结果]促进该菌株发酵生长的最佳碳源、氮源分别为葡萄糖和牛肉膏;最佳培养基组成为葡萄糖30 g/L,蛋白胨4 g/L,牛肉膏8 g/L.摇床培养条件为pH 7.0,装液量90 mL/250 mL,接种量15％,发酵时间12 d.与模型组相比,桦褐孔菌菌丝多糖能显著降低糖尿病小鼠血糖.[结论]该研究可为工业化生产桦褐孔菌多糖及实际应用提供参考.     

营养条件对桦褐孔菌菌丝生长及多糖含量的影响

进行了不同碳源、氮源、微量元素对桦褐孔菌菌丝生长及多糖含量影响的试验．结果表明，桦褐孔菌菌丝生长的最适碳源为麦芽糖和葡萄糖，不同氮源和微量元素对菌丝生长均无明显影响；选用麦芽糖、Ca（NO3）2或蛋白胨、CuSO4或MnSO4的培养基菌丝多糖含量最高．     

超声-微波辅助提取桦褐孔菌多糖的工艺研究

[目的]探讨超声-微波辅助技术提取桦褐孔菌多糖的最佳工艺条件。[方法]以水作为提取溶剂,用超声-微波辅助提取桦褐孔菌多糖,通过响应面分析法考察微波功率、微波处理时间和料水比对桦褐孔菌多糖得率和纯度的影响,优化超声-微波提取桦褐孔菌多糖的工艺参数,并和传统水浴浸提法进行比较。[结果]超声-微波辅助技术提取桦褐孔菌多糖的最佳工艺条件为:提取时间18.45～24.50 min,料液比1∶20,微波功率88.3～96.7 W。与传统的水浴浸提法相比,超声-微波提取法可大大缩短提取时间,得率由2.12%增加到3.25%,纯度由64.03%增加到73.16%。[结论]与传统的水浴浸提法相比,超声-微波提取法不仅缩短了提取时间,而且提高了桦褐孔菌多糖的得率和纯度。     

桦褐孔菌不同提取物抗弓形虫效果的比较

为了探讨桦褐孔菌不同提取物抗弓形虫的效果,对桦褐孔菌水煎剂、多糖、白桦脂醇的体外抗弓形虫作用和对感染弓形虫小白鼠的治疗效果进行了比较。结果表明,体外试验中3种提取物均能抑制弓形虫的生长和繁殖,其中多糖组的抗虫效果优于其他2组,但试药组均弱于阳性对照组;在染虫试验中,桦褐孔菌多糖组中小白鼠平均存活天数与阳性对照组比较无显著性差异,表明桦褐孔菌多糖体内抗虫效果较好。     

桦褐孔菌发酵产物的抑菌活性

测定了桦褐孔菌(Inonotus obliguus(Pers.:Fr.)Pilát)发酵产物对植物病原菌的抑菌活性.结果表明:桦褐孔菌发酵产物对7种病原菌均有抑制作用;发酵时间为23d的桦褐孔菌发酵产物对落叶松枯梢病(Botryosphaeria laricina)、杨树烂皮病(Cytospora chrysosperma)的抑制率最高;桦褐孔菌发酵产物的主要抑菌活性物质存在于发酵上清液醇提物中;醇沉级别为70％的醇提物中50 g·L-1的多糖对病原菌的抑制率最高,当质量浓度为55g·L-1时能抑制50％以上落叶松枯稍病原菌孢子的萌发.     

不同维生素对桦褐孔菌生长及三萜类化合物积累的影响

通过对4种不同维生素B诱导后的桦褐孔菌的生长量、三萜类化合物积累及三萜代谢途径相关酶活性进行检测。发现VB₁、VB₃、VB₆、VB₁₂在一定质量浓度范围内均能对桦褐孔菌的生物量和三萜质量分数积累具有一定促进作用，其中质量浓度为10 mg/L VB₁₂诱导后效果最好，生物量是对照组的1.45倍，三萜质量分数是对照组的2.03倍；当质量浓度为20 mg/L VB₁₂诱导后，桦褐孔菌生物量是对照组的1.42倍，三萜质量分数是对照组的2.64倍。发酵第10天，在这4种不同维生素B诱导下，桦褐孔菌的法尼基焦磷酸合酶、角鲨烯合酶的活性也受到一定的影响。研究结果表明：维生素有利于桦褐孔菌的生长，促进了桦褐孔菌三萜代谢过程的进行，提高了桦褐孔菌三萜的产量。     

山西桦褐孔菌的鉴定与固态发酵初步研究

[目的]对采自山西吕梁山南段的关帝山地区的桦褐孔菌进行了初步鉴定和固态发酵研究。[方法]通过对山西桦褐孔菌形态特征鉴定、分子生物学分析、环境条件研究、品质鉴定等来对其进行初步鉴定,并采用山西常见的10种杂粮谷物对桦褐孔菌进行了固态发酵研究。[结果]发现山西桦褐孔菌形态与采自大兴安岭的桦褐孔菌相比基本一致,环境条件相差很大,而品质则不分高下,尤其是多糖含量与钾元素含量极高,具有很高的开发利用价值。[结论]试验采用的10种杂粮谷物都可以用来作为“桦菌谷物发酵食品原料”,发酵过程中的菌丝体生长趋势基本保持一致,但是在同一发酵基质中的不同阶段,其生长速度有显著差异,在实际生产“桦菌谷物发酵食品原料”时,可以根据其生长特点选择特定的装料量和发酵时间,来减少生产投入、降低成本、缩短生产时间,并获得最优质的桦褐孔菌谷物发酵产物。     

姬松茸多糖诱导HepG2 细胞凋亡的线粒体通路研究

为探讨姬松茸多糖诱导HepG2细胞凋亡过程中线粒体膜电位和细胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的变化.以人肝癌细胞系HepG2细胞为对象,使用流式细胞仪检测姬松茸多糖对HepG2细胞凋亡及线粒体膜电位的影响,激光共聚焦显微镜检测HepG2细胞[Ca2+]i的变化.结果表明姬松茸多糖能显著诱导HePG2细胞凋亡,并不同程度降低HepG2细胞线粒体跨膜电位,升高细胞[Ca2+]i,造成钙稳态失衡.姬松茸多糖诱导HepG2细胞凋亡的机制与降低线粒体膜电位,造成细胞内Ca2+超载有关.     

桦褐孔菌不同菌株培养特性及人工栽培比较

以来自不同国家及地区的21个桦褐孔菌菌株为试材,比较菌丝长势、长速、干重及多糖产量,并分别对每个国家的1个菌株进行人工栽培比较．结果表明,不同国家的桦褐孔菌菌株菌丝培养特性及菌核形成特性明显不同,其中,中国菌株JL01菌丝长势最强,长速最快,达3．62mm／d;中国、芬兰和朝鲜菌株均产生菌核,但中国菌株的菌核干重、生物学效率及多糖产量显著高于其它2个菌株,生物学效率达27％．     

双氢青蒿素体外抑制新孢子虫和弓形虫试验

为确定双氢青蒿素体外抑制新孢子虫和弓形虫的作用效果,该试验在开展双氢青蒿素细胞毒性试验的基础上,对新孢子虫和弓形虫进行了体外抑制试验,同时与青蒿素、桦褐孔菌多糖、黄芩苷、乙胺嘧啶等药物进行了比较.结果表明:双氢青蒿素与青蒿素、桦褐孔菌多糖、黄芩苷、乙胺嘧啶均对新孢子虫和弓形虫有抑制作用,尤其双氢青蒿素在质量浓度为20 ...     

桦褐孔菌的培养特性研究

对桦褐孔菌(Inonotus obliquus)菌丝生长的营养需求及培养条件进行了初步研究，结果表明，菌丝生长的最佳氮源为麦皮，不能利用硝态氮；最佳碳源为米粉，合适的碳氮比为15∽50：1，最适pH为9～10；光照(光强为500Ix)对桦褐孔菌菌种的萌发和菌丝生长有明显的抑制作用。这些结果将为桦褐孔菌的发酵生产提供科学依据。     

超声波辅助提取桦褐孔菌子实体中三萜类化合物的研究

[目的]优化桦褐孔菌中三萜类物质的超声波辅助提取工艺。[方法]以异丙醇为提取溶剂,采用超声波辅助提取法提取桦褐孔菌中三萜类物质,以不同处理条件、超声功率、超声次数和超声处理时间为试验因素,以三萜的提取率为评价指标进行单因素试验,筛选最佳提取工艺。[结果]超声辅助技术提取桦褐孔菌子实体中三萜类化合物的最佳工艺条件为超声功率400 W、超声次数30次、超声时间15 min;在此条件下,三萜得率为1.06%。[结论]超声波辅助提取法是一种有效的桦褐孔菌三萜类物质提取方法。     

桦褐孔菌漆酶基因片段的克隆与序列分析

通过简并引物克隆得到了桦褐孔菌及同属真菌共11个菌株的漆酶基因片段,并对其结构与同源性进行了分析。结果表明:11个目的扩增产物均含有2个内含子,且内含子位置保守,推导的氨基酸序列中均包含有保守的铜离子结合位点;DNA序列与氨基酸序列的相似度都颇高,基于2类序列构建的NJ系统进化树均能将除俄罗斯采集的桦褐孔菌菌株外归为1组,该漆酶基因片段可用于鉴定桦褐孔菌。     

桦褐孔菌菌丝体液体培养条件的优化

应用单因素梯度法对采自黑龙江省大兴安岭呼中国家级自然保护区的桦褐孔菌(Inonotus obliquus)菌丝体的液体培养条件进行了优化研究,以真菌多糖产量和菌丝生物量为评价指标。结果表明:桦褐孔菌液体培养的最佳碳源为葡萄糖、最佳氮源为蛋白胨、最适培养温度27℃、最佳初始p H=7.5,最适摇培转速130 r·min-1。     

桦褐孔菌胞外多糖脱蛋白工艺比较研究

采用正交试验设计,以蛋白质脱除率和多糖损失率为指标,比较研究了Sevag法、三氯乙酸法和酶法对桦褐孔菌胞外多糖的脱蛋白工艺。结果表明:三氯乙酸法脱蛋白效果最佳,其优化工艺为三氯乙酸浓度0.5mol/L,加入量15%,振荡时间20min,静止时间40min,蛋白质脱除率为68.5%,多糖损失率为2.45%。     

桦褐孔菌培养条件的研究

对桦褐孔菌菌丝生长的营养需求及发酵条件进行了初步研究,结果表明,固体培养采用PDA培养基为最佳配方;发酵试验确定最佳碳源为葡萄糖,最佳氮源为玉米浆,合适的碳氮源配比为葡萄糖2%,玉米浆1%。同时对发酵瓶接种方法和接种量进行对比试验,确定菌悬液接种法效果好,适宜接种量为2%。这些结果将为桦褐孔菌进一步研究提供科学依据。