热应激对猪颗粒细胞蛋白质表达谱的影响

为系统探究热应激对猪颗粒细胞蛋白质表达的影响,本研究将分离培养的猪颗粒细胞分别在37℃(对照组)和41℃(热应激组)处理后,用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术对细胞的蛋白质差异表达情况进行分析,并对差异表达蛋白质进行GO功能注释和KEGG通路分析。本研究共鉴定到5 451个蛋白质,差异表达蛋白质289个,其中上调表达蛋白质162个,下调表达蛋白质127个。对筛选出的差异表达蛋白质进行KEGG通路分析发现,差异表达蛋白质主要富集到蛋白质加工、胞吞、RNA降解、氧化磷酸化、嘌呤代谢、泛素化蛋白质降解、次级代谢产物的生物合成、糖酵解/糖异生以及胞间紧密连接等信号通路中。说明这些差异表达蛋白质及其富集的通路可能参与热应激对猪颗粒细胞功能影响的过程中。因此,本研究结果为深入了解热应激导致母猪繁殖障碍的分子机理提供了参考。     

iTRAQ技术及其在水稻蛋白质组学中的应用研究进展

同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)是一种新型的高通量的蛋白质测序技术,其通过与高精度的质谱仪串联,可同时对多达8个样品进行定性与定量分析,测定蛋白范围广泛、检测限低、分析结果可靠、精度高;目前已广泛应用于植物体的结构、功能、表达等方面的研究。水稻是人类的主要粮食作物,也是首个完成基因组测序的谷类模式植物,在蛋白质组水平上研究水稻的生长发育、调控机制具有重要意义。综述了iTRAQ的原理、操作流程和优缺点,重点就iTRAQ技术在水稻组织器官、亚细胞水平、逆境胁迫、激素诱导、突变体等方面的蛋白质组学研究进行了分析,并对iTRAQ技术在水稻蛋白质组学上的应用研究进行了展望。     

基于iTRAQ技术的猪精子释放蛋白Transwell小室分离及差异性分析

【目的】探索分离猪附睾头部精子释放蛋白的新方法,确定释放蛋白的功能特点及信号通路。【方法】利用Transwell小室独特的共培养系统,充分利用0.4μm聚碳酸酯膜分离精子释放的蛋白。使用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术分析释放的蛋白,对鉴定到的差异蛋白,使用GO数据库描述蛋白功能,运用KEGG数据库Pathway分析,确定差异蛋白最主要的生化代谢途径和信号转导途径,同时用IPR数据库对差异蛋白的结构域进行非冗余分析。【结果】Transwell小室上、下室共鉴定到542种蛋白,其中,464种蛋白表达量显著上调,78种蛋白表达量显著下调。差异蛋白主要参与跨膜转运、离子运输、ATP合成等生物过程。差异蛋白主要参与的信号通路为醛固酮调节的钠盐吸收、囊泡转运、EGFR酪氨酸激酶抑制等。硫氧还蛋白、半乳糖、糖苷水解酶等构成差异蛋白的主要结构域,为蛋白发挥作用提供结构基础。【结论】Transwell小室分离蛋白的方法切实有效,iTRAQ技术在附睾头部精子释放蛋白中成功鉴定出差异蛋白,差异性分析及功能注释为探究差异蛋白参与的生命活动及功能奠定了基础。     

白粉菌胁迫下苦荬菜生理指标和差异表达蛋白分析

研究白粉菌胁迫对苦荬菜叶片生理指标及蛋白组的影响,为揭示苦荬菜响应白粉菌胁迫的分子机制奠定基础.以龙牧苦荬菜(Lactuca indica L.cv.Longmu)为试验材料,测定其接种白粉菌72 h后叶片生理指标的变化,并利用同位素相对和绝对定量标记技术联合液相色谱-串联质谱技术(iTRAQ-LC-MS/MS)结合生...     

基于差异蛋白质组学解析紫色杆菌素抑制结肠癌细胞HT29的作用机制

【目的】对紫色杆菌素作用后的结肠癌细胞HT29进行差异蛋白质组学分析,探究其影响的代谢通路,揭示其抑制癌细胞生长的作用机制,为新型抗癌药物的开发提供一定的参考。【方法】以不同剂量的紫色杆菌素处理HT29 24、48、72 h,通过MTT试验以及透射电镜分析其对结肠癌细胞的有效抑制剂量及抑制情况。在此基础上,对提取的3个处理组的蛋白进行同位素标记,利用反相液相色谱(RP-LC)联用串联质谱(AB SCIEX Triple TOF5600)获得样品中的多肽及其相对丰度信息,通过数据库(NCBI.Human.protein database)搜索比对,鉴定差异表达蛋白。利用GO分析、KEGG信号通路分析,解析紫色杆菌素抑癌作用代谢途径。【结果】紫色杆菌素对HT29的抑制作用呈一定的时间、剂量依赖性。当紫色杆菌素对HT29的抑制率达50%时,仅为阳性药物5-Fu剂量的1/6,具有更明显的抑制效果。电镜下观察显示,随着紫色杆菌素剂量增大,细胞内部线粒体出现空泡结构,质膜出泡;当浓度达30 mg·L~(-1)时,细胞膜消失,染色质边集。通过差异蛋白质组学分析,共鉴定出4 258个蛋白,表达差异在2倍以上的蛋白共为757个。其中高剂量组处理差异蛋白数为492个,低剂量组处理的差异蛋白数为112个,阳性对照组差异蛋白数为336个。KEGG分析显示这些差异蛋白共参与50条信号通路。其中有10条信号通路具有显著性(P0.05),主要参与核糖体循环途径、三羧酸循环途径和RNA降解途径等。【结论】紫色杆菌素主要通过影响HT29细胞生命活动中的蛋白转录和翻译水平进而发挥抑制作用。     

乙烯和1-甲基环丙烯对椪柑采后浮皮及白皮层细胞壁代谢的影响

【目的】浮皮是宽皮柑橘Citrus reticulata果实在成熟后期或采后储藏过程中普遍发生的一种生理性障碍。椪柑C.reticulata ‘Ponkan’在采后储藏中极易发生浮皮,严重影响商品价值。通过采后处理,为椪柑果实采后浮皮的防范、储藏保鲜技术提供理论依据。【方法】利用乙烯和1-甲基环丙烯(1-MCP)处理椪柑采后果实,测定椪柑在储藏期间果实主要品质指标及浮皮指数的变化,分析果皮白皮层细胞形态和生理变化特征。【结果】(1)乙烯处理促进了储藏期果实可溶性固形物质量分数的提高;加速了果皮白皮层细胞密度、纤维素质量分数、果胶质量分数的下降,促使木质素质量分数及细胞壁降解酶(纤维素酶、果胶酯酶、多聚半乳糖醛酸酶)活性上升。(2)1-MCP处理减缓了果皮白皮层细胞密度及纤维素质量分数下降;延缓了木质素质量分数及细胞壁降解酶(纤维素酶、果胶酯酶、多聚半乳糖醛酸酶)活性上升;减缓了椪柑果实浮皮指数的上升。【结论】乙烯处理可加速椪柑果实采后生理代谢水平,加重果实浮皮的发生。1-MCP处理可抑制储藏期果皮的生理代谢水平,减轻浮皮障碍的发生。生产中可通过乙烯和1-MCP处理来控制椪柑果实剥皮的难...     

乙烯与1-甲基环丙烯对荔枝采后果皮褐变的影响

乙烯处理虽然诱导了荔枝果皮多酚氧化酶（PPO）及过氧化物酶（POD）活性的提高，在一定程度上提高了荔枝果实的乙烯释放量和呼吸速率，但对果皮褐变指数和果实营养成分没有显著影响；1－甲基环丙烯（1－MCP）处理对荔枝果实的呼吸、乙烯、PPO、POD及营养成分均无显著影响，也不能延缓果皮褐变，表明荔枝果皮褐变是一个对乙烯不敏感的生理过程，也表明了果皮褐变不能简单地归结为PPO及POD催化的酶促褐变。     

1-甲基环丙烯对水蜜桃的贮藏品质的影响

以水蜜桃为试材,研究了低温贮藏和1 μL/L、5 μL/L、10 μL/L三种不同浓度1-MCP处理对水蜜桃采后贮藏品质特性的影响。结果表明,1-MCP处理和低温贮藏相结合能够很好的延缓水蜜桃的后熟和衰老过程,1 μL/L的1-MCP处理能够很好的保持水蜜桃果实中的可溶性固形物、可滴定酸和淀粉的含量,而5μL/L、10 μL/L的1-MCP浓度仅对保持水蜜桃的硬度效果明显,对果实中的可溶性固形物、可滴定酸和淀粉的含量无明显影响。     

1-甲基环丙烯对杏采后保鲜效果的影响

以金太阳杏为试材,研究1-甲基环丙烯(1-MCP)对杏保鲜效果的影响,结果表明:使用0 35μg/L浓度的1-MCP熏蒸处理12h,能较好地保持果实的硬度,降低果实腐烂率,降低呼吸强度,对于Vc、可滴定酸、可溶性固形物的保持也有较好效果。     

1-甲基环丙烯对苹果采后生理影响的研究进展

综述了1-甲基环丙烯对苹果采后的呼吸速率、乙烯产量、硬度、可滴定酸、可溶性固形物、淀粉转化、生理病害等生理生化指标的影响,并对其应用前景进行了展望。     

1-甲基环丙烯对河套蜜瓜后熟和软化的影响

以河套蜜瓜（Cucumis melo L．cv．Hetao）为试材,研究了不同浓度的1-甲基环丙烯（1-MCP）对其后熟和软化的影响。对达到采收成熟度的河套蜜瓜用10、30、100和300nL／L的1-MCP熏蒸18h后,在20℃下贮藏。结果表明：不同体积分数的1-MCP对河套蜜瓜后熟和软化影响有显著差异。100、300nL／L的1-MCP明显抑制了河套蜜瓜乙烯的合成和生理作用,与对照相比乙烯释放高峰和呼吸高峰推迟了6d,乙烯高峰仅为对照的49．6％和43．8％,呼吸高峰为对照的80．0％和78．4％,可溶性固形物降解得到抑制,延迟了多聚半乳糖醛酸酶（PG）和β-半乳糖苷酶活性高峰出现的时间,有效延缓了河套蜜瓜硬度的下降速度。体积分数为10、30nL／L的1-MCP对河套蜜瓜后熟和软化没有明显的抑制作用。     

1-甲基环丙烯对采后京白梨果实后熟生理的影响

为探索延长京白梨货架期的方法,以采后京白梨果实为试材,在密闭容器内利用1-甲基环丙烯(1-MCP)进行熏蒸处理,然后常温贮藏,以不进行1-MCP熏蒸的常温贮藏果实为对照(CK),研究了1-MCP不同熏蒸浓度(0.25、0.50和1.00μL/L)和不同熏蒸次数(1、2和3次)对采后京白梨果实后熟生理指标的影响。结果表明:利用1-MCP熏蒸可以显著抑制京白梨果实后熟软化进程,适宜的处理方法为用0.50μL/L的1-MCP熏蒸2次(果实采后立即用0.50μL/L的1-MCP熏蒸1次,而后间隔3 d再熏蒸1次),京白梨果实货架期可以达到30 d,较CK延长12 d。     

1-甲基环丙烯对富士苹果采后生理变化的影响

1-甲基环丙烯(1-MCP)与乙烯的结构相似,可竞争乙烯前体,抑制乙烯的产生。本试验研究了1-MCP对富士苹果产后的糖度、硬度等生理变化的影响。结果表明,1-MCP明显地抑制富士苹果的衰老,有效抑制富士苹果虎皮病的发生。     

1-甲基环丙烯对猕猴桃贮藏品质和蛋白质组分的影响

【目的】研究了室温贮藏条件下1-甲基环丙烯(1-MCP)对猕猴桃果实呼吸、乙烯释放、贮藏品质和蛋白质组分变化的影响,为研究1-MCP在猕猴桃商业贮藏中的应用及1-MCP的作用机理提供理论依据。【方法】以‘秦美’和‘海沃德’猕猴桃为试材,研究了1-MCP在室温((20±1)℃)贮藏条件下对果实呼吸速率、乙烯释放速率、果实硬度、可滴定酸含量、可溶性固形物含量及可溶性总蛋白组分的影响。【结果】0.1μL/L 1-MCP处理能降低猕猴桃果实的呼吸速率和乙烯释放速率,抑制果实软化,延缓可滴定酸含量的下降,增加可溶性固形物含量;随着贮藏时间的延长,有特异蛋白条带出现,1-MCP处理对‘秦美’猕猴桃19.0 ku特异蛋白条带有抑制作用。【结论】1-MCP处理能延缓猕猴桃果实的衰老进程。两个猕猴桃品种相比,‘海沃德’猕猴桃产生的乙烯远低于‘秦美’猕猴桃,乙烯高峰出现也晚,果实的软化进程也较‘秦美’猕猴桃慢。     

乙烯吸收剂处理对柿果实采后生理效应的影响

通过用乙烯吸收剂吸收贮藏环境中乙烯的方法,研究了火柿果实成熟软化过程中乙烯对果肉硬度、呼吸速率、PE活性、PG活性和CX活性的影响,探讨了果实软化的机理。结果表明,乙烯吸收剂处理能有效地清除贮藏环境中的乙烯,降低果实的呼吸速率和乙烯释放速率,抑制PG、PE和CX的活性,有效地延缓果实硬度的下降速率。乙烯在柿果实软化衰老中起着主导作用。     

1-甲基环丙烯对采后桂花的保鲜效果及生理影响

以采后桂花为试材,用100nL·L^-1、200nL·L^-1、300nL·L^-13个不同浓度的1-甲基环丙烯（1-MCP）处理。以清水处理为对照。结果表明,1-MCP预处理可以延长桂花的贮藏寿命,延缓类胡萝卜素和花青素含量的下降,保持细胞质膜的完整性,减少MDA积累,延缓可溶性糖、可溶性蛋白质含量、保护酶POD和CAT活性的降低,其中以200nL·L^-1处理效果最好,其次为100nL·L^-1处理。     

1-甲基环丙烯对洋桔梗切花的保鲜效应

用不同浓度的1-甲基环丙烯(1-MCP)处理洋桔梗切花,研究其对切花形态变化和体内生理变化的影响.结果表明,适宜浓度的1-MCP溶液能明显延长洋桔梗切花保鲜时间,增加花枝鲜重,保持切花的水分平衡,降低呼吸速率和细胞膜相对透性,延缓蛋白质降解.其中,以120 nL/L 1-MCP处理的保鲜效果最佳,可使切花瓶插寿命比对照延长5 d.     

采前喷施1-甲基环丙烯(1-MCP)水溶剂对芍药切花开放及衰老的影响

本试验对芍药品种'大富贵'采前分别用200、400、600μL/L的1-甲基环丙烯(1-MCP)进行喷施处理,测定其切花花径及花枝吸水量、失水量.结果显示,采前经1-MCP处理的切花花径、花径增大率均小于对照,且1-MCP浓度越大,花径越小.不同处理芍药切花吸水量均呈前期快速下降,后期逐渐平稳状态;失水量均呈先增加后降...     

1-甲基环丙烯处理对不同成熟阶段香蕉果实后熟的影响

以广东 2号香蕉 (Musasp .cv .GuangdongNo.2 )为试验材料 ,研究了不同成熟阶段用不同浓度 1-甲基环丙烯(1-MCP)处理对香蕉后熟过程的影响 在香蕉成熟的第 1、2、3阶段用 10 ,30 ,10 0 ,30 0nL·L-1的 1-MCP处理 12h后 ,0 .0 3mm厚PE袋包装 ,在 2 0℃下贮藏 ,结果表明 ,成熟第 1阶段的香蕉用 1-MCP处理 ,可有效地延迟其后熟 ,其中以 10 0和 30 0nL·L-1处理的效果较明显 ,可以显著抑制果实的变软 ,延迟呼吸高峰的到来 ,推迟果皮颜色的转黄 成熟第 2阶段以后处理 ,效果不佳 ,且不同浓度处理之间无显著差异     

1-甲基环丙烯处理对大枣低温贮藏品质的影响

以金丝新4号为材料,在5℃环境下采用浓度分别为0.50μL·L-1、1.00μL·L-1、1.50μL·L-1的1-甲基环丙烯(1-MCP)进行熏蒸处理,研究1-MCP对大枣果实贮藏品质的影响.结果表明,经过1-MCP处理的大枣果实,其好果率、果实硬度较对照显著提高,果实内可溶性固形物含量、总糖含量较对照显著降低,而VC含量较对照显著提高.不同浓度的1-MCP处理效果未发现有明显差异.