核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白预测及其特性研究

[目的]脂蛋白几乎存在于所有细菌中,其通过N端脂质结构锚定在膜中,并参与细胞膜结构构建、维护细胞膜的稳定性、信号转导和转运等过程,同时在维持其生理功能、致病性和耐药性等方面发挥着重要作用.核桃细菌性黑斑病严重危害着我国核桃产业的健康发展,然而,尚未见其脂蛋白信号肽相关研究报道.[方法]本研究基于11个核桃细菌性黑斑病菌的全基因组序列,通过LipoP v1.0在线分析程序预测,从而实现对上述细菌中脂蛋白的预测.[结果]上述细菌中总共有1718个脂蛋白,所含脂蛋白范围为148～164个,所占比例为3.62％～4.02％,脂蛋白长度集中在150～450 aa,其中长度在100～200 aa的脂蛋白数量最多,氨基酸组成以丙氨酸所占比例最高,平均为14.4％～14.8％,而天冬氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、色氨酸的含量最低.上述菌株所含脂蛋白氨基酸长度较小,推测与脂蛋白较为灵活地实现其行使功能有关;同时,对上述蛋白特性进一步开展了研究,明确脂蛋白具有1次以上跨膜结构域不多,多数脂蛋白定位在线粒体核胞外,并且在理论等电点、不稳定系数以及总平均亲水性等方面存在着一定的差异,但是总体而言上述菌株中的脂蛋白在理化性质方面具有趋同的特性,此外,少数蛋白不具有信号肽序列,不属于典型分泌蛋白,具有转运肽的脂蛋白数量较少,且预测可靠性不高.进一步对信号肽切割位点特征进行分析,发现在上述1718个脂蛋白中,A(丙氨酸)所占比例最高,在信号肽切割位点-3、-2、-1、1、2处,A(丙氨酸)、A(丙氨酸)、C(天冬氨酸)、A(丙氨酸)、P(脯氨酸)的含量最高,且氨基酸的组成在-3和-1割位点上相对比较保守,属于A-X-C类型,即丙氨酸-任意氨基酸-天冬氨酸.最后,通过遗传关系分析发现细菌性黑斑病菌中脂蛋白序列之间在具有较高同源性以及较近亲缘关系.[结论]核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白在理化性质、亚细胞定位以及转运肽等方面具有趋同性特征,为进一步深入开展核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白的研究提供了重要的理论指导,此外,通过遗传关系分析进一步明确了与细菌性黑斑病菌中脂蛋白之间的关系,为深入探索脂蛋白在细菌性黑斑病菌中的作用奠定了坚实的理论基础.同时,核桃细菌性黑斑病菌分泌系统中SPaseI和SPaseII等不同信号肽类型的外泌蛋白在同源关系上、功能类别上是否保守,是否都具有上述研究结果的(种内、种间的)独特生物学功能还有待进一步深入研究.     

核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白预测及其特性研究

[目的]脂蛋白几乎存在于所有细菌中,其通过N端脂质结构锚定在膜中,并参与细胞膜结构构建、维护细胞膜的稳定性、信号转导和转运等过程,同时在维持其生理功能、致病性和耐药性等方面发挥着重要作用.核桃细菌性黑斑病严重危害着我国核桃产业的健康发展,然而,尚未见其脂蛋白信号肽相关研究报道.[方法]本研究基于11个核桃细菌性黑斑病菌的全基因组序列,通过LipoP v1.0在线分析程序预测,从而实现对上述细菌中脂蛋白的预测.[结果]上述细菌中总共有1718个脂蛋白,所含脂蛋白范围为148～164个,所占比例为3.62％～4.02％,脂蛋白长度集中在150～450 aa,其中长度在100～200 aa的脂蛋白数量最多,氨基酸组成以丙氨酸所占比例最高,平均为14.4％～14.8％,而天冬氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、色氨酸的含量最低.上述菌株所含脂蛋白氨基酸长度较小,推测与脂蛋白较为灵活地实现其行使功能有关;同时,对上述蛋白特性进一步开展了研究,明确脂蛋白具有1次以上跨膜结构域不多,多数脂蛋白定位在线粒体核胞外,并且在理论等电点、不稳定系数以及总平均亲水性等方面存在着一定的差异,但是总体而言上述菌株中的脂蛋白在理化性质方面具有趋同的特性,此外,少数蛋白不具有信号肽序列,不属于典型分泌蛋白,具有转运肽的脂蛋白数量较少,且预测可靠性不高.进一步对信号肽切割位点特征进行分析,发现在上述1718个脂蛋白中,A(丙氨酸)所占比例最高,在信号肽切割位点-3、-2、-1、1、2处,A(丙氨酸)、A(丙氨酸)、C(天冬氨酸)、A(丙氨酸)、P(脯氨酸)的含量最高,且氨基酸的组成在-3和-1割位点上相对比较保守,属于A-X-C类型,即丙氨酸-任意氨基酸-天冬氨酸.最后,通过遗传关系分析发现细菌性黑斑病菌中脂蛋白序列之间在具有较高同源性以及较近亲缘关系.[结论]核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白在理化性质、亚细胞定位以及转运肽等方面具有趋同性特征,为进一步深入开展核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白的研究提供了重要的理论指导,此外,通过遗传关系分析进一步明确了与细菌性黑斑病菌中脂蛋白之间的关系,为深入探索脂蛋白在细菌性黑斑病菌中的作用奠定了坚实的理论基础.同时,核桃细菌性黑斑病菌分泌系统中SPaseI和SPaseII等不同信号肽类型的外泌蛋白在同源关系上、功能类别上是否保守,是否都具有上述研究结果的(种内、种间的)独特生物学功能还有待进一步深入研究.     

核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白预测及其特性研究

[目的]脂蛋白几乎存在于所有细菌中,其通过N端脂质结构锚定在膜中,并参与细胞膜结构构建、维护细胞膜的稳定性、信号转导和转运等过程,同时在维持其生理功能、致病性和耐药性等方面发挥着重要作用.核桃细菌性黑斑病严重危害着我国核桃产业的健康发展,然而,尚未见其脂蛋白信号肽相关研究报道.[方法]本研究基于11个核桃细菌性黑斑病菌的全基因组序列,通过LipoP v1.0在线分析程序预测,从而实现对上述细菌中脂蛋白的预测.[结果]上述细菌中总共有1718个脂蛋白,所含脂蛋白范围为148～164个,所占比例为3.62％～4.02％,脂蛋白长度集中在150～450 aa,其中长度在100～200 aa的脂蛋白数量最多,氨基酸组成以丙氨酸所占比例最高,平均为14.4％～14.8％,而天冬氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、色氨酸的含量最低.上述菌株所含脂蛋白氨基酸长度较小,推测与脂蛋白较为灵活地实现其行使功能有关;同时,对上述蛋白特性进一步开展了研究,明确脂蛋白具有1次以上跨膜结构域不多,多数脂蛋白定位在线粒体核胞外,并且在理论等电点、不稳定系数以及总平均亲水性等方面存在着一定的差异,但是总体而言上述菌株中的脂蛋白在理化性质方面具有趋同的特性,此外,少数蛋白不具有信号肽序列,不属于典型分泌蛋白,具有转运肽的脂蛋白数量较少,且预测可靠性不高.进一步对信号肽切割位点特征进行分析,发现在上述1718个脂蛋白中,A(丙氨酸)所占比例最高,在信号肽切割位点-3、-2、-1、1、2处,A(丙氨酸)、A(丙氨酸)、C(天冬氨酸)、A(丙氨酸)、P(脯氨酸)的含量最高,且氨基酸的组成在-3和-1割位点上相对比较保守,属于A-X-C类型,即丙氨酸-任意氨基酸-天冬氨酸.最后,通过遗传关系分析发现细菌性黑斑病菌中脂蛋白序列之间在具有较高同源性以及较近亲缘关系.[结论]核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白在理化性质、亚细胞定位以及转运肽等方面具有趋同性特征,为进一步深入开展核桃细菌性黑斑病菌中脂蛋白的研究提供了重要的理论指导,此外,通过遗传关系分析进一步明确了与细菌性黑斑病菌中脂蛋白之间的关系,为深入探索脂蛋白在细菌性黑斑病菌中的作用奠定了坚实的理论基础.同时,核桃细菌性黑斑病菌分泌系统中SPaseI和SPaseII等不同信号肽类型的外泌蛋白在同源关系上、功能类别上是否保守,是否都具有上述研究结果的(种内、种间的)独特生物学功能还有待进一步深入研究.     

黄单胞菌分泌蛋白的理化性质及特征分析

基于全基因组序列已经公布的黄单胞菌Xanthomonas campestris B100、Xanthomonas campestris pv. campestris 8004、Xanthomonas campestris CN14中分泌蛋白序列为基础数据,采用Protscale、SMART、TargetP 2.0 Server等生物信息学分析软件对上述分泌蛋白展开理化性质、保守结构域以及转运肽等分析,结果显示：黄单胞菌中分泌蛋白理论等电点与氨基酸长度之间无相关关系, 44.73%的蛋白为不稳定蛋白, 83.21%的蛋白亲水性小于0,属于亲水性蛋白。同时,在每种黄单胞菌的分泌蛋白中,具有明显保守结构域的蛋白数量平均为12个,并且所有分泌蛋白均具有信号肽,转运肽预测可能性分布也较为平均。     

不同受冻程度核桃嫁接苗相关理化性质的研究

为了解‘绿岭’核桃嫁接苗的抗寒性,以1年生‘绿岭’核桃嫁接苗为试材,采用受冻指数法研究了冬季自然条件下不同受冻程度苗木主干的束缚水与自由水比值、相对电导率及其木质部和韧皮部的可溶性糖、淀粉、脯氨酸、可溶性蛋白含量.结果表明:受冻指数与束缚水/自由水的值呈极显著负相关,相关系数为-0.996 52,休眠期‘绿岭’核桃嫁接...     

褐环乳牛肝菌中分泌蛋白的理化性质分析

为了更好地明确褐环乳牛肝菌分泌蛋白的功能,基于前期所获得327个分泌蛋白序列,对其理化性质进行分析。结果表明,69.72%的分泌蛋白理论等电点小于6.0,属于酸性蛋白,同时,利用随机数生成软件对上述不同理论等电点类别的分泌蛋白进行10%抽样分析,明确33个不同理论等电点类别的分泌蛋白(包括23个酸性蛋白、4个中性蛋白、6个碱性蛋白)的分子质量、分子式、原子数量、半衰期、不稳定性系数、脂肪族氨基酸指数、总平均亲水性等理化性质,其中14个分泌蛋白为稳定性蛋白,14个分泌蛋白为亲水性蛋白。     

六种复配剂对芒果细菌性黑斑病菌的室内抑菌效果评价

为筛选出有效防治芒果细菌性黑斑病菌(Xanthomonas campestris pv.mangiferaeindicae)的复配剂,采用Horsfall法对6种复配剂进行室内增效评价。试验结果表明,硫酸链霉素与噻菌铜各配比、敌磺钠与中生菌素以1∶4、4∶1配比及噻菌铜与盐酸四环素以4∶1、3∶2、2∶3配比时有明显的增效作用;其余的组合则表现协同或拮抗作用。     

苹果梨黑斑病菌潜伏侵染的组织学研究

采用常规石蜡切片技术,对链格孢侵入苹果梨果皮的途径及潜伏结构进行了研究,结果表明:皮孔是链格孢侵入果实组织的主要通道。粘附于皮孔的孢子首先萌发产生菌丝,随后菌丝进一步扩展,使皮孔表层细胞解体,同时侵入点表皮及内侧3～4层细胞迅速栓化,限制了菌丝的扩展,形成椭圆形、卵形、多角形细胞聚集在一起的“拟薄壁细胞”,并进一步发展成为“微菌核”,在病程中表现出一段时间的休眠。     

烟草赤星病菌与黑斑病菌生物学特性的比较

比较烟草赤星病菌和黑斑病菌基本生物学特性.结果表明:烟草赤星病菌和黑斑病菌的最适生长温度分别为25～ 30℃和20 ～ 25℃;pH6～9培养条件更有利于烟草赤星病菌的生长;烟草赤星病菌利用葡萄糖和蔗糖的能力明显大于黑斑病菌;两病原菌对硝酸铵、硫酸铵和干酪素的利用情况基本相同,利用能力大小依次为干酪素、硝酸铵、硫酸铵;...     

核桃细菌性黑斑病危害及防治效果试验

核桃黑斑病是核桃树的主要病害之一。试验结果表明,不同处理防治均可取得较好的防治效果。     

温度对刺五加黑斑病菌的影响

[目的]探讨温度对刺五加黑斑病菌的影响。[方法]在不同温度条件处理下,对刺五加黑斑病菌的生长速率和病原菌孢子的萌发状况进行系统的研究和分析。[结果]刺五加黑斑病病原菌对温度条件的适应性比较强,在5—35℃温度范围内均可以生长,超过40℃不能生长．而且在60℃以下的温度条件下均可以存活,最适宜的生长温度范围为25—30℃。其孢子萌发率在25℃时随着时间的延长而升高。刺五加黑斑病病原菌的生长速率和病原菌孢子的萌发率都是在25℃温度条件处理下为最高,表明25℃是刺五加黑斑病菌生长发育和侵染的最佳温度。[结论]该研究证明温度对刺五加黑斑病菌的生长速率和孢子萌发率均具有较大影响,该研究为刺五加黑斑病的进一步研究奠定了理论基础。     

甜瓜黑斑病菌的生物学特性及室内药剂筛选

采用十字交叉法和血球计数法,研究了甜瓜黑斑病菌的生物学特性。结果表明,PSA和PDA培养基最适合病菌菌丝的生长,麦芽糖琼脂培养基最适宜孢子的产生;菌丝在5～35℃范围内均能生长,但最适的温度是25℃和30℃;菌丝适宜生长的pH范围为7～9,菌落产孢的适宜pH值为5～7,全光照条件可促进菌丝的生长。在测试的碳源中,麦芽糖最适宜菌丝生长,葡萄糖、蔗糖和麦芽糖最适宜产孢;氮源中以蛋白胨、酵母膏和牛肉膏最适宜菌丝生长,硝酸钾和尿素最适宜产孢。甜瓜黑斑病菌对淀粉的利用能力很强。生长速率法测定病菌对7种杀菌剂的抑制作用,咪鲜胺锰盐和苯醚甲环唑的抑菌效果最好,抑制率达到100%。     

黑斑病菌侵染后杨树叶片细胞超微结构的变化

为了解黑斑病菌侵染杨树叶片后,叶片细胞超微结构的变化,以对黑斑病菌高抗的无性系NL 895杨（Populus euramericana CL“NL 895”）和感染黑斑病菌的加杨（Populus canadensis Moench）叶片为实验材料,进行了扫描电镜和透射电镜分析,这为进一步研究黑斑病菌的致病机制提供了细胞学方面的理论依据。     

环境因子对花生黑斑病菌生长发育的影响

采用分生孢子萌发率和菌丝生长测定等方法,研究了环境条件对花生黑斑病菌生长发育的影响.结果表明,花生黑斑病菌最适生长温度为28℃,最适pH值为6,致死温度是60℃,光暗交替有利于菌丝生长,菌丝在Landers、花生叶煎汁和V8培养基上长势较好,碳素营养以蔗糖和葡萄糖为最好,氮源以牛肉膏、蛋白胨为最佳;病菌分生孢子萌发最适温度为25℃,最适pH值为6,在水滴中孢子才有较高的萌发率,光/暗交替培养对孢子萌发有利,分生孢子致死温度为52℃.     

大豆FLAs蛋白理化性质和结构特征的生物信息学分析

基于已公布的大豆基因组数据库,鉴定大豆类成束阿拉伯半乳糖蛋白(fasciclin-like arabinogalactan proteins,FLAs)基因,并对其基本理化性质、保守基序、功能域、系统发生树、蛋白质二级结构等进行综合分析。结果显示,从大豆基因组中共鉴定出33个FLAs,其编码的蛋白质氨基酸长度在237~455 aa,分子质量在25.483 0~50.578 5 ku,理论等电点在4.33~9.56。亚细胞定位分析显示,Gm FLAs均定位在质膜上(其中Gm FLA4/25也可定位在叶绿体中)。Gm FLAs含有1~2个该家族的保守成束蛋白质结构域(fasciclin domains,FAS)。系统进化分析显示,大豆和拟南芥FLAs的同源性不高。Gm FLAs二级结构均由α螺旋、无规则卷曲和延伸链等元件组成,其中,延伸链的比例最低,无规则卷曲比例最高。     

4种杀虫剂对核桃黑斑蚜的防治试验

[目的]核桃黑斑蚜Chromaphis juglandico1a(Kaltenbach)是新疆南疆核桃产区的重要害虫之一,常造成核桃叶片失绿焦枯,严重时核桃仁干缩,出仁率下降20;以上.通过防治核桃黑斑蚜的药效试验,筛选商效、低毒的化学药剂,从而达到有效控制核桃黑斑蚜的目的.[方法]选择4种药剂,采用喷雾的方法对核桃黑斑蚜进行防治试验.[结果]25;吡蚜酮悬浮剂3 000,2 500,2 000倍处理、25;吡虫啉可湿性粉剂5000倍处理、20;啶虫咪可湿性粉剂3000倍处理和2.5;高效氯氟氰菊酯乳油1000倍处理对核桃黑斑蚜均有较好的防治效果,且对核桃树安全.[结论]防治核桃黑斑蚜,可选用试验筛选出的以上4种药剂,同时注意合理轮换用药,以减少核桃黑斑蚜的抗药性产生.     

梨果黑斑病菌钙调磷酸酶基因生物信息学分析及其对侵染结构分化的调控作用

为揭示梨果黑斑病菌Alternaria alternata CaN基因的调控作用,采用RT-PCR技术克隆A.alternata CaN基因,利用在线工具对其基因及其编码蛋白进行生物信息学分析;同时分析其在A.alternata侵染结构分化过程中的表达特性;并进一步以钙调磷酸酶专一性抑制剂环孢菌素A(CsA)处理研究其对A.alternata侵染结构分化和致病性的影响。结果A.alternata克隆得到CNA和CNB基因,分别命名为AaCNA(GenBank NW＿017306222)和AaCNB(GenBank NW＿017306193),生物信息学分析表明AaCNA和AaCNB均无跨膜结构,且具有多个磷酸化位点,主要定位于细胞核上;AaCNA包括一个N端催化结构域、CNB结合结构域、钙调素CaM结合结构域和自抑制蛋白结构域,AaCNB具有4个EF-hand Ca²⁺结合位点。qRT-PCR分析表明,在疏水及果蜡诱导A.alternata侵染结构分化过程中AaCNA和AaCNB基因表达量均显著上调,且果蜡诱导作用更明显。药理学表明,环孢菌素A处理显著抑制疏水性和...     

柑橘黄龙病菌分泌蛋白04580基因的克隆及原核表达

为进一步了解柑橘黄龙病菌亚洲种CLas的致病机理,从Prasad预测的166种分泌蛋白中选取1个在柑橘植株中表达量较高的CLIBASIA–04580基因进行研究。提取感染柑橘黄龙病的柑橘叶片总DNA,经PCR扩增得到CLIBASIA–04580基因,切胶回收PCR产物,双酶切连接到pET–28α载体上,使用菌落PCR和限制性内切酶双酶切鉴定筛选阳性克隆;转化大肠杆菌BL21(DE3),用0.5、1.0、1.5、2.0 mmol/L的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达融合组氨酸标签的CLIBASIA–04580重组蛋白,聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS–PAGE)检测重组蛋白的表达水平,再用蛋白纯化镍柱进行纯化。结果表明,携带组氨酸标签的CLIBASIA–04580重组蛋白得到表达,且异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)浓度为1.5mmol/L时相对表达量达到峰值,通过SDS–PAGE凝胶分析,与未经过镍柱纯化的蛋白原液比较,可知纯化了CLIBASIA–04580重组蛋白。     

马鹿精子膜蛋白提取及理化性质分析

采用非离子型去污剂(NP-40)裂解法提取马鹿精子膜蛋白,确定出马鹿精子膜蛋白的最佳分离胶质量分数为12%.通过对膜蛋白的性质分析,发现马鹿精子膜蛋白是一组具弱酸性等电点的低相对分子质量糖蛋白,相对分子质量为21.7～98.4 kDa,等电点为pI 4～9.