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碱裂解法快速提取番茄DNA的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
以转基因番茄MM-R3a的嫩叶、子叶、下胚轴和根为试验材料,用碱裂解法快速提取番茄总DNA并用于PCR扩增.结果表明,以番茄子叶和幼嫩叶片为材料,使用该方法提取的DNA纯度和质量浓度相对较高,以稀释10倍~30倍的DNA为模板的PCR结果相对稳定. 相似文献
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核桃叶片基因组DNA的4种提取方法比较 总被引:2,自引:0,他引:2
以核桃叶片为材料,比较了高盐低pH法、SDS法、改良CTAB法和适合酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法提取基因组DNA的效果;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、RAPD、ISSR等方法进行PCR扩增和用EcoRI、PstI内切酶酶切对所提取的DNA样品进行检测,比较所得DNA的产量和质量.结果表明,4种提取方法从叶片中得到的DNA产量和质量有所不同,其中酚类、多糖类物质较多的植物DNA提取法产量最高,纯度适中.4种方法提取的DNA对以后的PCR和酶切均没有影响. 相似文献
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不同方法提取鳗鲡病原茵DNA模板的差异分析 总被引:1,自引:0,他引:1
利用吸光值、琼脂糖电泳及PCR差异扩增等指标,对酚一氯仿法、水煮法、碱裂解法3种方法制备的鳗鲡病原菌DNA模板进行了差异分析.结果表明:1)不同方法提取的病原菌模板DNA的浓度、纯度及分子质量大小存在差异,但以这3种方法提取的病原菌DNA为模板,均能成功扩增到细菌16SrD.NA和外膜蛋白的保守序列.其中,酚一氯仿提取的模板DNA浓度较低、纯度较高;水煮法和碱裂解法提取的模板DNA浓度较高、纯度较低.2)电泳显示,3种方法获得的模板DNA扩增出的16SrDNA保守序列条带均一,没有显著差异,但在外膜蛋白保守序列的扩增中却因菌种和模板提取方法的不同而存在差异. 相似文献
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从猪血中分离附红细胞体,提取其基因组DNA,用EcoRI对基因组DNA进行酶切,将酶切片段进行琼脂糖电泳,得到一个1.8 kb的DNA片段,根据DNA序列分析与GenBank已知基因比较和PCR方法确定该片段具有特异性,以该片段为模板进行PCR,并将其扩增产物与其它猪的其他细菌DNA扩增产物相比较,建立一种检测猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法,并通过斑点杂交试验检测该产物特异性,通过临床应用检验该法的适用性。结果表明:扩增产物大小为782 bp,其序列与已知附红细胞体序列同源性为100%,斑点杂交试验证实该产物为附红细胞体特异性产物,将该方法应用于检测10头临床症状典型的感染猪和10头健康猪的血液,所有感染和隐性带菌猪的PCR检测结果为阳性,健康猪为阴性。猪外周血中附红细胞体的特异性PCR检测方法适用于检测无临床症状的隐性带菌动物。 相似文献
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为从动物饲料中快速检测所含牛源组织成分以有效防止疯牛病传入,根据牛线粒体基因核苷酸序列设计1对引物,应用CheleX法分离饲料中牛源组织成分的DNA.对分离的DNA进行PCR扩增、基因克隆及核苷酸序列分析,并建立饲料中牛源组织成分的PCR检测方法.用建立的PCR方法对羊、猪、鸡、兔和鱼组织基因组DNA进行扩增,均无特异条带;将牛组织基因组DNA倍比稀释,分别对各个稀释度的DNA进行PCR扩增,结果表明,该方法对牛组织DNA检测的敏感度可达25.2pg/μL.用该研究建立的方法对含不同量牛肉粉的鱼粉进行检测,其最小检测量达0.05%(质量分数),整个过程约需3h. 相似文献
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一种制备富含多糖丝状真菌基因组DNA的方法 总被引:3,自引:0,他引:3
采用改进CTAB法提取的红曲霉、镰刀菌和微小毛霉基因组DNA数量和质量都较为理想,DNA产量在90~130 μg·g-1湿菌体,大小均在21kb.4℃可保存4~6个月.用该方法提取的基因组DNA为PCR扩增的模板,扩增结果稳定、准确.分别用限制性内切酶SacⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶解红曲霉M34均能得到较为均一的完全酶切带.该方法快速、简便,成本低,适合富含色素和多糖的真菌的基因组DNA的提取.此外,还适合真菌分子育种等的筛选和样本量大的PCR检测. 相似文献
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比较了化学裂解与酶裂解相结合法、氯化苄法、CTAB法、改良CTAB法、MP土壤试剂盒法和植物试剂盒法6种提取草菇培养料总DNA的方法.结果表明:不同方法的A260/A280比值有较大差异,其中化学裂解与酶裂解相结合法提取DNA的产量最高,而新型植物基因组DNA提取试剂盒提取培养料DNA的产量最低,分别为(2372.72... 相似文献
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[目的]探索转基因玉米根际土壤DNA提取的方法。[方法]采用直接裂解方式,通过玻璃珠、溶菌酶和SDS共同作用于转基因玉米MON863和Bt 176的根际土壤中,提取微生物DNA。[结果]该方法能从两种转基因玉米根际土壤中提取到20 kb的完整DNA片段。[结论]所得DNA完全适用于PCR扩增和酶切的要求。 相似文献
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橡胶白粉菌(Oidium heveae Steinmann)基因组DNA的提取方法 总被引:2,自引:0,他引:2
比较了2种菌源、3种方法提取橡胶树白粉病病原真菌橡胶白粉菌(Oidium heveae BA.Steinmann)基因组DNA的效果。结果表明:无论采用单斑分离法收集还是直接收集橡胶白粉菌菌体,无论采用石英砂振荡破壁法、氯化苄法还是尿素法提取,均能获得满足常规分子生物学操作要求的基因组DNA;在基因组DNA的提取产率、完整性方面,各种方式之间略有差异,但无显著差别;2种来源菌体的基因组DNA的ITS序列分析结果一致,说明在无法进行单斑分离的情况下,可以利用直接收集的菌体提取基因组DNA。 相似文献
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不同提取方法和不同组织对中华绒螯蟹
DNA提取效果的比较研究 总被引:2,自引:0,他引:2
为了优化中华绒螯蟹基因组DNA提取方法,采用酚-氯仿法和试剂盒法分别对中华绒螯蟹的鳃、肌肉、血淋巴液和刚毛4种组织进行DNA提取,并从纯度、浓度、片段完整性及微卫星标记PCR扩增效果4个方面评价提取DNA的质量.结果显示:酚-氯仿法提取的DNA片段比试剂盒法提取的更完整,且DNA浓度较高,但纯度稍低;无论何种提取方法,刚毛和血淋巴液中的DNA纯度都高于鳃和肌肉,4种组织中的DNA含量依次为鳃>肌肉>刚毛>血淋巴液,未剪碎刚毛中未能提取到基因组DNA;微卫星标记的电泳结果表明,两种提取方法下4种组织中提取的DNA均可满足微卫星标记的应用要求.综上,本研究建立了一种简便的非损伤性中华绒螯蟹的采样及其DNA提取方法,这对于进行中华绒螯蟹遗传育种和分子标记研究等方面具有一定的积极作用. 相似文献
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[目的]探索适合真菌基因组DNA提取的有效方法。[方法]以酵母茵(Hansenula sp.HS07A)和青霉菌(Penicillium sp.HS07)为供试菌株,分别采用煮沸裂解法、石英砂研磨法、研磨和反复研磨冻融法和化学改良法提取其基因组DNA,比较这4种方法的提取效果。[结果]化学改良法提取基因组DNA,除去了机械破壁过程,减少了机械力对DNA造成的破坏,运用阴离子去污剂SIB提取DNA安全、价廉,能有效、完整地提取高质量的基因组DNA,凝胶电泳条带清晰、无弥散,以此基因组DNA作为目的片段的PCR扩增模板,扩增效果优于改良前的方法,并且这种方法也适合多种真菌和细菌基因组DNA的提取。[结论]化学改良法是提取真菌基因组DNA的有效方法。 相似文献
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为克服从小麦叶片提取DNA用于PCR受季节的限制以及氯仿不易购买等问题,研究以从叶片中提取的以及用氯仿从小麦籽粒中提取的DNA为对照,用无氯仿方法提取小麦籽粒中的DNA,并用多重PCR进行检测。结果表明,用无氯仿方法提取的DNA浓度比从叶片中提取的和用氯仿提取的DNA浓度要低,而且用无氯仿方法提取的DNA扩增效果稍差,但该问题可通过增加上样量或采用聚丙稀酰胺凝胶电泳等途径来解决。因此,无氯仿小麦籽粒DNA提取方法可在对DNA质量要求不高以及氯仿无法及时得到时使用。 相似文献
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4种高梁基因组DNA快速提取方法的比较 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]寻找快速、简单、成本低的高粱基因组DNA提取方法。[方法]首先,分别使用液氮研磨法、缓冲液研磨法、烘干研磨法和直接研磨法这4种方法从高粱叶片中提取基因组DNA,然后,通过凝胶电泳、SSR分析和SRAP分析检测所提DNA的浓度和纯度。[结果]采用4种方法提取高粱基因组DNA时的产量相差不大;采用前2种方法提取的DNA降解少、纯度高,可进行有效的SRAP-PCR和SSR-PCR,但缓冲液研磨法的SRAP-PCR结果稍差;而采用后2种方法提取的DNA降解严重、纯度低,但可进行有效的SSR-PCR。[结论]采用4种方法均可在短时间内提取到足够几十次PCR反应的高粱基因组DNA,液氮研磨法和缓冲液研磨法所提取的DNA应用范围更大,而烘干研磨法和直接研磨法所提取的DNA只能用于对片段较小的目的DNA进行特异性PCR。 相似文献