鸡球虫疫苗研究进展

鸡球虫病是一种严重危害集约化养鸡业的原虫病,该病是由孢子虫纲（Sporozoa）、艾美耳科（Eimerriidae）、艾美耳属（Eimeria）的9种艾美耳球虫引起的。据报道,全世界每年因鸡球虫病造成高达30亿美元经济损失,在美国每年因球虫病造成的直接和间接经济损失约为6．4亿美元。而我国每年支出的抗球虫药物费用约为6～8亿元人民币,占鸡病全部防治费用的近三分之一,随着我国集约化养鸡业的迅速发展,这一数据还会急剧上升。     

鸡艾美耳球虫分子生物学研究进展

鸡艾美耳球虫分子生物学研究进展杨林，陈利，王芳（云南省农业生物技术重点实验室）家禽球虫病是由艾美耳球虫引起的一种严重危害家禽生长发育的疾病。家鸡艾美耳球虫现知共有９种，其中柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）和毒害艾美耳球虫（Ｅ．ｎｅｃａｔ...     

鸡艾美耳球虫抗药性研究进展

当前,在抗球虫药已作为添加剂加入到饲料中的集约化养鸡场,由于球虫对许多药物的敏感性下降而导致了球虫病经常发生。为了从根本上解决这一生产问题,目前关于球虫抗药性的研究,也从报道抗药性虫株的出现、调查现场虫株的药物敏感性等方面渐渐转向了抗药机理的探讨,下面就有关艾美耳球虫抗药性方面的研究状况作一概述。1　抗药性的检测手段1.1　鸡体测定法　检测现场鸡球虫抗药性的最常用方法是鸡体测定法,它是指“将供试药物按一定比例与饲料均匀混合后饲喂幼雏,经一定时间后接种球虫,最后通过某些指标和标准判定球虫抗药性[6]”。这种方法…     

首个国产鸡球虫疫苗问世保护率超95％

佛山市正典生物技术有限公司自主研发的“鸡球虫病四价活疫苗（柔嫩艾美耳球虫PTMZ株＋毒害艾美耳球虫PNHZ株＋巨型艾美耳球虫PMHY株＋堆型艾美耳球虫PAHY株）”近日获得国家三类新兽药证书，这是国内首个全部采用早熟选育致弱的药物敏感虫株组成的鸡球虫病四价活疫苗。     

鸡球虫疫苗研究进展

鸡球虫病广泛分布于世界各地,是危害养鸡业的重要寄生虫疫病之一。本文对球虫抗原疫苗及其实验性免疫效果的近年研究进展和球虫疫苗的应用前景等进行较全面系统的阐述,为鸡球虫病的防治提供重要的参考依据。     

鸡球虫体外培养模型及应用研究进展

鸡球虫病是由艾美耳球虫寄生于鸡肠上皮细胞内所引起的一种寄生性原虫病，感染鸡体重减轻、营养不良、肠道损伤等，严重危害养鸡业的健康发展。球虫的生命周期包括从无性阶段到有性阶段的转换并局限于一个宿主。目前对球虫的研究主要包括在细胞生物学及其不同生命阶段的蛋白质表达和运输机制、宿主细胞入侵和宿主-寄生虫相互作用、新型药物靶标筛选等方面。鉴于研究问题的多样性，以及减少和取代动物试验的要求，建立高效的体外培养模型成为研究鸡球虫生物学特性、抗球虫疫苗和药物的基本条件。笔者重点阐述了鸡球虫体外培养模型及其在药物抗虫效果研究中的应用，包括鸡胚培养模型、二维培养模型(原代细胞培养模型、传代细胞系培养模型)及三维类器官培养模型。越来越多培养技术的突破为研究球虫生命周期阶段和干预策略开辟了新的途径，也为深入了解鸡球虫致病机制、抗球虫药物研发提供依据。     

加福抗鸡柔嫩艾美耳球虫笼饲试验

加福(Cygro)是一种单糖苷聚醚类携带离子型抗生素,其有效成份为马杜拉霉素(Maduramicin)。通过三批共150羽21日龄伊莎公鸡进行的抗鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)笼饲试验,设 Maduramicin5ppm,盐霉素(Salinomycin)60ppm,氯吡多(Clopidol)125ppm,感染不用药和不感染不用药5个组,每组10羽鸡,除不感染不用药组外,各组鸡每羽口服感染 E.tenella 孢子化卵囊8×10~4个。三批试验的抗球虫指数分别为Maduramicin193.51、190.05、199.23,Salino-mycin168.74、168.24、179.43、Clopidol176.84、183.05、171.26。结果证实 Maduram-icin 能有效预防 E.tenella 感染,其效果优于Salinomycin 和 Clopidol。作者认为 Cygro 是一种值得推广使用的抗鸡球虫新药。     

秦皇岛地区鸡球虫抗药性研究

应用艾维茵肉仔鸡，以最适抗球虫活性百分率（POAA）、病变记分减少率（RLS）和相对卵囊产量（ROP）为判定指标，检测了采自河北省秦皇岛地区的6种艾美耳球虫对8种常用抗球虫药物的敏感性。结果表明：6种混合艾美耳球虫对马杜霉素和盐霉素具有轻度抗药性；对拉沙洛菌素和氨丙淋具有中度抗药性；对球痢灵、克球多和常山酮具有重度抗药性；对地克珠利无抗药性。     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

强效艾美耳鸡球虫苗使用效果观察

多年来,鸡球虫病一直是困饶我市养鸡业发展的一大难题,是影响鸡存活率和生产水平的主要疾病之一。许多养鸡场和养鸡专业户试图用高效药物和环境卫生控制彻底消除鸡体内和养鸡场地中的球虫卵囊而达到控制球虫病的目的,非但效果不理想,而且往往造成球虫病暴发。作者也曾试图通过控制环境中卵囊含量,利用少量的自然界野毒卵囊实现机体的自身免疫,但效果也不满意,因为感染量、用药量以及时间很难掌握。目前我市大部分养鸡场、户还是依赖药物防制球虫病,但因耐药性问题的严重,常常出现药物控制下仍有球虫病暴发的事件。因此鸡球虫苗的研…     

ETMIC-2基因表达产物对人工感染柔嫩艾美耳球虫雏鸡的保护及病理学研究

采用大肠杆菌表达鸡艾美耳球虫微线蛋白(ETMIC—2)，对石歧杂小公雏在1、2周龄按分组以不同剂量分别肌注免疫，3周龄人工感染强毒柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊，4周龄全部捕杀，进行增重、盲肠病变和免疫淋巴器官病理组织学观察。结果表明，全部试验组增重率均高于红对照组，其中两组超过白对照组；盲肠病变均低于红对照组；免疫淋巴器官发生不同程度的增生，尤其是胸腺，盲肠扁桃体及脾脏，淋巴滤泡增大，淋巴细胞明显增殖。此结果可以提示，适量的ETMIC—2基因表达产物免疫雏鸡后，再进行柔嫩艾美耳球虫的强毒攻击，能刺激机体的免疫淋巴组织器官产生免疫应答反应，对机体具有较好的保护力。     

变位艾美耳球虫纯种的初步确定和致病性研究

从上海郊县鸡场采集粪便分离球虫，经实验室繁殖和采用单卵囊感染技术，获得了纯种变位艾美耳球虫（ＥｉｍｅｒｉａｍｉｖａｔｉＥｄｇａｒ和Ｓｅｉｂｏｌｄ，１９６４）。该种球虫卵囊较小，主要呈宽卵圆形和椭圆形，经对２００个卵受测量，平均为１５．２４±１．７９×１２．４１±１．０７微米，形状指数为１．２３。卵囊内有１～３个折光性颗粒，多数卵囊为１个，靠近卵囊窄端，少数卵囊内有一个呈颗粒状的外残体。孢子囊有斯氏体和内残体，测１２０个孢子囊，其大小平均为９．５４±０．６１×５．２２±０．４０微米。卵膜内层在印囊窄端处形成一孔状结构，未见极帽。最短孢子化时间为１２小时，潜伏期９２小时，最大裂殖体１８．７５微米。用此卵囊对鸡作致病性试验，４个感染组每只鸡分别感染１万、５万、１０万和２０万个孢子化卵囊。感染一周后结束试验，结果为感染５万、１０万、２０万组与不感染组和感染１０万、２０万组与感染１万组的平均增重差异达极显著（Ｐ＜０．０１），各组均无死亡，感染组的肠道病变记分为０．７５、１．５０、２．５０和２．６７。     

和缓艾美耳球虫早熟系选育及其生物学特性研究

按照Jeffers建立的艾美耳属球虫早熟系选育方法，对和缓艾美耳球虫涿州株(Eimeria mitis Zhuozhou strain，EmiZ)进行了早熟选育。经石歧杂肉仔鸡15次传代之后，EmiZ潜在期由96h缩短至77h，缩短了19h。选育出的和缓艾美耳球虫涿州株早熟系(Eimeria mitis Zhuozhou strain precocious line，EmiZP)在致病性与繁殖力上均较母株弱，但保留了母株的免疫原性。经EmiZP免疫的石歧杂肉仔鸡，可抵抗母株EmiZ的攻虫。对选育的早熟系EmiZP进行放松选择传代10代，其潜在期、排卵囊高峰、卵囊产量和致病性均保持了早熟系的特征，说明所选育的EmiZP已在遗传上保持了稳定。     

人工感染堆型艾美耳球虫的雏鸡小肠病理学观察

本试验利用常规病理学方法,对人工感染5×104个堆型艾美耳球虫卵囊的雏鸡,在感染该球虫后7 d,即在堆型艾美耳球虫的一个生理周期内,对雏鸡的病理变化进行观察。眼观所见主要病理变化为小肠前段充血,肠壁变薄,苍白色,内容物含浆液量增多。病理组织学变化主要为小肠前段黏膜层有脱落,绒毛上皮细胞有变性、坏死、脱落,不同时期细胞内含有多量不同发育阶段的虫体。     

柔嫩艾美耳球虫含HD结构域蛋白特性和功能初步研究

鸡球虫病是由艾美耳球虫引起的一种危害严重的肠道寄生虫病,每年都会给世界各地的养禽业带来巨大的经济损失。目前,该病主要依靠抗球虫药物进行防治,但由于药物的长期及不合理使用导致鸡球虫几乎对所有使用过的抗球虫药均产生耐药性。为研究球虫耐药性产生的分子机制,本实验室前期对柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株以及敏感株进行了转录组测序并获得了敏感株与耐药株的差异表达基因,发现柔嫩艾美耳球虫含HD域蛋白（EtHDCP）在耐药株中上调表达。本研究以柔嫩艾美耳球虫敏感株孢子化卵囊cDNA第一链为模板,成功克隆出EtHDCP基因,构建了原核表达重组质粒pGEX-4T-EtHDCP,并成功诱导表达了重组蛋白rEtHDCP。利用qRT-PCR和Western blot对柔嫩艾美耳球虫敏感株不同发育阶段的转录和翻译水平进行分析,结果显示,EtHDCP在第二代裂殖子的转录和翻译水平高于其他三个阶段（未孢子化卵囊、孢子化卵囊和子孢子）。同时利用Western blot分析了EtHDCP在柔嫩艾美耳球虫敏感株、地克珠利耐药株、马杜拉霉素耐药株中的翻译水平,结果显示,EtHDCP在耐药株中的蛋白翻译水平显著高于敏感株。间接免疫荧光定位结果显示,该蛋白主要定位在子孢子和裂殖子的表面以及裂殖子的胞质内。入侵抑制试验表明,抗rEtHDCP多克隆抗体可有效抑制子孢子对宿主细胞的入侵。这些结果说明该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育、耐药性的产生以及子孢子入侵宿主细胞的过程。     

京海黄鸡柔嫩艾美尔球虫抗性指标的研究简

为进一步筛选有效的鸡球虫病抗性评价指标,并为后续鸡球虫抗性评价体系的建立及鸡球虫抗病育种提供依据,试验将京海黄鸡分为感染和非感染对照2个组,感染组每只雏鸡灌饲2.5×10⁴个柔嫩艾美尔球虫卵囊,用酶联免疫检测法测定10个球虫抗性血液指标。结果显示,①感染后第3天感染组和非感染对照组的临床表现和各项指标差异均不明显,表明感染后这一阶段无法用现有指标检测到显著变化;②感染后3～5 d感染组鸡体增重为负,且感染组和非感染对照组相比差异极显著（P＜0.01）,表明感染后3～5 d的变化最为剧烈;③感染后8 d IFN-γ浓度显著低于非感染对照组（P＜0.05）;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽—过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）浓度均有不同程度提高,且感染组与非感染对照组SOD浓度差异显著（P＜0.05）,其余3个指标均差异极显著（P＜0.01）;④白细胞介素2(IL-2)、IL-16、IL-17、一氧化氮（NO）、β-胡萝卜素（β-C）浓度感染组和非感染对照组相比差异均不显著（P＞0.05）。结果表明,感染后3～5 d内的体增重,CAT、GSH-Px、MDA、SOD 4种抗氧化酶及IFN-γ细胞因子在血浆中的浓度可作为鸡球虫抗性评价指标。     

不同来源柔嫩艾美耳球虫虫株微线体3基因的克隆和序列分析

以8株不同来源柔嫩艾美耳球虫分离株为研究对象,对其艾美耳球虫微线体3(Eimeria tenella microneme protein,EtMIC3)基因进行了RT-PCR扩增、测序及序列分析,并与GenBank上已发表的柔嫩艾美尔球虫相关序列进行比较,研究EtMIC3基因遗传变异情况。结果获得2976 bp的目的片段,各株与FJ374765.1 CDs的序列相似性在99.8%~99.9%之间,各株之间的序列相似性为99.9%~100.0%,各株编码的氨基酸序列与GenBank登记的柔嫩艾美耳球虫EtMIC3蛋白(ACJ11219)相似性在99.6%~99.9%之间,不同地理来源或耐药性虫株之间没有明显差异。本研究首次对中国EtMIC3基因进行了序列分析,结果显示不同来源株EtMIC3基因高度保守,为有效的疫苗候选因子,为进一步进行柔嫩艾美耳球虫基因工程疫苗构建的研究奠定了基础。     

海南霉素钠预混剂对鸡毒害艾美耳球虫的效力试验

为评价海南霉素钠预混剂对鸡毒害艾美耳球虫的疗效,采用人工感染的方式,选用180只鸡健康雏鸡,随机分为5组,每组30只。除不感染不给药组外,每组鸡均经嗉囊感染毒害艾美耳球虫孢子化卵囊2×10^4个。受试药物与对照药物均经混饲给药,海南霉素钠浓度为7.5mg/kg,莫能菌素浓度为100mg/kg,地克珠利浓度为1mg/kg,给药持续时间为10d,期间动物均自由采食。结果显示:海南霉素钠预混剂在防治爆发性球虫病时有良好效果,综合其对鸡人工感染毒害艾美耳球虫的临床症状(血便)、病变损害和卵囊的控制及增重等影响,海南霉素钠预混剂按推荐剂量7.5mg/kg连续使用10d,对鸡毒害艾美耳球虫有较好的疗效。     

地克珠利在健康鸡及球虫感染鸡体内残留的比较研究

比较研究健康鸡和多型艾美尔球虫混合感染鸡饮水（3mg／L,连续自由饮水9d）地克珠利后在血浆、皮肤＋脂肪、肝脏、肾脏、肌肉组织中的残留量,用甲醇提取血浆中的药物,用乙腈提取组织中的药物,用高效液相色谱法测定。结果表明,感染鸡组织中的残留量比健康鸡组织中的残留量要低,消除更快,说明肉鸡的多型艾美尔球虫混合感染对地克珠利在其体内的残留和消除规律有一定的影响。