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相似文献
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1.
《畜牧与兽医》2014,(10):17-20
为了调查华蟾毒精(CBG)对树突状细胞分泌功能的影响,采用小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-NSF)和IL-4体外联合诱导培养小鼠骨髓细胞,获得树突状细胞(DCs)。经免疫磁珠分选法纯化获取CDllc+树突状细胞。试验组CDllc+树突状细胞中加入不同浓度CBG,空白对照组加等量RPMI-1640,阳性对照组加LPS。作用48 h后,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中细胞因子IL-12p70、IL-10及IL-1β含量。结果表明:在适量浓度1050μg/mL范围内,CBG均以剂量依赖的方式上调DCs分泌IL-12p70和IL-1β水平,下调IL-10的分泌水平。说明CBG能够通过调控DCs分泌Th1、Th2型细胞因子的分泌,来诱导Th1型细胞免疫应答。  相似文献   

2.
为观察华蟾毒精(CBG)对小鼠免疫细胞活性的影响,本研究采用MTT法检测小鼠脾淋巴细胞的增殖情况,检测小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能以及小鼠NK细胞对靶细胞的杀伤作用。结果显示,CBG在一定剂量范围内单独或者协同非特异性丝裂原(Con A或LPS)作用能够显著增强小鼠脾淋巴细胞的增殖,CBG单独作用可以显著提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,并能够显著提高小鼠NK细胞对靶细胞的杀伤作用,表明CBG能够提高小鼠免疫细胞的活性。  相似文献   

3.
研究华蟾毒精(cinobufagin,CBG)体外对人胃腺癌细胞MGC-803的抑制作用,并初步探讨其抗肿瘤的作用机制。MTT法测定CBG对胃腺癌MGC-803细胞的生长抑制情况;采用光镜观察CBG对人胃腺癌细胞MGC-803形态的影响;流式细胞术检测CBG对MGC-803细胞的抑制作用、细胞周期及细胞早期凋亡的影响。一定浓度范围内CBG对MGC-803细胞的增殖有剂量、时间依赖性抑制作用;光镜下可见细胞形态明显发生变化,细胞变圆,分泌颗粒增多,细胞折光性下降,大部分细胞脱壁;流式细胞仪检测MGC-803细胞,G1期细胞减少,大量细胞停滞在G2/M期,凋亡细胞增多。CBG对MGC-803细胞的抑制作用与诱导其细胞阻滞及凋亡密切相关。  相似文献   

4.
基于RT-PCR方法,扩增了用于马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)减毒疫苗株CTL表位研究的5匹马的编码经典MHC—I类分子的大部分基因,具体包括编码肽结合区大部分区域、α3区、穿膜区及胞浆区蛋白的基因,并进行了PCR产物的克隆和测序。试验马匹外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)的总RNA提取物经RT-PCR扩增,并将所得产物进行T-A克隆。从每匹马的所有克隆中,分别随机挑取鉴定为阳性重组质粒的21~23个克隆用于测序分析。研究结果表明,5匹试验马匹各自具有3~5个等位基因,由于MHC-Ⅰ分子等位基因表达的共显性特征,可以推测马的基因组内可能存在2~3个基因座对应于这些等位基因,这与国外已有研究结论基本一致。另外,不同马匹PBMC表达的MHC-Ⅰ类分子的差别水平不一致。除了6号与7号和10号马之间MHC-Ⅰ类分子的差异较大,无相同或高度相近的经典MHC-Ⅰ类分子序列外,各马匹间均表达具有1个或1个以上的相同或高度同源的对应经典的MHC-Ⅰ类分子的mRNA。以上研究结果既可作为正在开展的EIAV减毒疫苗株CTL表位研究的基础性、支持性数据,又可进一步丰富国内马的经典MHC-Ⅰ分子多态性方面的相关研究。  相似文献   

5.
简要阐述主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子递呈抗原过程,分析病毒干扰MHC-Ⅰ类分子抗原递呈所采取的策略,以期揭示病毒的免疫逃逸机制,为病毒疫苗的研制提供一定的思路。  相似文献   

6.
基于RT-PCR方法,扩增了用于马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)减毒疫苗株CTL表位研究的5匹马的编码经典MHC-I类分子的大部分基因,具体包括编码肽结合区大部分区域、α3区、穿膜区及胞浆区蛋白的基因,并进行了PCR产物的克隆和测序。试验马匹外周血单个核细胞(Peripheral blood mono-nuclear cells,PBMC)的总RNA提取物经RT-PCR扩增,并将所得产物进行T-A克隆。从每匹马的所有克隆中,分别随机挑取鉴定为阳性重组质粒的21~23个克隆用于测序分析。研究结果表明,5匹试验马匹各自具有3~5个等位基因,由于MHC-I分子等位基因表达的共显性特征,可以推测马的基因组内可能存在2~3个基因座对应于这些等位基因,这与国外已有研究结论基本一致。另外,不同马匹PBMC表达的MHC-I类分子的差别水平不一致。除了6号与7号和10号马之间MHC-I类分子的差异较大,无相同或高度相近的经典MHC-I类分子序列外,各马匹间均表达具有1个或1个以上的相同或高度同源的对应经典的MHC-I类分子的mRNA。以上研究结果既可作为正在开展的EIAV减毒疫苗株CTL表位研究的基础性、支持性数据,又可进一步丰富国内马的经典MHC-I分子多态性方面的相关研究。  相似文献   

7.
采用RT-PCR技术对Ⅰ类新城疫病毒(NDV)09-014分离株完整的融合蛋白(F)基因和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因进行了扩增和遗传进化分析。F基因的序列测定结果表明:该分离株F基因全长为1 792 bp,可编码553个氨基酸,裂解位点的氨基酸组成为112E-R-Q-E-R-L117,具有典型的新城疫弱毒株特征。同源性分析表明本分离株的F基因与Ⅰ类新城疫病毒代表毒株之间核苷酸的同源性为93%~95.2%,而与Ⅱ类新城疫病毒代表毒株的同源性较低,介于70.6%~72.4%。HN基因的序列测定结果表明:HN基因全长2 001 bp,可编码616个氨基酸,同源性分析表明本分离株的HN基因与Ⅰ类新城疫病毒代表毒株之间核苷酸的同源性在92.7%~94.7%之间,而与Ⅱ类新城疫病毒同源性较低,为70.7%~71.5%。根据完整的F基因和HN基因构建的遗传进化树均表明:本分离株在分类地位上属于Ⅰ类新城疫病毒基因3型,因此Ⅰ类新城疫病毒的F基因和HN基因具有相似的进化速率。  相似文献   

8.
为探究猪核苷酸结合寡聚化结构域样受体(NLR)家族端酶募集(CARD)结构域-5(NLRC5)在PK15细胞中的表达情况及其对猪白细胞抗原I类分子(SLA I)表达的调控作用,本研究利用不同终浓度(1μg/mL、1.5μg/mL、2μg/mL)Poly I:C刺激PK15细胞后24 h,通过荧光定量PCR(qPCR)和...  相似文献   

9.
张明  袁慧 《中国兽医科技》2007,37(3):251-254
将150只小鼠随机分成4个处理组和1个对照组,每组30只。给4个处理组小鼠分别一次性注射氯化镉1、2、4、6mg/kg(按体重给药),对照组小鼠注射等体积的生理盐水。于注射后第3、6和9d用原位末端标记法(TUNEL)测定睾丸内生精细胞的凋亡率,并用免疫组织化学方法检测bax和bcl-2基因的表达水平。结果显示,各染毒组小鼠的生精细胞凋亡率明显升高,与对照组相比差异显著(P〈0.05),并具有剂量-反应关系和时间-反应关系。bax基因的表达水平明显上升,而bel-2基因的表达水平明显下降。表明,镉可以诱导小鼠生精细胞凋亡,其机制可能与bax基因上调和bcl-2基因下调有关。  相似文献   

10.
《畜牧与兽医》2015,(1):67-70
为了探讨塑化剂DEHP对雄性生殖系统的影响,本研究通过腹腔注射DEHP的方式使新出生雄性小鼠在发育过程中接触DEHP,利用HE染色、染色体免疫荧光分析和RT-PCR的方法,分析了DEHP对小鼠生殖系统的影响。结果显示:处理组小鼠睾丸曲细精管的直径明显缩小;经DEHP处理后,小鼠精子的数量显著降低,且畸形率显著升高;与精液品质相关的基因表达水平显著降低;但是处理组生精细胞染色体的同源重组水平基本没有变化。由此表明,本研究的DEHP浓度影响了雄性小鼠生殖系统的发育和健康。  相似文献   

11.
旨在通过对舍饲育肥牦牛饲喂不同精粗比日粮,探究其对牦牛体内组织脂肪代谢的影响。选取15头平均体重130.4 kg、年龄2~3岁的健康阉牦牛,随机分为精粗比为3∶7(A组)、5∶5(B组)和7∶3(C组)3个组,每组5头。饲喂90 d。试验最后一天进行屠宰,分别取肝脏、十二指肠和皮下脂肪组织,通过酶联免疫(ELISA)技术和荧光定量PCR(RT-PCR)法对脂代谢相关酶活性及基因表达进行分析。结果:与A组和B组相比,C组牦牛肝脏、十二指肠和皮下脂肪组织中,脂质合成酶固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、酯酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)和脂肪酸合成酶(FASN)酶活性及基因mRNA相对表达量均显著升高(P<0.05);与A组和B组相比,C组牦牛肝脏、十二指肠和皮下脂肪组织中,脂肪酸氧化酶过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、酯酰辅酶A氧化酶(ACO)、肉碱酯酰辅酶A转移酶1(CPT-1)和肉碱酯酰辅酶A转移酶2(CPT-2)酶活性及基因mRNA相对表达量均显著降低(P<0.05),脂质合成酶与脂肪酸氧化酶的酶活性和基因mRNA相对表达量在肝...  相似文献   

12.
本试验旨在探讨饲粮不同非纤维性碳水化合物和中性洗涤纤维比(NFC/NDF)条件下,诱导奶山羊发生亚急性瘤胃酸中毒(SARA)过程中瘤胃上皮细胞胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)及胰岛素样生长因子Ⅰ受体(IGF-ⅠR)的基因表达量的变化。选用12只泌乳期关中奶山羊为试验动物,试验分4期进行,每期15 d,依次饲喂NFC/NDF分别为1.02(Ⅰ期)、1.24(Ⅱ期)、1.63(Ⅲ期)、2.58(Ⅳ期)的4种饲粮,以逐渐增加饲粮精料的方式诱导奶山羊发生SARA,并采用实时定量PCR(qRT-PCR)法对瘤胃上皮细胞中IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR的基因表达量的变化进行相对定量分析。结果表明:随着饲粮NFC/NDF的升高,IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR的基因表达量均出现不同程度的增加,Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期IGF-Ⅰ的基因表达量分别是Ⅰ期的1.70、2.71和9.61倍,IGF-ⅠR的基因表达量分别是Ⅰ期的1.88、3.09和10.19倍。饲粮NFC/NDF为2.58(即SARA期)时,与Ⅰ期相比,IGF-Ⅰ和IGF-ⅠR的基因表达量均出现极显著增加(P<0.01)。结果提示,以提高饲粮NFC/NDF的方法逐渐诱导SARA,IGF-Ⅰ及IGF-ⅠR的基因表达量显著提高,SARA发生后,它们的表达量有大幅增加。  相似文献   

13.
为研究玉米-豆粕型日粮中赖氨酸水平对70~90日龄生长肉兔生产性能、血清类胰岛素生长激素浓度及其基因表达的影响。选择100只体重接近、前期饲养相同的70日龄新西兰肉兔为试验动物,随机分成5组,以赖氨酸含量分别为0.55%、0.65%、0.75%、0.85%和0.95%的5种日粮为试验处理,进行为期20 d的饲养试验。结果表明,随日粮赖氨酸水平的增加,90日龄生长肉兔生长性能组间差异不显著(P>0.05);血清胰岛素、生长激素、类胰岛素生长激素浓度显著提高(P<0.05),分别在0.85%,0.75%和0.95%达到最大值;肝脏和肌肉IGF-Ⅰ相对表达量也明显增加(P<0.05)。综上所述,70~90日龄生长肉兔血清IGF-Ⅰ浓度和基因表达受日粮赖氨酸水平的影响。  相似文献   

14.
应用Real-time PCR方法检测不同浓度(0、1、10和100 ng/mL)胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)处理后的体外培养奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白和脂肪合成相关基因mRNA的相对表达量。结果表明,添加不同浓度IGF-Ⅰ对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞IGF-Ⅰ受体基因(IGFIR)、IGF-Ⅰ结合蛋白-3基因(IGFBP3)、α-s1-酪蛋白基因(CSN1S1)和κ-酪蛋白基因(CSN3)mRNA的相对表达丰度均无显著影响(P>0.05)。随着IGF-Ⅰ添加浓度的增加,β-酪蛋白基因(CSN2)、乙酰辅酶A羧化酶基因(ACACA)、脂肪酸合成酶基因(FASN)和脂肪酸结合蛋白-3基因(FABP3)mRNA的相对表达丰度显著上调(P<0.05)。提示,IGF-Ⅰ作为一种重要细胞因子参与调节乳腺上皮细胞乳蛋白和乳脂肪相关基因mRNA的表达。  相似文献   

15.
为研究禽致病性大肠杆菌(APEC)六型分泌系统(typeⅥsecretion system,T6SS) clpV基因对Ⅰ型菌毛表达的影响,本研究利用Red同源重组系统构建了禽致病性大肠杆菌clpV基因缺失株TW-XM△clpV.将clpV基因克隆到表达载体pBR322中,构建相应回补株TW-XMC△clpV.通过PCR...  相似文献   

16.
本试验将三七总皂甙(PNS)体外作用于大黄鱼肾细胞,通过活细胞计数和荧光定量PCR检测,初步了解PNS对大黄鱼肾细胞生长及部分免疫相关因子表达的影响。结果显示,40~200μg/mL浓度的PNS对大黄鱼肾细胞生长无明显影响,但浓度达到1 mg/mL以上时,对细胞生长有负面影响;10~1 000μg/mL浓度的PNS对大黄鱼肾细胞Toll样受体5mRNA的表达有一定的上调作用,但对Toll样受体3的表达有一定的下调作用;PNS浓度为10~100μg/mL时对大黄鱼肾细胞碱性磷酸酶的表达无明显影响,但浓度达到1 000μg/mL时对该因子的表达有下调作用;PNS浓度为10μg/mL时对大黄鱼肾细胞溶菌酶的表达无明显影响,但浓度达到100μg/mL以上时对该因子的表达具有一定的下调作用。  相似文献   

17.
探讨日粮精氨酸水平对断奶~2月龄生长肉兔氮代谢和肝脏胰岛素样生长因子( IGF-Ⅰ)基因表达的影响.选用断奶肉兔100只,随机分成5组,在基础日粮中添加不同水平的精氨酸(0、0.2%、0.4%、0.6%和0.8%),预试期7d,正试期23 d.结果表明:日粮中不同水平精氨酸对生长肉兔的尿氮水平影响显著(P值为0.016 7),各添加组的尿氮含量显著低于不添加组(P<0.05),日粮不同水平精氨酸对其它氮代谢指标均无显著影响(P>0.05).采用实时荧光定量PCR SYBR Green Ⅰ荧光染料法对家兔肝脏细胞中IGF-Ⅰ基因的表达水平进行了相对定量分析,结果表明:日粮不同精氨酸水平显著影响肝脏IGF-Ⅰ mRNA表达量(P值为0.018 2),并且添加精氨酸组IGF-Ⅰ mRNA表达量明显高于不添加组 (P<0.05),各添加组之间差异不显著(P>0.05).  相似文献   

18.
《中国兽医学报》2015,(4):549-552
分别以活菌浓度为109(A组)、106(B组)ccu/mL的(MG)F株及生理盐水(C组)点眼接种SPF鸡,采用流式细胞技术及ELISA方法对免疫前后外周血淋巴细胞(PBL)中Bu-1a+B、TCRγδ+CD3+T细胞比例及血清IgM、IgG、IgA的动态变化规律进行研究。结果显示各组Bu-1a+B/PBL于免疫后5、7d由高至低依次为A、B和C组,且各组差异显著(P0.05);A、B组TCRγδ+CD3+T/PBL于免疫后3d略有升高且比值较接近,都高于C组,但差异不显著(P0.05);各组IgM于免疫后7、14和21d差异显著(P0.05),IgG于免疫后14、21和28d差异显著(P0.05),IgA于免疫后28d差异显著(P0.05),由高至低依次为A、B、C组。研究结果表明,免疫(MG)F株可较好的提高Bu-1a+B、血清IgM、IgG、IgA介导的体液免疫作用,且(MG)F株活菌浓度与Bu-1a+B/PBL比值、血清IgM、IgG、IgA浓度呈正相关;但免疫(MG)F株不能显著提高鸡外周血TCRγδ+CD3+T/PBL比值,且(MG)F株活菌浓度与TCRγδ+CD3+T/PBL比值无明显相关性。  相似文献   

19.
本文旨在研究不同营养水平对母猪妊娠早期胚胎存活和血液及繁殖组织中类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、胰岛素和生长激素(GH)分泌的影响。选取配种后的母猪63头,随机分配到三个营养水平组(高、中、低),各营养水平采食量按2倍、1.2倍和0.6倍能量维持供给。分别在母猪妊娠第12、25和35d取血,将母猪屠宰收取子宫液,同时测定胚胎存活率。用酶联吸附试验法检测血清和子宫液中IGF-Ⅰ、胰岛素和GH的浓度。结果表明:(1)胚胎存活率,在妊娠第12、25和35d中营养水平组均显著高于高营养水平组(P<0.05),中营养水平组妊娠第12d时,与低营养水平组间差异不显著(P>0.05),而妊娠第25和35d的胚胎存活率显著高于低水平组(P<0.05);(2)高水平组妊娠第12和25d血清中IGF-Ⅰ浓度显著高于中水平组(P<0.05),极显著高于低水平组(P<0.01)。中水平组妊娠25d血清中IGF-Ⅰ浓度显著高于低水平组(P<0.05)。高水平组妊娠35d血清中胰岛素浓度高于中水平组(P<0.05),高水平组妊娠第12、25和35d血清中胰岛素浓度均高于低水平组(P<0.05)。高水平组妊娠25和35d血清中GH浓度均显著低于中水平组(P<0.05);(3)高水平组妊娠12d子宫液中IGF-Ⅰ浓度显著高于低水平组(P<0.05)。中水平组妊娠25d子宫液中胰岛素浓度有高于低水平组的趋势(P=0.053)。高水平组妊娠25d子宫液中GH浓度显著低于中水平组(P<0.05)。在妊娠35d内以中水平饲喂初产母猪具有较高的胚胎存活率。不同营养水平显著影响初产母猪妊娠早期血液和子宫液中IGF-Ⅰ、胰岛素和GH的分泌量。不同营养水平可能通过影响IGF-Ⅰ的分泌量而影响早期胚胎发育,这种作用可能与胰岛素、GH的分泌变化有关。  相似文献   

20.
本试验以IPEC-1细胞为材料,探究解淀粉芽孢杆菌SC06(以下简称SC06)与肠毒性大肠杆菌K88(以下简称K88)对肠上皮屏障功能相关基因表达的影响。将IPEC-1细胞分为4个组并作不同处理:CK组为空白对照,不作处理; SC06组和SC06+K88组用含有108CFU/mL SC06的DM EM/F12培养基先预处理6 h,之后K88组和SC06+K88组加入含有108CFU/mL K88的DM EM/F12培养基处理3 h;乳酸脱氢酶(LDH)活性测定另设以含1%Trinton X-100的DM EM/F12培养基处理的Trinton组为阳性对照。各组细胞均培养9 h。结果表明:1)与CK组相比,K88和SC06单独处理均显著降低了葡萄糖转运载体2 (GLUT2)和小肽转运载体1(PepT1)基因的相对表达量(P<0.05),SC06单独处理显著增加了丙氨酸/丝氨酸/半胱氨酸/苏氨酸转运载体2(ASCT2)和兴奋性氨基酸转运载体1(EAAC1)基因的相对表达量(P<0.05);与K88单独处理相比,SC06预处理显著抑制了K88诱导的LDH活性和EAAC1基因相对表达量的增加(P<0.05)。2)与CK组相比,K88单独处理显著上调了闭锁小带蛋白-1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)基因的表达(P <0.05),显著下调了密封蛋白(claudin)-3、claudin-4和黏蛋白-1(MUC1)基因的表达(P <0.05); SC06单独处理显著上调了ZO-1、claudin-4基因的表达(P <0.05); K88和SC06单独处理均显著促进了天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、凋亡相关因子(Fas)及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)基因的表达(P<0.05),显著抑制了天冬氨酸蛋白水解酶-9(caspase-9)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)基因的表达(P<0.05),且K88单独处理还显著降低了天冬氨酸蛋白水解酶-8(caspase-8)基因的表达(P<0.05)。与K88单独处理相比,SC06预处理显著阻止了由K88诱导的ZO-1、caspase-3和Bcl-2基因相对表达量的增加(P<0.05)及claudin-3、claudin-4、MUC1、caspase-9和Bax基因相对表达量的降低(P <0.05)。3)与CK组相比,K88单独处理显著上调了肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及转化生长因子β(TGF-β)基因的表达(P<0.05),并显著上调了核转录因子-κB-p50(NF-κB-p50)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(TRAF-6)、髓样分化因子88(MyD88)、核苷酸结合寡聚域1(NOD-1)及Toll样受体-4(TLR4)基因的表达(P <0. 05); SC06单独处理显著降低了IL-6、NOD1与Toll样受体-6(TLR6)基因的表达(P<0.05),显著上调了TG F-β和MyD88基因的表达(P<0.05)。与K88单独处理相比,SC06预处理显著抑制了由K88导致的MyD88、NOD-1及TLR4基因相对表达量的增加(P<0.05)。综上所述,K88诱导IPEC-1细胞发生炎症反应,破坏肠上皮细胞的完整性,SC06在一定程度上有缓解作用。  相似文献   

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