体细胞克隆太湖猪出生

以中国太湖猪胎儿成纤维细胞为核供体,以体外成熟卵母细胞为核受体,以杜洛克猪为代孕母猪,进行了太湖猪体细胞克隆技术的研究,成功地获得了首例体细胞克隆太湖猪仔猪.经微卫星DNA多态性鉴定,确定克隆猪来自供核细胞,与代孕母猪无亲缘关系.本研究将为体细胞克隆技术在我国太湖猪育种、建立人类疾病模型等研究方面提供可行的技术方法.     

猪体细胞核移植研究进展

动物克隆技术对于优良种畜的复制、减少实验用动物数目、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培育以及人类疾病的治疗都具有重要的意义。文章主要介绍了影响体细胞克隆猪的几个因素,涉及胞质受体的选择与去核、供核细胞的选择与移植、激活、重组胚移植以及供体细胞与受体卵母细胞的细胞周期的同步化等。     

猪体细胞核移植研究进展

动物克隆技术对于优良种畜的复制、减少实验用动物数目、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培育以及人类疾病的治疗都具有重要的意义。文章主要介绍了影响体细胞克隆猪的几个因素,涉及胞质受体的选择与去核、供核细胞的选择与移植、激活、重组胚移植以及供体细胞与受体卵母细胞的细胞周期的同步化等。     

影响猪体细胞核移植效率的因素

卵母细胞对猪核移植效率的影响,包括卵泡直径、成熟培养前卵母细胞正确的分级、体外成熟培养液、激素等;供体细胞对猪核移植效率的影响,包括细胞类型的选择、供体细胞所处的细胞周期;不同核移植方法的影响,包括去核方法、融合方法、激活。     

体细胞核移植技术在猪育种上的应用

基因工程带动了生物工程的迅猛发展,转基因技术在改良家禽品种上得到广泛的应用.本文就体细胞克隆猪的关键技术加以论述.     

体细胞核移植生产转ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)的猪胚胎

本研究通过脂质体介导的方法将来源于线虫C.Briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因（sFat-1）转染至大白猪胎儿成纤维细胞。采用600μg·mL^-1G418药物浓度,经连续10 d筛选及PCR、RT-PCR鉴定,获得11个转基因阳性细胞克隆。以体外成熟42 h的猪卵母细胞与转基因细胞构建重构胚。经体外培养后观察,转基因克隆胚胎与非转基因胚胎的卵裂率（76.6%±4.1%vs.81.6%±3.1%）和囊胚率（10%±1.97%vs.9.7%±1.4%）均无显著差异（P〉0.05）。采用放线菌酮进行化学二次激活时,胚胎的囊胚率显著高于采用电二次激活胚胎（20.6%±0.89%vs.10%±1.97%,P〈0.05）,但二者的卵裂率并无显著差异（72.4%±4.96%vs.76.6%±4.1%,P〉0.05）。研究表明,通过脂质体介导的方法,可以获得转sFat-1基因大白猪胎儿成纤维细胞系;以该细胞系为核供体构建的转基因克隆胚胎与非转基因克隆胚胎的发育能力无显著差异;二次激活采用放线菌酮进行化学激活能够显著提高胚胎的囊胚发育率。     

体细胞核移植技术生产猪植酸酶转基因胚胎的研究

为获得具有植酸酶腮腺特异性表达的猪转基因克隆胚胎,本研究使用植酸酶腮腺特异性表达的DNA质粒(包含腮腺分泌蛋白(parotid secretary protein,PSP)启动子与终止子序列、Neo筛选基因、绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因和高比活的植酸酶appA基因),采用脂质体转染和基因素418(G418)药物抗性筛选的方法获取稳转细胞系,并利用体细胞核移植技术获得植酸酶转基因胚胎。结果表明,本研究构建的DNA质粒可用于细胞筛选,且质粒越小,细胞的转染效率越高,14.89 kb的YM6552仅获得了7.1%的转染率,EGFP质粒则获得了43.4%的转染效率。在单克隆形成上,较小的pYN3600也获得了更高的单克隆形成数(25个),其中表达EGFP的单克隆有14个,植酸酶PCR阳性集落有11个,高于YM6552的单克隆数(19、8和6)。转基因细胞构建重构胚胎后,所有的胚胎均能表达绿色荧光蛋白,虽其体外发育能力有所下降,但差异不显著(P>0.05)。综上所述,本研究所采用的植酸酶质粒、细胞筛选方法和核移植技术可生产植酸酶重构胚。     

胎儿成纤维细胞的培养分离方法对猪体细胞核移植胚胎发育潜力的影响

研究采用不同传代的培养方法和不同方法处理及不同培养分离法探讨胎儿成纤维细胞的处理方法对猪体细胞胚胎发育潜力的影响。结果表明:(1)100%长满汇合胎儿成纤维细胞的核移植融合率高于70%～80%的胎儿成纤维细胞(P<0.05),分裂率高于血清饥饿培养的胎儿成纤维细胞(P<0.05),但囊胚率差异不显著(P>0.05);(2)猪胎儿成纤维细胞冷冻-解冻后的核移植分裂率和囊胚发育率均显著低于新鲜和4℃冷藏的细胞(P<0.05),但融合率无显著差异(P>0.05),表明猪胎儿成纤维细胞解冻后不宜直接进行核移植;(3)采用组织块法和酶消化法分离得到的胎儿成纤维细胞所构建的重构胚胎在融合率、分裂率和囊胚率方面没有显著差异(P>0.05)。表明100%长满汇合培养是较好的猪胎儿成纤维细胞培养处理方法;猪胎儿成纤维细胞解冻后不宜直接进行核移植;组织块法和酶消化法均可用于分离培养猪体细胞核移植的胎儿成纤维细胞。     

利用梅山猪生产商品瘦肉猪的再思考

以梅山猪为母本、丹麦长白猪为第一父本、美国杜洛克为终端父本生产的“社长梅”商品瘦肉猪，其瘦肉率较高，肉质优良，这是前几年的科研成果，在我市郊区已被较大规模地推广。随着人民生活水平的提高，人们对瘦肉的需求量也不断增加，因此，上海周边的一些省市开始采用“三洋”杂交，即用大约克为母本、长白猪为第一父本、杜洛克为终端父本，生产“杜·长大”商品瘦肉猪。就目前看．这是一个世界范围内采用的优良组合，其瘦肉率可达58％以上．明显优于“社长梅”的54％左右。在对肉质要求还没有引起足够重视的今天，周边省市的“社长大”猪…     

体细胞克隆猪的研究与展望

用体细胞核移植的方法生产的克隆猪诞生至今已近5年，虽然同胚胎细胞核移植相比，体细胞核移植技术难度大，成功率低，但近年来用体细胞核移植技术克隆猪有了更深入的研究，在体细胞核移植基本机理和关键技术上取得了一定的进展。综述了用核移植的方法生产体细胞克隆猪的技术关键和难点及应用情况，并对提高猪体细胞核移植效率的策略进行了分析。     

哺乳动物异种体细胞核移植技术的应用及影响因素

哺乳动物异种体细胞核移植技术是在同种细胞核移植技术基础上发展起来的动物生殖技术,其在濒危动物保护、人类胚胎干细胞及生物基础学科研究等方面已展现出美好的前景.目前,该技术处于发展阶段,还存在很多值得研究的问题.文章介绍了动物异种体细胞核移植技术在国内外的研究现状,分析了影响异种体细胞核移植技术发展的因素,并对该技术的发展前景进行了展望.     

哺乳动物体细胞克隆技术的应用前景

体细胞克隆的成功为农业、医学以及生物学基础研究提供了新的工具。体细胞核移植技术和转基因、胚胎干细胞等现代生物技术的相互渗透更是活跃。当前,尽管体细胞核移植效率仍然不甚理想,而且克隆后代成活率低、畸形率高,但人们还是对该技术的发展充满了憧憬,尤其希望借助这一手段在攻克一些长期困扰人类的疑难疾病上有所突破。作者则总结了体细胞核移植在上述各方面的应用价值,供同行参考。     

小鼠体细胞核移植研究进展

体细胞核移植是目前生物技术领域研究的热点之一。小鼠作为一种广泛使用的实验动物模型,具有遗传背景清楚、繁殖周期短、饲养成本较低等优点,因此小鼠体细胞核移植具有较大的研究价值。作者简要回顾了小鼠体细胞核移植的发展史,并对体细胞核移植方法、影响核移植效率的因素,包括供核细胞的类型、供核细胞的体外处理、核质细胞周期协调、重构胚的激活、体外培养体系及核移植分子机制等进行了综述,并展望了小鼠体细胞核移植的应用前景。     

绵羊去透明带卵母细胞体细胞核移植研究

为探索简化的核移植程序,本研究分析不同成熟培养时间、去核过程中紫外光照时间、融合电压强度、激活剂种类、不同培养方法对绵羊去透明带卵母细胞核移植的影响。结果表明:卵母细胞成熟培养18～19 h后去除透明带,其极体排出和附着效果最佳。采用1.9 kV/cm直流电压融合去核卵母细胞与颗粒细胞,融合率为88.2%,效果最好。离子霉素对重构胚具有较好的激活效果,卵裂率为82.1%,囊胚率为10.4%;压制WOW(s孔中孔)发育组卵裂率和囊胚发育率与四孔板培养组相比无显著差异,但卵裂率和囊胚发育率并不高;去除透明带的绵羊卵母细胞采用衰减1/4的UV照射10 s辅助去核后,卵裂率为35.6%,但重构胚未能发育至囊胚。结果显示,通过去透明带辅助显微操作去核的方法进行的绵羊体细胞克隆程序较易掌握。     

供体细胞对哺乳动物体细胞核移植的影响

哺乳动物体细胞核移植技术(克隆)在农业、生物技术、医药生产和濒危动物保护等方面具有很大的潜力和应用价值,已成为目前发育生物学研究的重要方法.文章依据近年来国内外在动物克隆技术方面的资料,分析了供体细胞类型、供体细胞动物年龄、供体细胞所处细胞周期、体外传代次数以及供体动物性别等因素对克隆动物效率的影响及可能原因.     

体细胞核移植技术在转基因动物研究中的应用

利用基因工程技术将目的基因整合入动物体细胞染色体中,并将其作为供体核移植入受体－－去核卵母细胞构成重建胚,然后将其移植入假孕母体,待其妊娠、分娩,便可得到经定向遗传修饰的转基因克隆动物。本文就这一领域的发展历史、研究现状、应用前景及存在的问题等方面作一概述。     

牛体细胞核移植技术

对牛体细胞核移植技术中核供体细胞周期同期化处理，电融合条件及去核方法等进行了研究。结果表明，血清－饥饿组（细胞周期同期化处理组）的移核重构胚细胞融合率（83．3％），卵裂率（70％）和囊胚发育率（33．8％）与血清－选择组对应指标间无显著性差异（82．3％，69．2％，32．4％，P＞0．05）；但上述2组分别极显著高于血清－随机组（64．8％，33．8％，4．35％，P＜0．01），试验确立了场强1.025kV/cm，脉冲宽度50μs，连续2次脉冲为最佳电融合条件。摸索出的点击去核法，对卵母细胞进行去核，去核成功率达90％，极显著高地吸引法的68．3％（P＜0．01）；其囊胚发育率为34．1％，显著高于吸引法的18．0％（P＜0．05），与挤压法（20．9％）相比差异不显著（P＞0．05），移植重构胚胎移植后，产2头成活的体细胞克隆牛。     

DNA甲基转移酶抑制剂在动物体细胞核移植研究中的应用

甲基化对胚胎发育和机体形成具有重要的调控作用,体细胞核移植胚胎常常表现出异常的DNA甲基化,DNA甲基转移酶抑制剂能抑制细胞的DNA甲基化水平,从而达到提高体细胞核移植效率的作用。作者主要综述了DNA甲基转移酶抑制剂在动物体细胞核移植研究中的应用。     

Research Advances on Somatic Cell Nuclear Transfer in Yanbian Yellow Cattle

Bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT) is a sophisticated technique system,including oocyte maturation,donor cell preparation and oocytes microscopic operation,fusion,activation and culture.Although the birth of cloning cattle has been reported recently,the efficiency of somatic cell cloning has remained lowly.In order to establish the optimization somatic cell nuclear transfer system of Yanbian Yellow cattle,this review summarized only from 6 main aspects mentioned above in this field.