胶质芽胞杆菌的发酵工艺研究和田间应用

以选育出的胶质芽孢杆菌突变株Bm—j为发酵试验用菌，研究了接种量、氮源、氮源配比、氮源浓度、淀粉浓度、发酵初始pH值、发酵后期温度以及风量对发酵时间、菌量、芽孢量的影响，并确定了最佳发酵条件为：接种量20％、淀粉浓度1．2％、氮源浓度0．25％、发酵初始pH值7．0～7．2、发酵后期温度35～37℃、发酵后期风量1：1．2。用Bm—j发酵液制成微生物肥(Bm—j肥)，储存1a后检测，活菌保留仍在90．9％。田间应用表明：玉米和水稻每公顷使用15kg Bm—j肥，增产效益最佳，其中玉米产量比对照增加2010kg／hm^2；水稻产量比对照增加935．5kg／hm^2。     

一株产脂肪酶芽胞杆菌菌株SJXYZ的鉴定

[目的]对分离自市售高温灭菌牛奶的产脂肪酶菌株SJXYZ进行鉴定。[方法]通过16S rRNA基因序列及系统发育树分析、形态观察和生理生化特性分析,对菌株SJXYZ生物学特性进行初步鉴定。[结果]16S rRNA基因序列分析显示该菌株属于芽胞杆菌属(Bacillus),与B.altitudinis 41KF2b~T(高地芽胞杆菌)、B.xiamenensis HYC-10~T(厦门芽胞杆菌)、B.safensis FO-36b~T(沙福芽胞杆菌)、B.zhangzhouensis DW5-4~T(漳州芽胞杆菌)、B.australimaris NH7I_1~T(南海芽胞杆菌)和B.pumilus A~TCC 7061~T(短小芽胞杆菌)相似度皆为97%以上。系统发育分析显示,该菌株与B.altitudinis 41KF2b~T亲缘关系最近,但形成独立的进化分支,无法归入已知物种。菌株SJXYZ为革兰氏阳性,直杆状,运动性,最适温度为30~35℃,适宜p H为5~9,适宜盐度(Na Cl)为0%~5%;产脂肪酶,不产纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶;对氨苄西林(10μg)、庆大霉素(10μg)、氟哌酸(10μg)、头孢唑啉(30μg)、四环素(30μg)、头孢噻吩(30μg)、链霉素(10μg)敏感。所测特性与B.altitudinis 41KF2b~T有较大的差异。[结论]菌株SJXYZ可能为新的物种,暂命名为Bacillus sp.SJXYZ。     

一株产纳豆激酶芽胞杆菌分离及鉴定

[目的]筛选并鉴定纳豆芽胞杆菌.[方法]筛选芽胞杆菌,显微镜观察其菌落形态,生理生化鉴定,测定其生长曲线及产纳豆激酶的酶活力.[结果]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023.该菌最高酶活力可以达263.38 IU/ml.[结论]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023,为下一步开发成具有溶栓功能的食品或药品奠定基础.     

利用玉米秸秆酶解液发酵胶质芽胞杆菌WY120的研究

胶质芽胞杆菌WY120是微生物肥料生产常用菌株,传统的生物钾肥菌剂发酵生产的主要原料是采用淀粉、蔗糖和葡萄糖等。以玉米秸秆为原料,通过与淀粉蔗糖培养基发酵培养胶质芽胞杆菌的比较研究,探讨了玉米秸秆酶解液作为碳源发酵生产胶质芽胞杆菌的可行性。结果显示,玉米秸秆酶解液作为碳源发酵生产的胶质芽胞杆菌,其活菌数为3.52×108 cfu/mL,是淀粉蔗糖培养基的1.63倍。秸秆酶解液培养基的优化试验结果显示,其最佳初始葡萄糖浓度为15 g/L,活菌数可达到3.95×108 cfu/mL。当转速为250 r/min,pH控制在7.0~7.2时,5 L发酵罐的试验结果显示,其活菌数高达6.76×108 cfu/mL,是摇瓶培养的1.71倍。研究结果表明,玉米秸秆可替代传统的淀粉蔗糖为碳源发酵生产胶质芽胞杆菌,为玉米秸秆资源化利用提供了一种新途径。     

1株枯草芽胞杆菌的鉴定及其产脂肪酶特性

【目的】对1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定并对其产脂肪酶特性进行研究,为后期规模化发酵生产脂肪酶及其在畜牧业中的实际应用奠定基础。【方法】采用形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析,对实验室分离保存的1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定;通过菌落和芽胞计数、生长曲线测定,对MY016的生长特性进行分析;通过产脂肪酶量和酶活检测、脂肪酶基因扩增和系统进化分析,对MY016菌株的产脂肪酶特性进行探讨。【结果】产脂肪酶细菌MY016经形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA分析,被鉴定为枯草芽胞杆菌。MY016在培养2 h后进入对数生长期,生长迅速;培养10 h其菌液600 nm吸光度最高达到4.7,随后进入稳定期;12 h时活菌数约为5.3×10⁹ CFU/mL;培养22 h后开始二次生长,吸光度最高达5.2;培养46 h后进入衰退期。芽胞观察和计数结果显示,MY016菌株在接种16 h后开始形成芽胞,随着培养时间延长,芽胞形成率逐渐升高,直至72 h完全形成芽胞,芽胞数最高为1.9×10⁹ CFU/mL。产脂肪酶能力检测结果显示,MY016菌株在培养36 h时产酶量达到最大,为246.918 mg/L,然后总酶量逐步降低;48 h时总酶活达到最高,约为281.883 U/L。成功扩增了MY016菌株的脂肪酶基因,并构建系统进化树,结果显示MY016脂肪酶基因与其他芽胞杆菌的脂肪酶基因亲缘关系最近,表明其脂肪酶基因进化保守。【结论】产脂肪酶枯草芽胞杆菌MY016生长迅速、产酶量稳定,总酶活较高,适合后期规模化生产和在畜牧业中推广应用。     

芽胞杆菌分类研究进展

芽胞杆菌属Bacillus是一类产芽胞的革兰氏阳性细菌,好氧或兼性厌氧生活,产生具有抗逆性球形或椭圆形芽胞.芽胞对高温、紫外线、干燥、电离辐射和很多有毒的化学物质都有很强的抗性.由于芽胞的特性,使得芽胞杆菌的分类研究越来越重要.《国际系统与进化微生物学杂志》是由普通微生物学会(SGM)出版的,是国际微生物分类学界公认的...     

枯草芽胞杆菌芽胞表面展示外源蛋白的研究进展

枯草芽胞杆菌是一种生物安全的革兰氏阳性细菌,在营养匮乏的环境下,可形成具有强抗逆性的芽胞。枯草芽胞杆菌的芽胞由核心、皮层、孢子外套蛋白三部分组成,目前已成功利用枯草芽胞杆菌芽胞外套蛋白CotB、CotC、CotG、CotX和OxdD为载体,将酶蛋白、抗原蛋白或荧光标记蛋白等展示于芽胞表面。芽胞表面展示的蛋白通常具有较好的稳定性、易于纯化和安全性好等优点,可应用于医药、食品及饲料工业等领域,具有较大的应用前景。详细介绍了枯草芽胞杆菌芽胞的分子特点及芽胞表面展示系统的构建过程及其应用前景,为芽胞表面展示载体的基础及应用研究奠定基础。     

苏云金芽胞杆菌CT—43的芽胞萌发及芽胞和伴胞晶体的形成

在电镜下观察了苏云金芽胞杆菌菌株ＣＴ－４３的芽胞萌发、芽胞和伴胞晶体的形成过程。芽胞萌发分活化、萌动和脱出３个阶段。芽胞形成分为轴丝形成、前芽胞隔膜形成、前芽胞形成、初生细胞壁形成．芽胞外套形成、芽胞衣片层形成和芽胞形成７个阶段。伴胞晶体形成从芽胞形成第２阶段开始，由一些小结晶聚集而成。晶体镶嵌在菌株ＣＴ－４３中很普遍。结合实验对伴胞晶体形成的调控和外膜的形成等进行了讨论。     

一株产蛋白酶海洋细菌的分离鉴定及发酵条件研究

从舟山海产品加工厂收集废弃鱼虾蟹等下脚料,利用脱脂奶平板培养基进行产蛋白酶菌株的分离筛选,获得的菌株利用Folin-酚法进行酶活测定,将酶活性最高的菌株进行16S rDNA分子鉴定,绘制系统进化树。研究初始pH、盐度、培养温度、培养时间等单因素对蛋白酶活性的影响,再利用Expert-Design软件中的响应面分析方法(RSA)对该菌株的发酵条件进行系统优化。结果表明,分离筛选得到1株具有较高蛋白酶活性的海洋细菌SP1,酶活测试结果显示该海洋细菌SP1的初始酶活为88.6 U·mL ^-1,16S rDNA分子鉴定结果显示该菌株属于蜡样芽胞杆菌Bacillus cereus。菌株Bacills cereus SP1的单因素培养结果显示,该菌株培养时间48 h、初始pH值8.5、NaCl浓度25 g·L ^-1、培养温度40 ℃对应的酶活最高。通过Expert-Design软件,利用Box-Behnken Design(BBD)方法进行响应面分析,优化设计培养条件,BBD响应面分析结果显示,培养温度35.7 ℃、初始pH 7.7、NaCl浓度为20.7 g·L ^-1、培养时间48 h,摇床转速120 r·min ^-1,5%的接种量,实际酶活为101.8 U·mL ^-1,比优化前的酶活提高了14.9%,预测精度达到95.8%。     

芽胞杆菌种类脂肪酸鉴定与分子鉴定方法的比较

基于ITS序列和脂肪酸鉴定方法对从土壤中分离得到的16株芽胞杆菌进行分类研究,与分子鉴定结果相比,脂肪酸种的鉴定准确率可达到99%以上。通过生物软件SPSS和Mega分别对16株菌进行聚类分析,结果表明,脂肪酸比ITS更适合于芽胞杆菌的分类研究,根据脂肪酸成分可以将16株芽胞杆菌准确聚在一起,而ITS则不能。芽胞杆菌特征性脂肪酸为15∶0ANTEISO和15∶0ISO,但不同种芽胞杆菌的此类脂肪酸含量不同。对芽胞杆菌3大类菌群主要特征性脂肪酸的含量比例(15∶0ISO/15∶0ANTEISO)进行了分析,其中比较特殊的为蜡状芽胞杆菌类群,蜡状芽胞杆菌主要脂肪酸为15∶0ISO,其次为13∶0ISO,而15∶0ANTEISO的含量很低,而且不是主要类型,15∶0ISO/15∶0ANTEISO的比值约为5.6～7.9。简单芽胞杆菌群主要脂肪酸为15∶0ANTEISO和15∶0ISO,15∶0ISO/15∶0ANTEISO比值约为1/6。巨大芽胞杆菌类群主要脂肪酸15∶0ISO和15∶0ANTEISO含量相近,其余脂肪酸远远低于这2种主要脂肪酸。巨大芽胞杆菌的15∶0ISO/15∶0ANTEISO的比值约为4/5～5/4,菌株FJAT-4500为短小芽胞杆菌,其15∶0ISO/15∶0ANTEISO比值约为2。短小芽胞杆菌和巨大芽胞杆菌归为一类是因为其脂肪酸类型相近,但含量并不同。枯草芽胞杆菌群主要脂肪酸15∶0ISO的含量小于15∶0ANTEISO,15∶0ISO/15∶0ANTEISO的比值为1/3～2/3。     

地衣芽孢杆菌生防菌株SDYT-79发酵条件优化

探讨地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)SDYT-79菌株液体发酵条件,为提高其活性次级代谢产物的产量提供技术支持。通过单因子试验和正交试验,对该菌株的最适发酵培养基成分及发酵条件进行优化。结果表明:地衣芽孢杆菌SDYT-79菌株培养基各组分的最佳配比为:蔗糖3.0%、蛋白胨0.3%、酵母膏2.0%、氯化钠0.3%,最佳发酵培养条件为:初始pH值9.0、培养温度24℃、培养时间36h、250mL三角瓶装液量120mL、接种量体积分数0.5%~1%。在最佳发酵培养基和培养条件下,SDYT-79菌株抑菌能力提高14.3%。     

一株胶质芽孢杆菌的筛选和鉴定

从河南铝土矿中分离到菌株LV1-2,将其接种到含伊利石矿粉的浸矿液中，170r／min摇床30℃培养7d，离心后测得接种LV1-2的溶液中的硅浓度比对照液中的增加110．02％，说明LV1-2对伊利石有脱硅作用．通过扫描电子显微镜、革兰氏染色、荚膜染色、鞭毛染色和芽孢染色的观察，生理生化特性的测定，以及16S rDNA序列的比对分析，菌株Lv1-2鉴定为胶质芽孢杆菌．     

胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)胞外多糖的分离纯化

以胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus)(硅酸盐细菌)为材料,经液体发酵培养后,通过碱提醇沉法得到胞外多糖粗提物。紫外光谱分析表明,该粗提物不含有核酸和蛋白质,经DEAE-纤维素离子交换柱层析分离纯化得到多糖纯品。通过Sephadex G-100凝胶柱层析和醋酸纤维薄膜电泳鉴定,其为均一组分不含有其他多糖;化学法分析表明,多糖纯品含有氨基葡萄糖、葡萄糖醛酸,不含有硫酸根。     

狗牙根根际胶质芽孢杆菌的分离及鉴定

从狗牙根(Cynodon dactylon L.)根际土壤中筛选到5株胶质芽孢杆菌(Bacillus mucilaginosus),对其形态学和生理生化特性、耐盐性、耐酸碱性、温度敏感性等特性进行了测定。结果表明,供试菌株均为革兰氏阴性杆菌,产生圆形芽孢和丰厚的荚膜;过氧化氢酶、溶菌酶试验阳性,能水解淀粉,V.P反应、卵磷脂酶均为阴性,不产生吲哚。供试菌株在NaCl质量分数为1%~2%的硅酸盐培养基上能够生长;在25~30°C均能良好生长。     

苏云金杆菌低成本固体发酵培养基的研制

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,简称Bt)是一类对多种害虫有效的病原微生物。为降低该菌产品制剂的生产成本,以北方常见的玉米芯粉、棉粕、豆粕等农产品下脚料为培养基质,研究了对多种鳞翅目、双翅目害虫具有特异杀虫活性的Bt菌株CYZ-4的固体发酵培养基配方。经对培养基的初始含水量、p H值等单因素试验发现,培养基初始含水量为70%、p H值为8.2时,玉米芯固体发酵培养基的产孢量达到最大;当玉米芯粉与棉粕质量比为5∶5和6∶4,与豆粕质量比为6∶4或7∶3时,发酵效果优于其他组合,产物孢子浓度在9.3×109个/g以上;复合固体发酵培养基基础配方中,玉米芯粉、棉粕、豆粕质量分数分别为19.1%、7.2%、3.6%时发酵Bt的效果最好。培养基3种成分及p H值的L9(34)正交试验结果表明,将玉米芯粉、豆粕、棉粕按质量分数分别为16.0%、6.7%、7.2%的比例混合,添加0.075%KH2PO4、0.05%Mg SO4、0.035%Ca CO3,调节初始含水量为70%、p H值为8.2,按4%的接种量接种,30℃下培养6 d,菌株的产孢量最大,达到1.80×1010个/g。该固体发酵培养基配方成本低,发酵条件简单,适于以药肥撒施毒土方式施用防治鳞翅目和双翅目地下害虫。     

苏云金杆菌的液体发酵培养基优化研究

 运用正交试验L₂₇(3¹³)设计法对鳞翅目昆虫高毒效的苏云金杆菌33菌株进行培养基优化试验,在培养温度（30±1）℃,50 mL/500 mL三角瓶,摇床转速180 r/min条件下,苏云金杆菌33菌株的发酵最佳培养基是（%）:碳源0.5,氮源A 2.0,氮源B 0.15,氮源C 0.25,生长因子0.075,磷酸氢二钾0.25,碳酸钙0.05,硫酸镁0.035及pH 8.0.     

胶质芽孢杆菌工业化发酵研究进展

土壤是一个天然钾库,蕴藏着丰富的硅酸盐矿物,但它们主要以稳定的硅铝酸盐和磷灰石状态存在,不能直接为作物吸收利用胶质芽孢杆菌是一类具有溶磷解钾功能的硅酸盐细菌,释放出硅酸盐矿物中的磷、钾等元素,直接供给植物生长利用分析论述了胶质芽孢杆菌对硅酸盐矿物的分解及其作用机理,在微生物菌肥生产发酵方面,从工业化生产角度出发,对如何降低发酵液黏稠度和获得高芽孢产量为目的的培养工艺等方面进行论述     

枯草芽孢杆菌B_2发酵工艺及其质量检测方法研究

研究了枯草芽孢杆菌B2从种子发酵液到发酵罐的放大培养,通过正交优化试验筛选枯草芽孢杆菌B2发酵的优化组合、种子罐和发酵罐的发酵时间及发酵液的质量检测方法.结果表明:枯草芽孢杆菌B2的最佳发酵组合为接种量10%,pH 7.5,通气量1 000 L.h-1,转速200 r.min-1;种子罐的发酵时间为20 h;发酵罐最适放罐时间为36 h.发酵液质量检测以活菌量为主要指标,辅助比浊法检测.     

生物农药固态发酵综述

从生物农药固态发酵中的发酵原料、条件控制、发酵设备、毒力检测等方面对生物农药的固态发酵研究进行了综述。