食淀粉乳杆菌代谢产物对TGEV感染IPEC-J2细胞屏障功能的影响

本研究采用荧光定量PCR方法,检测了IPEC-J2细胞不同时间点紧密连接蛋白3(claudin 3,CLDN-3)、细胞角蛋白8(cytokeratin 8,KRT8)、黏蛋白1(mucin 1,MUC1)3种蛋白mRNA的表达量变化。本试验将猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染IPEC-J2细胞,探索食淀粉乳杆菌代谢产物是否通过维持或改善CLDN-3、KRT8、MUC1蛋白mRNA表达来增强细胞的屏障功能,是否对IPEC-J2细胞感染TGEV后的屏障功能产生影响。试验结果发现,正常细胞对照组MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白mRNA表达量随时间没有显著变化(P> 0.05),MRS培养基对照组与正常细胞对照组相比没有显著变化(P> 0.05),食淀粉乳杆菌代谢产物单独处理组对细胞MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白mRNA表达量呈显著上调作用(P< 0.05);食淀粉乳杆菌代谢产物+TGEV试验组与病毒对照组相比,处理24、36和48 h,MUC1、CLDN-3及KRT8蛋白的表达显著升高(P< 0.05)。结果表明,食淀粉乳杆菌代谢产物不仅能提高MUC1、CLDN-3及KRT8在IPEC-J2细胞上的表达,还能负调节TGEV诱导的MUC1、CLDN-3及KRT8在IPEC-J2细胞上的表达,从而加强IPEC-J2细胞对TGEV感染的屏障功能。     

食淀粉乳杆菌对轮状病毒受体HSC70的影响

旨在探究食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)对轮状病毒(rotavirus,RV)的细胞受体热休克同源蛋白HSC70的调节作用。以饲喂食淀粉乳杆菌的中国昆明鼠乳鼠为试验动物,通过ELISA、qPCR、冰冻切片间接免疫荧光等技术,1～11 d逐日进行空肠组织取样,检测食淀粉乳杆菌对小鼠空肠组织中HSC70调节作用的动态变化。试验分为4组:正常组、病毒组、预防组(先益生菌作用后攻RV)、治疗组(先攻RV后作用益生菌)。试验结果显示,乳鼠体质量的增长率及变化情况与RV的感染相关,并且食淀粉乳杆菌可以显著地治疗及预防RV感染(P<0.05)。对空肠组织中HSC70的检测发现,攻RV后正常组及预防组的热休克同源蛋白HSC70含量在第5天显著高于治疗组和病毒组(P<0.05);在第7,11天时,各组组内热休克同源蛋白HSC70的含量无明显差异(P>0.05);第9天病毒组的热休克同源蛋白HSC70含量显著高于其他组(P<0.05)。HSC70 mRNA含量随天数的增加而减少,正常组下降趋势显著(P<0.05),预防组在第3,4天趋于平缓。攻RV后小鼠肠内HSC70 mRNA的相对表达量在第5,7,11天,呈现为病毒组>预防组>治疗组>正常组(P<0.05),且小鼠肠内HSC70 mRNA的相对表达量在第7天显著升高(P<0.05)。对第9天空肠组织进行冰冻切片-间接免疫荧光检测发现,HSC70主要存在于空肠绒毛组织,且预防组中HSC70明显少于病毒组及正常组(P<0.05)。结果表明,食淀粉乳杆菌可显著抑制RV受体HSC70在细胞中的合成,从而发挥抗病毒作用,为探究食淀粉乳杆菌抗RV机理提供理论依据。     

芽孢杆菌发酵代谢产物的研究

益生素是以活菌成分为主的饲料添加剂。它的主要机理在于给动物直接饲喂微生物的活菌制剂,以平衡动物的肠道菌群,加强肠道微生物的屏障功能,减少有害菌群的毒害作用,提高机体免疫力,同时分泌酶等一些有益的代谢产物,提高饲料的利用率,从而推动动物健康快速生长。作为益生菌的一种,枯草芽孢杆菌在动物生产中的研究与应用一直都是畜牧业科研和生产人员关注的焦点。枯草芽孢杆菌能产生蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶以及维生素等有益代谢产物。我们在益生素的研制过程中分离到一枯草芽孢杆菌N株,并对其发酵代谢产物进行了测定,为揭示芽孢杆菌促进生长…     

基于LC-MS代谢组学的植物乳杆菌发酵黄芪的代谢产物分析

试验旨在利用色谱-质谱联用（liquid chromatograph-mass spectrometer,LC-MS）代谢组学技术分析植物乳杆菌发酵黄芪的代谢产物,并探索其互作发酵机制。分别采取植物乳杆菌发酵黄芪（FT组）和未发酵黄芪固态粉末（CT组）,经样本前处理、LC-MS分析、生物学信息分析等探寻差异代谢物并分析代谢通路。结果显示,总离子流图峰图重现性良好,发酵黄芪主要代谢物共鉴定出183种代谢成分,正离子和负离子模式样品间关系PCA图均能良好区分。火山图分析表明,FT和CT组间的代谢物变化具有差异性,正离子模式上调的1 416个代谢物富集到83个代谢途径;下调的935个代谢物富集到83个代谢途径;负离子模式上调的1 040个代谢物富集到52个代谢途径,下调的809个代谢物富集到45个代谢途径。发酵黄芪差异代谢产物酸类、脂类、酮类等氨基酸显著增加,烯类等氨基酸显著下调,其中上调代谢物15个,下调代谢物2个,关键代谢产物主要为α-硫酸二乙酯、2-甲基柠檬酸、3-异丙烯基-6-氧代庚酸等,涉及到丙酮酸代谢、丙酸代谢、半乳糖代谢等途径。本研究结果为发酵黄芪的代谢产物、发酵互作机制和临床应用提供理论依据。     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分析

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性;平板抑菌试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用;与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养,确定其对致病菌的颉颃作用.结果表明:嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性;pH值为3.0时,其有广谱的抗菌活性,对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病菌均有明显的抑制作用,但对肠道内益生菌无抑制作用;在与致病菌混合培养40 h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌,48 h内可以完全消灭大肠杆菌.体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用.     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分析

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性;平板抑菌试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用;与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养,确定其对致病菌的颉颃作用。结果表明：嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性;pH值为3．0时,其有广谱的抗菌活性,对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病菌均有明显的抑制作用,但对肠道内益生菌无抑制作用;在与致病菌混合培养40h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌,48h内可以完全消灭大肠杆菌。体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用。     

植物乳杆菌抑菌蛋白的分离鉴定及抑菌特性研究

【目的】筛选新型广谱有效的抑菌蛋白,为全面解析植物乳杆菌抑菌机制和开发新型抗菌制剂奠定基础。【方法】以植物乳杆菌GX20200417-1为研究对象,采用牛津杯法测定其抑菌活性,以低温离心和超滤法初步分离获得胞外蛋白并测定其抑菌活性,对胞外蛋白进行不同温度、pH及蛋白酶处理,研究抑菌蛋白理化特性,利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进一步分析鉴定植物乳杆菌代谢产物中的抑菌成分。【结果】植物乳杆菌GX20200417-1对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有良好的抑菌作用;发酵上清液在发酵24 h的抑菌能力最强;胞外蛋白的抑菌能力与发酵上清液相近;植物乳杆菌抑菌蛋白具有较好的耐热特性,与对照组相比,在20~80 ℃时抑菌活性均无显著变化(P＜0.05),在pH 6.0~8.0时抑菌活性最佳,对蛋白酶敏感;经LC-MS/MS鉴定分析,检测出5种可信度较高且与抑菌作用相关的蛋白质,分别是片球菌素pediocin PA-1、溶菌素(lysin)、聚酮合酶(polyketide synthase)、辅助蛋白(accessory protein)和LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein,分子质量分别为5.348、7.348、8.348、6.348和19.662 ku;蛋白质功能分析结果表明,片球菌素pediocin PA-1与溶菌素主要通过破坏细菌细胞壁与细胞膜,从而达到抑菌效果。LysM peptidoglycan-binding domain-containing protein可识别含有N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)残基的肽聚糖,上调抗菌肽的表达;辅助蛋白主要参与细菌素的合成,聚酮合酶主要参与抗生素的合成,二者通过参与抑菌物质的合成间接发挥抑菌作用。【结论】本研究成功分离并鉴定植物乳杆菌GX20200417-1的5种抑菌蛋白;植物乳杆菌GX20200417-1可能通过其代谢产物中的多种抑菌蛋白协同发挥抗菌作用。     

嗜酸乳杆菌SR-1发酵代谢产物的体外抑菌试验分折

通过药敏试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对66种抗生素的耐药性;平板抑茵试验研究嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对35种常见病原菌抑菌作用;与大肠杆菌和金黄色葡萄球菌混合培养,确定其对致病菌的颉颃作用.结果表明:嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物对15种常见的抗生素有耐药性;pH值为3.0时,其有广谱的抗菌活性,对35种常见革兰阳性和革兰阴性致病茵均有明显的抑制作用,但对肠道内益生茵无抑制作用;在与致病菌混合培养40 h内可以彻底清除金黄色葡萄球菌,18 h内可以完全消灭大肠杆菌.体外抑菌试验结果表明嗜酸乳杆菌SR-1代谢产物具有较强的抑菌作用.     

保加利亚乳杆菌及其代谢产物对肉仔鸡生长性能的影响

将5 00只1日龄的肉仔鸡随机分成5组,1个对照组和4个试验组,每组5个重复,每个重复20只鸡.对照组肉仔鸡采食基础日粮,试验1组肉仔鸡饮水中添加保加利亚乳杆菌代谢产物,试验2组肉仔鸡基础日粮中添加保加利亚乳杆菌活菌体,试验3组肉仔鸡采食基础日粮添加保加利亚乳杆菌菌体及其代谢产物,试验4组肉仔鸡采食某市售微生态制剂,试验期6周.结果表明,相对对照组及其他试验组,日粮中添加保加利亚乳杆菌及其代谢产物能够提高肉仔鸡成活率、体重增长、降低肉仔鸡腹泻率,但对肉仔鸡新城疫免疫效果影响不大.     

Effects of Lactobacillus amylovorus Metabolites on the Barrier Function of IPEC-J2 Cells Infected by TGEV

This study used Real-time PCR to detect the changes of expression quantity of claudin 3 (CLDN-3), cytokeratin 8 (KRT8) and mucin 1 (MUC1) three proteins mRNA in IPEC-J2 cells at three different time points.IPEC-J2 cells were infected by TGEV, we explored whether Lactobacillus amylovorus metabolites could enhance cell barrier function by maintaining or improving mRNA expression of CLDN-3, KRT8 and MUC1, whether had effects on the barrier function of IPEC-J2 infected by TGEV.The results showed that mRNA expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 in the normal cell control group did not change significantly with time (P> 0.05); MRS medium culture group did not change significantly compared to the normal cell control group(P> 0.05); Gene expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 proteins in Lactobacillus amylovorus metabolites alone treatment group showed significant time-dependent effect (P< 0.05).After being treated 24, 36 and 48 h, gene expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 proteins in Lactobacillus amylovorus metabolites+TGEV experiment group was significantly higher than virus control group (P< 0.05).Lactobacillus amylovorus metabolites could improve MUC1, CLDN-3 and KRT8 expressions in IPEC-J2 cells, while being able to negatively regulate MUC1, CLDN-3 and KRT8 expressions that TGEV induced in IPEC-J2 cells, thereby inhencing the barrier function of IPEC-J2 cell against TGEV.     

食淀粉乳酸菌在青贮饲料中的研究进展

淀粉是青贮原料中重要的营养成分,提高青贮饲料中淀粉的利用率是提升青贮饲料营养价值的有效方法之一。随着饲用微生物菌剂的大力开发,食淀粉乳酸菌(Lactobacillus amylovorus)在青贮中的添加引起广泛关注。青贮饲料接种菌剂可以提高青贮的发酵品质、养分利用率以及保质期。本文对青贮饲料中食淀粉乳酸菌的应用进行了综述,总结了在青贮中接种食淀粉乳杆菌对青贮发酵过程中淀粉含量,微生物组成和有氧稳定性的影响。     

玉米粉和食淀粉乳杆菌混合处理对苜蓿青贮品质的影响

试验旨在研究添加玉米粉和食淀粉乳杆菌(Lactobacillus amylovorus)对苜蓿青贮品质的影响。试验采用析因设计,选取4个玉米粉添加量(占鲜重的0%、3%、6%、9%),3株不同食淀粉乳杆菌[L.amylovorus KM112088(L_1)、L.amylovorus KM112091(L_2)和L.amylovorus KM112089(L_3)]以及不接种处理,共计16个组(4×4),青贮35 d后开封,分析不同处理对苜蓿青贮品质的影响。结果表明,苜蓿单独青贮发酵品质较差;单独添加玉米粉,随着添加量的增加,苜蓿青贮的p H值以及氨态氮的含量显著下降(P<0.05),苜蓿青贮品质显著改善,但玉米粉中的淀粉降解较少;单独添加L.amylovorus处理中,虽然L_2处理组显著降低苜蓿青贮的氨态氮含量(P<0.05),提高乳酸和乙酸质量比,但对苜蓿青贮品质的改善效果较小;混合添加玉米粉和L.amylovorus,淀粉被有效降解和利用,且L_1和L_2与玉米粉混合处理组的苜蓿青贮品质得到显著改善(P<0.05),在复合添加3%的玉米粉时,即可获得优于单独添加9%玉米粉的发酵品质。综上所述,在苜蓿青贮实践中,可通过复合添加3%玉米粉和L_1或L_2,来提高玉米粉的添加效果,改善苜蓿青贮的发酵品质。     

重组植物乳杆菌生物学特性比较研究

试验对植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,Lp)出发菌与携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)标记基因的重组植物乳杆菌(Lp-GFP)生物学特性进行了详细的比较研究,以便于深入开展益生菌植物乳杆菌在动物肠道内分布和定植规律的研究。结果显示,Lp和Lp-GFP生长曲线的变化趋势基本相同,其中Lp-GFP的生长速度略有滞后;Lp和Lp-GFP最适培养温度均为37 ℃,最适初始pH均为6.5;Lp和Lp-GFP耐高温、耐人工胃液、耐人工肠液和耐胆盐的特性趋势一致;Lp和Lp-GFP的抑菌特性无显著差异(P>0.05);除了红霉素,Lp和Lp-GFP对其他药物的敏感性基本没有发生变化。综上所述,植物乳杆菌的重组对其生物学特性没有显著的影响,这为重组标记菌株的后续培养和机理研究奠定了重要基础。     

一株牛源嗜酸性乳杆菌体外抑菌试验研究

为了验证微生态活菌制剂候选菌株的益生特性,将筛选出的牛源嗜酸性乳杆菌NL0908进行体外抑菌试验,通过共培养和上清液抑菌试验,分析发现,菌株NL0908对病原菌大肠杆菌有较强的抑菌作用。将其上清液进行相应的热处理、蛋白酶处理、中和酸等,结果表明,其抑菌物质主要是由有机酸和抗菌小肽物质共同作用。     

两种方法保存嗜酸乳杆菌效果的比较研究

在相同的温度和时间条件下,比较滤纸片法和甘油生理盐水冻存法保存嗜酸乳杆菌的效果。用滤纸片法和甘油生理盐水冻存法,分别进行不同温度的嗜酸乳杆菌保存试验;并于预定时间内,对各处理组分别进行复苏及预定检测。在室温和4℃条件下,用滤纸片法保存的嗜酸乳杆菌出现了生化特性和形态的异常状况。随着保存时间的延长,滤纸片保存法比甘油生理盐水冻存法的嗜酸乳杆菌存活量明显减少。两种方法保存的菌种,均表现为-80℃组的嗜酸乳杆菌存活量明显大于-20℃组。说明在-80℃温度条件下,甘油生理盐水冻存法比滤纸片法具有较大的嗜酸乳杆菌存活量。     

Aegis溶菌酶的抑菌作用及抑菌机理初步研究

选择一些革兰氏阴性菌及革兰氏阳性菌,研究Aegis溶菌酶对细菌的敏感性。结果表明,Aegis溶菌酶对试验菌株都有不同程度的抑制或者杀灭作用,尤其对一些临床分离的致病菌及养殖过程中危害较大的菌珠作用明显。Aegis溶菌酶对试验菌株的生长繁殖和代谢均有影响,其对大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的作用效果不同,推测其作用机理与其二者的细胞壁的结构不同有关。