miRNA对乳腺发育及泌乳调节作用的研究进展

microRNA(miRNA)是一类在转录后调节基因表达的非编码RNA,已有大量研究表明,miRNA参与多种生命活动的调节,包括细胞增殖与分化、激素分泌、新陈代谢、肌肉和脂肪的形成发育、免疫应答反应、疾病的发生和肿瘤的形成等.近年来miRNA已成为生命科学研究中的亮点.随着miRNA的发现及其功能研究的深入,有关乳腺生长发育和泌乳调控的研究也进入了miRNA调控的新层面.文章总结了乳腺发育和泌乳过程中miRNA表达的阶段特异性及健康乳腺和乳腺病变时miRNA的差异表达,综述了miRNA对乳腺发育和泌乳的调节作用,旨在为从miRNA层面研究乳腺发育及泌乳提供新思路.     

miR-142-3p对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

为确定miR-142-3p对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能的调节作用,试验选取泌乳期奶山羊乳腺上皮细胞为研究材料,利用脂质体转染技术抑制miR-142-3p的表达,采用实时荧光定量PCR、Western blotting、试剂盒等检测miR-142-3p基因沉寂后其对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能的影响。结果显示,miR-142-3p基因沉寂后,奶山羊乳腺上皮细胞增殖能力增强,β-酪蛋白及甘油三酯分泌增加。由此可知,miR-142-3p通过抑制靶基因作用,影响奶山羊乳腺上皮细胞增殖、分泌β-酪蛋白及甘油三酯等泌乳功能。     

葛根素对性未成熟小鼠乳腺发育的影响

用电子天平称小鼠体重,电子分析天平称乳腺重量,以纸片比值重量法称乳腺轮廓和实质重量,H·E染色法制作组织切片计数乳腺导管横切面数目,比较试验组与对照组的差异。结果:试验1组和2组小鼠42～49日龄体重增重显著(P<0.05),试验3组差异不显著(P>0.05),其他日龄段的增重差异不显著(P>0.05);试验组对乳腺重量增重无显著性差异(P>0.05);乳腺轮廓和实质的纸片比值重量法中,试验组无显著性差异(P>0.05);试验1组和2组乳腺导管的增殖极显著(P<0.01),试验3组有显著性差异(P<0.05)。试验结果说明,葛根素对性未成熟小鼠乳腺发育有显著的促进作用,其中试验2组的促进作用最显著。     

抑制miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

【目的】探索miR-142-3p对奶山羊化学诱导乳腺上皮细胞(chemical induced mammary epithelial cells, CiMECs)体外泌乳功能的调节作用,旨在为促进转基因乳腺生物反应器的发展以及“培养皿奶”的商业化生产奠定基础和提供新的思路。【方法】选取奶山羊耳缘成纤维细胞(GEFs)为研究材料,经单一小分子化合物TGFβR-1/ALK5的抑制剂(RepSox)诱导8 d后,分别从细胞的形态变化、特异性标记物免疫荧光染色以及油红O染色对其进行鉴定。之后运用脂质体转染技术在诱导成功的奶山羊CiMECs中分别转染miR-142-3p的抑制物(miR-142-3p inhibitor)及抑制物对照(inhibitor-NC),不转染的细胞作为空白对照(BC),转染24 h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-142-3p的表达水平,CCK-8法检测细胞的增殖率,Western blotting检测β-酪蛋白(β-casein)的表达量,甘油三酯酶法测定甘油三酯的含量。【结果】GEFs诱导8 d后形成岛屿状多核仁样的上皮样聚集;免疫荧光染色结果显示,诱导后的GE...     

牛磺酸对青春期小鼠乳腺发育的影响

在体外使用不同浓度的牛磺酸刺激小鼠乳腺上皮细胞(mMECs)24 h,通过Western blot、CCK-8和EDU等方法检测牛磺酸对mMECs增殖的影响,在体内对4周龄小鼠饮用含0.025%、0.005%、0.100%牛磺酸饮用水4周,分别检测乳腺中乳导管及终末端数量,并检测乳腺中增殖相关蛋白的表达情况。结果显示,0.2、0.4 mmol/L牛磺酸能显著促进mMECs的增殖,可显著增加mMECs中Cyclin D1、Cyclin D3和PCNA的表达量,而mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapa)可消除牛磺酸对mMECs增殖的促进作用;摄入水中含有0.025%、0.050%、0.100%牛磺酸能显著提升乳腺内乳导管和终末端的数量,显著促进青春期乳腺中Cyclin D1、Cyclin D3和PCNA的表达。结果表明,牛磺酸能显著促进mMECs增殖和青春期小鼠乳腺发育。     

胰岛素、催乳素对奶山羊乳腺上皮细胞泌乳功能的影响

具有泌乳功能的乳腺上皮细胞可作为乳腺生长发育及泌乳功能调控机制研究的细胞模型。本研究对已建立的奶山羊乳腺上皮细胞系的泌乳功能进行评价。应用SDS-PAGE、TG试剂盒及HPLC方法对体外培养奶山羊乳腺上皮细胞总蛋白、乳脂和乳糖的分泌情况进行了测定以确定胰岛素、催乳素处理后的奶山羊乳腺上皮细胞的泌乳功能。结果表明：在添加表皮生长因子、胰岛素样生长因子-1、转铁蛋白-硒钠、标准胎牛血清的DF12培养液中奶山羊乳腺上皮细胞具有乳脂、乳蛋白及乳糖的分泌能力。胰岛素处理48 h后对细胞的泌乳功能无显著影响,催乳素处理细胞48 h后可使奶山羊乳腺上皮细胞乳蛋白、乳糖分泌能力显著升高。从而建立了具有泌乳功能的奶山羊乳腺上皮细胞系,为奶山羊、奶牛等重要经济动物泌乳机制的研究提供了便利条件。     

影响母猪乳腺发育的因素分析

哺乳期母猪泌乳能力差是仔猪死亡率高影响猪场收益的重要原因,母猪乳腺发育情况是泌乳能力的重要保证。影响母猪乳腺发育的因素主要包括:营养、激素、生产管理等方面。文内就影响母猪乳腺发育因素进行综述,期望对养猪实际生产提供帮助。     

中药王不留行对奶牛乳腺细胞增殖及泌乳的影响

为确定中药王不留行对奶牛乳腺细胞泌乳功能的影响,以王不留行为原料,通过水浸提得到王不留行提取液,测出王不留行提取液中增乳活性物质邻苯二甲酸二丁酯含量,设置不同浓度中药提取液进行细胞试验,观察其对细胞泌乳的影响,筛选出增乳效力最显著的药物浓度。结果2 mg/mL(生药浓度)药物组增乳效果最显著,提示中药王不留行可直接作用于奶牛乳腺上皮细胞促进泌乳。     

蛋氨酸对青春期小鼠乳腺发育的影响及机制

为了探索蛋氨酸对青春期小鼠乳腺发育的影响,将出生4周的雌鼠分为对照组和蛋氨酸试验组(饮用水中分别含有0.025%,0.05%,0.1%蛋氨酸),使用全组织染色方法观察蛋氨酸对乳腺导管分支的影响,通过Western blot检测乳腺组织中增殖标志蛋白水平的变化。使用不同浓度的蛋氨酸(0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 mmol/L)处理小鼠乳腺上皮细胞(mouse mammary epithelial cells, mMECs),分别使用CCK-8法和Western blot检测蛋氨酸对mMECs增殖活性及增殖标志蛋白水平的影响。结果显示,蛋氨酸显著促进小鼠乳腺导管分支,并显著提高乳腺组织中Cyclin D1和PCNA的蛋白水平。蛋氨酸呈浓度依赖方式促进mMECs的增殖活性,显著增强mTOR-4EBP1信号轴的活性,提高Cyclin D1和PCNA的蛋白水平及Rb的磷酸化水平。结果表明蛋氨酸可以通过激活mTOR-4EBP1信号轴上调Cyclin D1和PCNA的蛋白水平,促进Rb磷酸化,继而增强mMECs增殖活性,最终促进青春期小鼠乳腺发育。     

激素状态、营养水平与饲养管理方案对猪乳腺发育的影响

猪的乳腺在以下3个阶段迅速增长：从90日龄到初情期,妊娠期的最后l／3时段和整个泌乳期。青年母猪或成年母猪的营养水平、内分泌状态及饲养管理方案可能在这些阶段影响其乳腺发育。更具体来说,生长青年母猪90日龄限制饲养会阻碍其乳腺发育;提供植物雌激素异黄酮与提高循环系统中催乳素的浓度都可刺激乳腺发育;在妊娠后期,抑制松弛素或催乳素的分泌,乳腺发育迅速降低;饲料能量增加过多,可对乳腺产生有害作用;妊娠母猪的饲养也可能影响其后代的乳腺发育．．各种饲养管理因素如窝哺乳仔数、哺乳强度以及上一个泌乳期乳头的吮用与否都会影响泌乳末期乳腺中乳腺组织的数量．、乳腺发育伴随着乳头复位的必需生理过程,在断奶后或泌乳早期不正常吮乳的情况下,乳腺中乳腺实质组织通过这一过程迅速退化     

Effect of miR-142-3p on Lactation in Diary Goat Mammary Epithelial Cells

To determine the regulative role of miR-142-3p in lactation of dairy goat mammary epithelia cells (DGMECs),we selected the DGMECs in lactating dairy goat for material,used liposomal transfection techniques to silence miR-142-3p expression,and used Real-time quantitative PCR,Western blotting and Assay Kits to explore the changes of lactation after miR-142-3p inhibition.The results showed that when miR-142-3p was inhibited,the cell proliferation ability of DGMECs was increased,the secretion amount of β-casein and triglyceride were up-regulated.So we concluded that miR-142-3p could influence the lactation function of DGMECs,such as cell proliferation,β-casein and triglyceride secretion,by inhibiting the function of its target genes.     

WGCNA鉴定奶山羊妊娠至泌乳期乳腺发育关键基因

旨在通过加权基因共表达网络分析（weighted gene co-expression network analysis,WGCNA）筛选奶山羊不同生理阶段乳腺发育的关键基因。本研究从GEO数据库中下载奶山羊不同生理阶段（妊娠46天、70天、90天、110天和产后40天）的乳腺组织微阵列数据集GSE14008,使用R语言的WGCNA包对数据进行共表达分析。将得到的模块与生理阶段进行关联分析,选择目标模块,并根据连接度选出枢纽基因。使用DAVID网站对模块进行富集分析后,使用String网站构建模块的蛋白互作网络,并使用Cytoscape软件得到核心基因,最终与枢纽基因取交集得到目标基因。对18个样本的8 443个基因进行加权基因共表达分析,得到30个模块,并选出4个与不同生理阶段相关的目标模块及每个模块的30个枢纽基因,同时也得到4个模块的蛋白互作网络及每个网络的20个核心基因。最终,4个模块共得到13个与乳腺发育相关的目标基因（UQCR、RGL2、NOTCH1、PTBP1、PPP5C、FZR1、UBE2L3、TNF、MAT2A、ITGB2、GPR18、JAK1、CSN2）。本研究通过WGCNA、GO富集分析和PPI网络等生物信息学技术,阐明了不同生理时期乳腺发育的关键过程,及在这些过程中起关键作用的基因,这为进一步研究乳腺发育机制提供了新的思路和线索。     

Identification of Key Genes of Mammary Gland Development from Pregnancy to Lactation in Dairy Goats by WGCNA

The purpose of this study was to select the key genes of mammary gland development at different physiological stages in dairy goats by weighted gene co-expression network analysis(WGCNA). GSE14008 mammary gland tissue microarray data set of dairy goats at different physiological stages (pregnancy 46 days, 70 days, 90 days, 110 days and 40 days postpartum) was downloaded from GEO database, and co-expression analysis was carried out using WGCNA package of R language. The target modules were selected by correlation analysis between the modules and physiological stages, and the hub genes were selected according to the connectivity degree. After enrichment analysis of the modules using DAVID website, the protein-protein interaction network of the modules was constructed using String website and the core genes were obtained using Cytoscape software, and finally the target genes were obtained from intersection of core genes and hub genes. A total of 8 443 genes from 18 samples were analyzed for co-expression of weighted genes. The 30 modules were obtained, and 4 target modules related to different physiological stages and 30 hub genes of each module were selected. Meanwhile, protein-protein interaction network of 4 modules and 20 core genes of each network were also obtained. Finally, 13 target genes related to mammary gland development were obtained from the 4 modules, which were UQCR, RGL2, NOTCH1, PTBP1, PPP5C, FZR1, UBE2L3, TNF, MAT2A, ITGB2, GPR18, JAK1 and CSN2 genes. The key processes of mammary gland development at different physiological stages and the genes that played the key role in these processes were elucidated by WGCNA, GO enrichment analysis, PPI network and other bioinformatics techniques, which provided a new idea and clue for the further research on the mechanism of mammary gland development.     

水牛泌乳期与非泌乳期乳腺组织差异miRNAs的表达模式鉴定及分析

为了探求水牛泌乳和非泌乳期关键调控差异表达miRNAs及其表达模式,试验结合Solexa高通量测序和生物信息学分析结果筛选出18个水牛乳腺组织在泌乳期和非泌乳期差异表达的miRNAs,设计、筛选可行的miRNAs反转录及实时荧光定量PCR引物,进行实时荧光定量PCR验证差异表达miRNAs的表达模式。结果发现,miRNA的差异表达模式与测序结果基本一致。泌乳期miRNA-103、miRNA-125a、miRNA-30a-5p和miRNA-148a的表达量均显著高于非泌乳期（P<0.05）;miRNA-29a在非泌乳期表达量显著高于泌乳期（P<0.05）;miRNA-141、miRNA-125b和miRNA-497在泌乳期表达量均高于非泌乳期,但差异不显著（P>0.05）;低丰度的miRNA-490和miRNA-592在泌乳期表达量均显著高于非泌乳期（P<0.05）。Novel-123b在泌乳期和非泌乳期差异不显著（P>0.05）,Novel-57在泌乳期比非泌乳期高29.79倍（P<0.01）。本试验结果为后续水牛乳腺研究提供了16个miRNA的可用特异性反转录引物和实时荧光定量PCR引物,miRNA-103、miRNA-125a、miRNA-30a-5p、miRNA-148a、miRNA-29a和Novel-57 6个水牛差异表达miRNAs值得进一步研究。     

半胱胺对奶山羊乳腺发育的影响

为了研究半胱胺对奶山羊乳腺发育的影响,选6只空怀奶山羊进行自身前后对照试验和8只妊娠奶山羊进行同胎次配对试验.结果表明,空怀奶山羊对照期乳腺的腺泡很少发育,几乎看不到乳导管,试验期乳腺有明显导管生长和少量腺泡发育;妊娠奶山羊对照组乳腺随着妊娠的进行有少量腺泡发育,腺导管有明显的生长,试验组乳腺有大量的腺泡发育,腺导管生长更明显,且有分泌物出现.试验期血浆中与乳腺发育相关的激素水平明显升高.以上结果提示半胱胺在一定程度上促进了奶山羊乳腺发育.     

泌乳母猪乳房发育及其对哺乳仔猪生长的影响

综述母猪泌乳阶段乳房和单个乳腺的发育特点,以及影响它们发育的因素,对现代母猪的饲养和哺乳仔猪的管理有一定的指导意义.