糖对长白猪精液NAGaseⅡ的抑制机理

以长白猪精液为材料,采用经典的纯化方法获得N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（EC 3.3.1.52,NAGase）的2种同工酶,命名为：NAGaseⅠ和NAGaseⅡ。其中NAGaseⅡ的比活力为358.21U/mg,纯化倍数为6.37倍。以海藻糖、D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖为效应物,研究其对该酶活性的影响。结果表明：在特定浓度范围内,海藻糖对酶活力基本没有影响;D-甘露糖、蔗糖、葡萄糖对该酶均有一定的抑制作用;D-甘露糖对酶的抑制作用表现为非竞争型,抑制常数KI为11.94mmo/L;蔗糖对酶的抑制作用表现为竞争型,抑制常数KI为0.56mmol/L;葡萄糖对酶的抑制作用表现为混合型,抑制常数KI和KIS分别为0.35mol/L和64.29mmol/L。     

稀释液成分对猪精液碱性N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响

以猪精液稀释液主要成分为效应物,研究其对杜洛克猪精液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶Ⅱ活力的影响。结果表明：在一定浓度下青霉素钾和硫酸链霉素对酶活力没有影响;EDTA·2Na和维生索C对酶活力有显著的激活作用;葡萄糖和蔗糖对酶活力有先扬后抑的作用;果糖、柠檬酸三钠、三羟甲基氨基甲烷、碳酸氢钠对酶活力则有不同程度的抑制作用;三羟甲基氨基甲烷表现为可逆的非竞争性抑制,抑制常数K1为9．81mmol／L;碳酸氢钠则表现为可逆的混合型抑制,抑制常数K_I和K_ID分别为111．18mmol／L和26．61mmol／L。     

稀释液成分对猪精液碱性N-乙酰-β—D-氨基葡萄糖苷酶的影响

以猪精液稀释液主要成分为效应物,研究其对杜洛克猪精液中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶II活力的影响。结果表明：在一定浓度下青霉素钾和硫酸链霉素对酶活力没有影响;EDTA·2Na和维生素C对酶活力有显著的激活作用;葡萄糖和蔗糖对酶活力有先扬后抑的作用;     

番鸭 (Cairina moschata ) 睾丸N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的提取及性质研究

以番鸭睾丸为材料,通过硫酸铵沉淀分级分离、DEAE-32离子交换柱层析和Sephadex G-100分子筛柱层析纯化,获得比活力为19.18 U/mg、纯化倍数为6.46倍的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶制剂。以对-硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学。结果表明：酶的最适pH为5.6,该酶在pH3.0～7.6区域较稳定,而在pH〉7.6能很快失活;酶的最适温度为55℃。当温度为80℃时,酶完全失活。在40℃以下处理30 min,酶活力保持稳定,高于45℃,酶稳定性较差。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为0.215 mmol/L,最大反应速度Vm为5.54μmol/L.min。酶催化pNP-β-D-GlcNAc反应的活化能为69.05kJ/mol。金属离子对酶的效应试验表明：高浓度的Na＋和K＋对酶有抑制作用;Mg^2＋对酶有轻度激活作用,Cu^2＋、Pb^2＋、Zn^2＋、Ca^2＋、Ba^2＋对酶活力有不同程度的抑制作用;Al3＋对酶有抑制作用。     

牛副性腺N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶性质的测定

以牛副性腺部分纯化的N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶为材料,以对硝基苯-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(pNP-NAG)为底物,研究酶催化底物水解的反应动力学。结果表明:牛副性腺NAGase的最适pH为5.5,在pH3.0～7.6区域内活力较稳定,而在pH7.6能很快失活;最适温度为55℃。在50℃以下处理30min,酶活力保持稳定,高于50℃酶稳定性较差。酶促反应动力学符合米氏双曲线方程,测得米氏常数Km为0.48mmol/L,最大反应速度Vm为19.73umol/(L·min)。酶催化pNP-NAG水解反应的活化能为69.77kJ/mol。     

产β-葡萄糖醛酸苷酶菌株胃肠道耐受性与酶学特性研究

为发酵转化黄芩苷生产活性产物黄芩素、研发益生菌和中草药黄芩协同联用绿色混合型饲料添加剂产品奠定基础,试验采用酶解底物显色法和薄层层析法,从健康鸡肠道内容物中分离筛选出一株产β-葡萄糖醛酸苷酶的JY24菌株,经菌落形态、生理生化及16SrDNA序列分析,鉴定为枯草芽孢杆菌。结果表明:(1)JY24菌株对人工胃液、人工肠液均有一定耐受能力,胆盐最高耐受浓度为0.3%～0.5%;(2)JY24菌株所产β-葡萄糖醛酸苷酶的最适温度为35℃,40℃、50℃和60℃处理1 h相对酶活分别为72.96%、31.63%和0;(3)最适pH 6.5,在pH 6.0和7.0环境下,酶活相对稳定,处理1 h相对酶活分别为73.54%和73.63%;(4)浓度为2.5 mmol/L的Ca~(2+)、Fe~(3+)和Zn~(2+)可使酶活升高11.48%～21.05%,对该酶有激活作用,Fe~(2+)和Cu~(2+)可使酶活性下降15.84%～18.28%,对酶活有抑制作用,K~+、Na~+、Mg~(2+)和Mn~(2+)对酶活无明显影响。     

β-葡聚糖酶的酶学性质研究

本试验采用DNS法对某种微生物产β-葡聚糖酶的酶学性质进行研究。结果表明:酶作用的最适温度和pH值分别为37℃和6.5。该酶是一种耐热酶,在有底物保护条件下,酶的热稳定性可有一定幅度的提高,酶的pH稳定性范围为3.5～6.0。金属离子Cu~(2+)、K~+对酶有激活作用,Ca~(2+)、Ba~(2+)、Fe~(3+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)、Fe~(2+)对酶起抑制作用。该酶对纤维素类底物有较强的分解作用,但对滤纸的分解能力相对较弱。     

家蚕表皮酪氨酸酶和漆酶的分离纯化及酶学鉴定

酚氧化酶是昆虫黑化反应的关键酶类。采用硫酸铵分级(20%～30%、40%～65%饱和度)沉淀以及ConA Sepharose4B亲和层析和Sephacryl S-200凝胶过滤的方法,从家蚕蛹表皮样品中分离纯化出酪氨酸酶和漆酶,2种酶的比活力分别达到2 900、1 343 U/mg。经非还原SDS-PAGE电泳和酶学动力学特性分析表明:家蚕表皮酪氨酸酶的分子质量约80 kD,酶蛋白经凝胶电泳分离后用底物酪氨酸和邻苯二酚染色呈现棕褐色条带,该酶与2种底物的米氏常数(Km)分别是16.8 mmol/L和12.5 mmol/L,最适pH分别是6.5和7.5,最适温度均是30℃;家蚕表皮漆酶的分子质量约44 kD,酶蛋白经凝胶电泳分离后用底物2,2'-氨基-二(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸盐)(ABTS)染色呈现蓝绿色,而用酪氨酸染色颜色没有变化,该酶与底物ABTS的Km值是32.7 mmol/L,最适pH 5.0,最适温度50℃;酪氨酸酶的热稳定性比漆酶高。研究结果表明,采用硫酸分级沉淀、亲和层析和凝胶过滤方法能从家蚕表皮中分离纯化出漆酶和酪氨酸酶,酶学动力学分析二者对催化底物的特异性有差别,推测它们在家蚕表皮的硬化和黑化过程中发挥不同生理作用。     

β-葡聚糖酶的酶学性质研究

采用DNS法对β-葡聚糖酶的酶学性质进行了研究,研究结果表明:该酶的最适反应温度为40~50℃;最适反应pH为7.5,在pH4.5～9有较大的活性区间;有较强的耐碱性,在pH5.5～11处理1h仍有超过90%的活性;Mn2+对β-葡聚糖酶有一定的抑制作用,其他金属离子和螯合剂对酶活没有明显的激活或抑制作用;该酶抵抗胃蛋白酶的能力较强,胰蛋白酶对该酶有一定的促进作用;该酶的米氏常数Km=0.795mg/mL,最大反应速度Vmax=8.547μmol/(mg/min)。     

鱼源无乳链球菌N-乙酰氨基葡萄糖苷酶NalA的鉴定及生物学功能分析

为了探究N-乙酰氨基葡萄糖苷酶在无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)中的生物学功能,本试验通过生物信息学技术从鱼源无乳链球菌GD201008-001基因组中预测到一个可能的N-乙酰氨基葡萄糖苷酶编码基因A964_0097(命名为nalA),利用同源重组技术构建该基因缺失株△nalA及互补株C△...     

江泉黑猪与杜长大三元杂交猪屠宰性能及肉质性状比较分析

为了解江泉黑猪的产肉和肉质特性,本试验选取在相同条件下饲养的100 kg左右的江泉黑猪阉公猪、母猪和杜长大三元杂交猪各10头按照相关规定进行屠宰和肉品质测定。对两种猪胴体指标（胴体重、胴体长、眼肌面积、背膘厚等）、肉质的物理指标（pH、肉色、大理石纹、滴水损失等）、常规化学指标（粗蛋白质、肌内脂肪、水分、灰分含量等）及江泉黑猪氨基酸含量进行了测定。结果表明,与杜长大三元杂交猪相比,江泉黑猪胴体瘦肉率较低,眼肌面积降低了30%左右（P<0.05）,而胴体背膘厚较高（P<0.05）。江泉黑猪在肉色、大理石纹、滴水损失、失水率、烹饪损失和肌内脂肪含量等指标上均显著优于杜长大三元杂交猪（P<0.05）,其中滴水损失、失水率和烹饪损失分别降低了约4.0%、3.1%和2.7%,肌内脂肪含量提高了约150.0%。由此可见,江泉黑猪在瘦肉产量上低于杜长大三元杂交猪,但在保水性、肌内脂肪含量、肉色、大理石纹等肉质指标上明显优于杜长大三元杂交猪,可为消费者提供品质优良的猪肉。     

A Comparative Study on the Carcass and Meat Quality Traits of Jiangquan Black Pig and DLY Pig

To further understand the germplasm characteristics of Jiangquan Black pig,100 kg Jiangquan Black pigs (10 barrows, 10 sows) and 10 Duroc×Landrace×Yorkshire (DLY) pigs under the same conditions were randomly selected to analyse the slaughter performance and meat quality according to related rules. After slaughtered,the carcass index (carcass weight, loin muscle area, carcass length and backfat thickness etc), meat quality physical indicators (pH, meat color, marbling, drip loss etc), gerneral chemical index (the contents of crude protein, intramuscular fat, moisture and ash etc) and the proportion of amino acids in Jiangquan Black pig were analyzed. The results showed that, Jiangquan Black pig carcass lean meat rate was relatively low, the loin muscle area was reduced by about 30% (P<0.05) compared with DLY pig, while the backfat thickness was higher than that of DLY pig (P<0.05). The meat color, marbling, drip loss, cooking loss, water loss rate index and intramuscular fat content of Jiangquan Black pig were significantly better than that of DLY pigs (P<0.05), the rate of water loss and drip loss and cooking loss were decreased by 4.0%, 3.1% and 2.7%, intramuscular fat content increased by 150.0%. Therefore, The lean yield of Jiangquan Black pig was less than DLY pig, but water retention property, intramuscular fat content, meat color, marbling, meat quality indexes were significantly better than that of DLY pig. In conclusion, Jiangquan Black pig could provide good quality pork for consumers.     

Detection and Analysis of the Pig Sperm Quality by Flow Cytometry

The flow cytometry was used in this trail to determine the pig sperm quality,in order to ensure the sperm had complete functions during the fertilization process.Four stain methods of SYBR-14/PI (Propidium Iodide),YO-PRO-1/PI,PNA/PI,Mito tracker/YO-PRO-1 were used to detect the plasma membrane integrity,apoptosis,top body ntegrity and mitochondrial function of Rongchang pig sperm.SYBR-14⁺/PI^- expressed live sperm with complete plasma membrane,YO-PRO-1^-/PI^- expressed live sperm,PNA^-/PI^- expressed live sperm had no top body reaction,and Mito Tracker⁺/YO-PRO-1^-expressed live sperm with high mitochondrial activity.The functional integrity of the tested sperm was evaluated according to the above comprehensive results.Through the study of Rongchang pig sperm quality detection by flow cytometry,it suggested that the method could provide theoretical basis for clinical diagnosis,and was very important for swine infertility treatments.     

猪精子质量的流式细胞检测分析

本试验将流式细胞术应用于猪精子分析,同时检测精子功能的多个特性,以保证精子具备多种特性且功能完整,顺利完成授精过程。分别采用SYBR-14/PI（Propidium Iodide）、YO-PRO-1/PI、PNA/PI及Mito Tracker/YO-PRO-1 4种染色方法对荣昌猪精子的质膜完整性、细胞凋亡、顶体完整性及线粒体功能进行了检测和分析;以SYBR-14⁺/PI^-表示质膜完整的活精子,YO-PRO-1^-/PI^-表示活精子,PNA^-/PI^-表示未发生顶体反应的活精子,Mito Tracker⁺/YO-PRO-1^-表示线粒体活性高的活精子,以上述检测指标的综合结果判定精子功能的完整性。本试验通过流式细胞术对荣昌猪精子进行质量检测和分析,结果表明,该方法可为临床诊断种猪不孕症提供理论依据,对有效治疗不孕症有重要意义。     

葛根素对松辽黑猪前体脂肪细胞成脂分化的影响

为探究葛根素对松辽黑猪前体脂肪细胞成脂分化的调控作用,在细胞诱导液中分别添加0、10、20、40、60和80 μmol/L葛根素进行成脂诱导分化,用油红O染色法和甘油三酯酶法检测脂肪细胞分化过程中脂滴聚集情况和甘油三酯含量以考察脂质沉积和分化效果,并确定葛根素的最佳添加浓度;用实时荧光定量PCR检测对照组(0 μmol/L)和最佳葛根素浓度添加组成脂标志基因细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、CCAAT-增强子结合蛋白α(C/EBPα)及成脂分化基因乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸结合蛋白(FABP4)、应激蛋白(TRIB)和叉头框蛋白O1 (FOXO1)的mRNA的表达水平,用Western blotting检测PPARγ和C/EBPα的蛋白表达水平。结果表明,与对照组相比,20、40和60 μmol/L葛根素均显著增加脂滴和甘油三酯含量(P<0.05),且40 μmol/L葛根素效果最佳;实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,40 μmol/L葛根素显著上调成脂标志基因PPARγ、C/EBPα及成脂分化基因ACC、FABP4、FOXO1和TRIB的表达(P<0.05);Western blotting结果显示,与对照组相比,40 μmol/L葛根素显著增加PPARγ蛋白表达(P<0.05)。综上所述,40 μmol/L葛根素能够促进松辽黑猪前体脂肪细胞的成脂分化和脂质沉积。     

基于细胞色素b基因的大河乌猪群体遗传结构研究

为了弄清大河乌猪群体遗传分化水平和遗传结构,以曲靖市5个地理种群的46个大河乌猪样品为试验材料,采用分子生物学方法测定和分析所有个体的线粒体细胞色素b(Cyt b)基因DNA序列。分子变异分析结果表明,大河乌猪群体遗传变异主要来自种群内(62.63％),说明该物种群体遗传结构不明显。中性检验结果进一步证实,大河乌猪群体曾发生过种群数量扩张。这种不显著的种群结构主要来自于大规模的引种和扩大繁育,致使各地理种群间的遗传趋同和遗传一致性。研究结果有望为大河乌猪分子遗传选育工作提供重要的基础数据,并为其遗传种质资源的保护提供重要参考。     

烟台黑猪SLA-2-YTH原核表达载体的构建及表达

为构建烟台黑猪SLA-2-YTH基因原核表达载体,本研究设计引物PCR扩增SLA-2-YTH胞外区,将其克隆至pMD 19-T Simple 载体,筛选阳性克隆。阳性克隆经酶切后,进一步与表达载体pET-28a(+)连接,转化BL21（Rosseta）感受态细胞并进行诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果显示,SLA-2-YTH胞外区亚克隆大小为834 bp,酶切鉴定证实其成功插入pET-28a（+）表达载体。SDS-PAGE结果显示,SLA-2-YTH基因导入宿主菌后成功表达,蛋白大小约31.0 ku,与预期结果相符,优化后蛋白相对表达量达25%以上。本研究成功构建了烟台黑猪SLA-2-YTH原核表达载体,获得了表达蛋白,为今后进一步的结构和功能研究奠定基础。     

松辽黑猪染色体组型及显带的研究

采用外周血淋巴细胞培养方法以及C-显带和G-显带技术,对松辽黑猪进行了染色体组型分析及显带研究,并分析了各号染色体的相对长度、着丝点指数及臂比。结果表明,松辽黑猪的染色体数目为2n=38,公猪为3:8,XY;母猪为3:8,XX。松辽黑猪的C-带具有多态性,G-带带型与其他家猪相比没有明显差异。     

恩施黑猪基因组群体遗传学参数的估计与选择信号研究

旨在调查恩施黑猪基因组群体遗传学参数与选择信号。本研究利用Porcine 80K SNP芯片,通过计算亲缘系数、近交系数、连锁不平衡程度与有效群体大小等群体遗传学层面的参数评估恩施黑猪种群结构关系,运用CLR和iHS方法检测恩施黑猪基因组选择信号,并通过生物信息学分析揭示其潜在受选择基因。亲缘系数计算发现,咸丰县恩施黑猪个体间平均亲缘系数为0.12;近交系数计算表明, 16%的样本近交系数大于0.125,存在明显近交累积。此外,本研究构建了恩施黑猪全基因组连锁不平衡图谱;利用连锁不平衡信息,恩施黑猪估计历史有效群体大小呈现逐代下降趋势,其中5世代前有效群体大小约为25头。基于CLR方法共检测到126个显著选择信号候选区域,总长约为51.6 Mb,占基因组总长的2.1%。利用iHS方法,共发现248个显著选择信号候选区域,长度约为78.78 Mb,约占基因组总长的3.2%。富集分析表明,与选择信号区域重叠的LPAR2、NDUFA13、MEF2B、AHR基因分别与胴体长度(滴水损失)、精子形成、骨骼肌分化和总产仔数相关。研究表明,现存恩施黑猪群体血统较窄,近交累积严重,有效群体大小较小,并呈现继续缩小的趋势。选择信号分析揭示的一系列潜在受选择基因能够为未来恩施黑猪的遗传改良提供一定的参考依据。     

谷氨酰胺替代部分甘油对冻融猪精子获能和体外受精能力的影响

本试验旨在探索用谷氨酰胺（Gln）替代部分甘油对冻融猪精子体外获能和受精能力的影响,试验分为6组：3%甘油对照组和5个处理组（Ⅰ~Ⅴ组：2%甘油＋谷氨酰胺（0、20、40、80和100 mmol/L））。对冻融松辽黑猪精子的精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、鱼精蛋白水平、获能及体外受精等指标进行了检测。结果显示,用谷氨酰胺替代部分甘油均对冻融精子质量有一定的改善作用,改善的程度受谷氨酰胺浓度的影响。与对照组相比,Ⅰ组精子的质量参数均显著下降（P<0.05）;与Ⅰ组相比,Ⅱ组精子活力、顶体完整性和活率显著提高（P<0.05）,Ⅲ组精子线粒体膜电位显著提高（P<0.05）,Ⅴ组精子活力、质膜完整性、顶体完整性、活率和线粒体膜电位均显著提高（P<0.05）。说明用谷氨酰胺替代部分甘油对精子质量具有很大的影响,且当谷氨酰胺为100 mmol/L时可得到更高质量的精子,因此,后续试验使用浓度为100 mmol/L的谷氨酰胺进行研究。与对照组相比,2%甘油＋100 mmol/L谷氨酰胺处理组精子鱼精蛋白缺失率显著下降（P<0.05）,精子获能无显著差异（P>0.05）,但胚胎卵裂率显著提高（P<0.05）。综上所述,谷氨酰胺可作为一种新型冷冻保护剂替代部分甘油来提高猪精液的质量,并降低甘油对猪精液的毒性作用,为猪精液的冷冻保存及商业化生产提供技术支撑。