燕麦镰刀菌GD-2菌株作为生物除草剂的潜力研究（英文）

从青海省贵德县患病野燕麦叶片上分离获得燕麦镰刀菌,对该生防菌进行了室内致病性测定、室内孢子大批量培养和大田小区试验研究。室内条件下接种野燕麦48 h后出现水褐色病斑,最终导致叶片衰老死亡,在2、4叶期7 d时的发病率分别达到90%和95%,同时病情级别达到最大,而且对株高具有明显的抑制作用。通过液-固体联合培养试验表明,在含水量59%~61%、28℃、初始pH 7.0、初始接种量0.5%(1×106个孢子/mL)的麦麸与玉米粉(1∶1)培养基中,培养7 d时,产孢量最大(7.58×108个孢子/g)。在田间条件下燕麦镰刀菌与精喹禾灵混合使用能显著降低野燕麦的生物量,野燕麦叶片表面的湿度条件导致2012年对野燕麦的防除效果低于2011年。不论在是在室内和大田条件下,野燕麦都对野燕麦镰刀菌表现敏感。因此,该研究结果表明野燕麦镰刀菌株GD-2可作为防除野生燕麦的潜力生防菌。     

非致病性尖孢镰刀菌固体发酵条件筛选

为优化枯萎病植物疫苗工程菌株——非致病性尖孢镰刀菌FJAT-9290固体发酵条件,以产孢量为指标,分析了培养基初始含水量、初始接种量、培养温度和培养时间对菌株产孢量的影响,筛选出最优的发酵条件。结果表明,利用组培瓶培养7d,分别筛选出菌株生长的最佳初始含水量为50%、初始接种量为7%和培养温度为28℃,并在此基础上,利用聚丙烯塑料袋培养,发酵至20d时菌株的产孢量最高,孢子数量达6.35×108个·g-1,较初始接菌量增加了4个数量级。     

不同杂草病原真菌的分离及其对野燕麦的致病力

【目的】筛选对野燕麦具有致病作用的生防菌株。【方法】从青海省罹病杂草叶片上分离病原真菌,采用离体生测法和温室盆栽接种法,评价其发酵液对野燕麦的致病性,用盆栽生测法评价其对主栽作物的安全性,并采用形态学结合分子生物学的方法,鉴定其对野燕麦致病力较强的菌株。【结果】分离获得了XN-1、XN-3、XN-4、XN-9和GD-13 5株病原真菌,其中XN-1、XN-3和GD-13的发酵液对野燕麦离体叶片表现出较强的致病力,对种子的萌发抑制作用明显,对野燕麦表现出较强的侵染力,显著抑制植株的生长发育,且对青海省主栽作物中的蚕豆和豌豆相对安全。经鉴定,XN-1、XN-3和GD-13分别为链格孢(Alternariasp.)、黑附球菌(Epicoccum nigium)和短小茎点霉(Phoma exigua)。【结论】XN-1、XN-3和GD-13有望成为防除阔叶田野燕麦的真菌除草剂的候选菌株。     

不同杂草病原真菌的分离及其对野燕麦的致病力

【目的】筛选对野燕麦具有致病作用的生防菌株。【方法】从青海省罹病杂草叶片上分离病原真菌,采用离体生测法和温室盆栽接种法,评价其发酵液对野燕麦的致病性,用盆栽生测法评价其对主栽作物的安全性,并采用形态学结合分子生物学的方法,鉴定其对野燕麦致病力较强的菌株。【结果】分离获得了XN-1、XN-3、XN-4、XN-9和GD13 5株病原真菌,其中XN-1、XN-3和GD-13的发酵液对野燕麦离体叶片表现出较强的致病力,对种子的萌发抑制作用明显,对野燕麦表现出较强的侵染力,显著抑制植株的生长发育,且对青海省主栽作物中的蚕豆和豌豆相对安全。经鉴定,XN-1、XN-3和GD-13分别为链格孢(Alternaria sp.）、黑附球菌(Epicoccum nigium)和短小茎点霉(Phoma exigua)。【结论】XN-1、XN-3和GD-13有望成为防除阔叶田野燕麦的真菌除草剂的候选菌株。     

蕉斑镰刀菌32-6菌株产孢条件研究

通过液体摇瓶及固体浅盘产孢试验,比较了蕉斑镰刀菌32-6菌株在不同液体培养基中的产孢量,同时以绿豆汤和廉价固体基质(麦麸与米糠)分别作为液体和固体发酵基质,确定了发酵所需的参数。结果表明,绿豆汤培养基液体摇瓶产孢条件为28℃、初始pH8.0、初始接种量体积分数为1%(每mL母液1×106个孢子)、培养5d时,产孢量最大;固体浅盘产孢条件为28℃、初始pH8.0、初始接种量质量体积比为50∶1(g·mL-1)(每mL母液1×106个孢子)、麦麸与米糠的质量比为5.41∶1、基质含水量在63%~65%、培养9d时,产孢量达最大值。     

野燕麦生防菌株HZ 31的分离与致病性研究

为了开发恶性杂草野燕麦的生防真菌制剂,从刺儿菜患病植株根际经单孢分离获得一菌株HZ-31,并对其进行分离及致病性研究。结果表明,该菌株的适宜生长温度为20～30℃,喷雾接种病原菌的孢子量为1×108 mL-1时,接种后14d野燕麦地上部完全萎蔫,接种后保湿超过24h,可以明显提高该菌株的致病效果;在孢子悬浮液中添加φ=0.2%SDP可以明显提高致死效果,对小麦、蚕豆、豌豆安全,对青稞轻微致病,对油菜严重致病;形态学鉴定及ITS rDNA序列分析将其定为多孢木霉(Trichoderma polysporum)。综上,菌株HZ-31具有开发成为真菌除草剂的潜力。     

缺氧条件下受禾谷镰刀菌污染的玉米蛋白粉品质变化规律和呕吐毒素(DON)的积累规律研究

【目的】旨在研究缺氧存储条件下接种禾谷镰刀菌后玉米蛋白粉品质变化规律和呕吐毒素(deoxynivalenol,DON)的积累规律。【方法】将1×10~3、1×10~4和1×10~5个/g的禾谷镰刀菌分别接种于水分含量为13%、16%、20%和22%的玉米蛋白粉中,自封袋缺氧培养,培养温度(25±2)℃,湿度75%±5%,培养60 d,测定玉米蛋白粉品质相关指标和DON积累规律。【结果】初始水分和禾谷镰刀菌接种量均对粗蛋白质含量、霉菌总数变化起作用,而对氨基酸含量变化无影响,13%和16%水分含量组粗蛋白质含量无显著变化(P>0.05),20%和22%水分含量组粗蛋白质含量随着培养时间的延长呈线性增加(P<0.01),禾谷镰刀菌接种量1×10~3～1×10~5个/g的13%和16%水分含量组霉菌总数无显著变化(P>0.05),20%和22%水分含量组霉菌总数随着培养时间的延长呈二次曲线变化(P<0.01)。初始水分对粗脂肪、淀粉、粗纤维、酸价、蛋白质溶解度和能量变化起主要作用,而禾谷镰刀菌接种量不是主要影响因素,不同水分含量组粗脂肪、淀粉、粗纤维、蛋白质溶解度、能量随着培养时间的延长呈线性降低(P<0.01),酸价随着培养时间的延长呈线性增加(P<0.01)。初始水分和禾谷镰刀菌接种量对粗蛋白质、霉菌总数变化互作效应显著(P<0.05),对其他指标变化互作效应不显著(P>0.05)。DON与15AC-DON二者均有检出,但未出现积累规律。【结论】在缺氧存储条件下,接种禾谷镰刀菌后,初始水分是玉米蛋白粉品质变化的主要影响因素,水分越高,培养时间越长,品质越差。禾谷镰刀菌接种量不是影响玉米蛋白粉品质的主要因素,DON和15AC-DON未见积累规律。     

禾草灵在春小麦田的施用技术及其对野燕麦生态变化的影响

野燕麦(Avena fatua L.)在春小麦田群体生态变化呈现规律性。禾草灵是防除野燕麦的优良药剂。本研究采用正交设计法进行田间试验,明确了许多因素能影响禾草灵防除野燕麦的效果,其中以施药期最为显著,其次是施药量。研究得出了施用禾草灵防除野燕麦的最佳技术组合为A_3B_4C_1D_2。     

不同发酵方式和保存方法对3种生防菌活菌量的影响

为明确3株优良生防菌SC11、153、FO47在不同发酵方法和保存条件下活菌量变化规律,采用活菌平板计数法,测定3种生防菌12个月内活菌量变化及3种生防菌粉剂发酵初期和12月保存期后对茄子黄萎病的温室盆栽防效。结果表明,SC11、153和FO47菌粉于4℃密封保存12个月后活菌量与其初始活菌量差异不显著(P0.05);FO47菌粉在4℃保存12个月后活菌量高于初始活菌量(P0.05);3种生防菌发酵液初始活菌量较菌粉低1~2个数量级,在保存期60d内活菌量急剧下降,第6个月时接近于0。3种生防菌粉存放12个月后对茄子黄萎病仍保持较高的抑菌活性。说明,固体发酵菌粉可以得到较高数量级的初始活菌量,3种生防菌菌粉4℃密封保存12个月后活菌量及抑菌活性不变,且FO47菌粉活菌量略有上升;发酵液不利于生防菌的长期保存。     

燕麦镰刀菌GD-2产除草活性物质的初步研究

为明确燕麦镰刀菌(Fusarium avenaceum)中除草活性物质,以野燕麦种子为靶标,采用活性追踪法,对燕麦镰刀菌正丁醇萃取物进行活性成分分离和活性测定。正丁醇萃取液旋转蒸发去溶剂后进行硅胶柱层析,以二氯甲烷和甲醇的混合液进行梯度洗脱,每50mL收集为一个馏分,共收集到50个馏分。生物测定结果表明:以二氯甲烷和甲醇的体积比为20∶1的混合液,洗脱得到的馏分24~27对供试杂草野燕麦表现出较强的活性,其对野燕麦的除草抑制作用均为4级。合并馏分24~27,以二氯甲烷和甲醇的体积比为15∶1的混合液作为展开剂进行薄层层析(TLC),通过生物测定结果表明,Rf值在0.47~0.58的活性条带对野燕麦有较强的除草抑制活性,对野燕麦的除草抑制作用达到5级。HPLC分析发现,该活性条带主要含有3个组分,最大吸收峰在260nm,其保留时间分别为6.378、19.721和22.403min。     

蕉斑镰刀菌32-6菌株侵染空心莲子草的组织病理观察

将蕉斑镰刀菌32-6菌株的分生孢子液接种到空心莲子草叶片上表面,在扫描电镜和透射电镜下观察了蕉斑镰刀菌32-6菌株分生孢子的萌发、侵染过程以及对叶片细胞的作用.结果表明,空心莲子草叶片上的气孔是该菌的主要侵入途径之一.该菌可以通过破坏空心莲子草叶绿体而致病.     

蝴蝶兰叶基腐病生物学特性及防治研究

尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是蝴蝶兰叶基腐病的主要病原菌,对尖孢镰刀菌的生物学特性和防治方法进行了研究.结果表明:该病原菌最适生长温度为26℃,产生分生孢子的温度是20、22℃;最适菌丝生长的pH值为6～7;病原菌分生孢子萌发需要高湿度环境条件,在饱和湿度和水滴中有利于分生孢子萌发;光暗交替有利于...     

蝉拟青霉分生孢子萌发的影响因子

研究了不同营养、温度、湿度、光照、pH值等条件对蝉拟青霉LB菌株分生孢子萌发的影响.结果表明:2%葡萄糖+1%蛋白胨溶液制成孢子悬浮液的萌发率最高达95.09%;25～27℃是蝉拟青霉LB菌株分生孢子萌发的适宜温度条件;分生孢子萌发所需湿度为90%～100%,当湿度低于90%时萌发受到抑制;分生孢子在pH 6～7的中性至弱酸环境下萌发最好;光照对孢子萌发无影响;紫外线对孢子有明显的杀伤作用,随紫外线照射时间的延长,孢子萌发率明显降低,经紫外线照射后孢子有萌发迟缓的现象.     

龙胆草斑枯病组织病理学研究初报

通过在开花期龙胆草植株上接种龙胆草斑枯病菌,然后置于温室内保温保湿培养,每隔一定时间取样、固定、制片,来镜检观察病原菌形态结构变化及组织病变过程.结果表明:病菌分生孢子萌发后产生芽管从气孔侵入,完成侵入需要12～48h,大约在接种10天后显示症状,16天形成分生孢子器并成熟;病菌侵染寄主引起症状后,菌丝多从叶片背面跨过叶肉组织,在叶片正面的薄壁细胞间集结,最后形成分生孢子器,分生孢子器产生于表皮下薄壁细胞之间,具有一定随机性.     

木霉菌及其代谢产物对香蕉枯萎病菌的离体抑制作用研究

离体测定了22株木霉菌及其代谢产物对香蕉枯萎病菌4号生理小种的抑制作用,结果表明采用平板对峙培养,木霉菌对香蕉枯萎病原菌菌丝生长的抑制率为61.76%~100.00%,20%(V/V)木霉菌发酵液对病原菌菌丝生长抑制率为11.83%~52.69%,而木霉菌产生的非挥发性代谢产物和挥发性代谢产物对病原菌菌丝生长抑制率分别为3.83%~74.62%和11.17%~29.37%。用20%~50%(V/V)木霉菌T05-049发酵液处理香蕉枯萎病菌球型分生孢子9 h和镰刀型分生孢子6 h,其孢子萌发抑制率分别为86.60%~96.40%和56.29%~85.41%。     

A rapid approach for isolating a single fungal spore from rice blast diseased leaves

Single spore isolation is a fundamental approach in plant pathology and mycology to isolate and identify plant fungal pathogens from diseased samples. However, routine single spore isolation procedure is time-consuming and has a high risk of contamination by other microorganisms. In this study, we developed a rapid approach for isolating a single spore of the fungal pathogen, Pyricularia oryzae, from rice blast diseased leaves in the paddy field with low potential of contamination. First, rice blast leaves with single lesions were selected in the paddy field, and a single lesion was cut out and pressed and dragged gently across the surface of water agar. Next, a germinated single spore with a barely visible piece of agar was cut out of water agar with a dissecting needle under a stereomicroscope at approximately 120-fold magnification. Last, the germinated single spore with water agar was transferred onto oatmeal tomato agar for growth and preservation. Based on our experience, a skilled technician or student can successfully isolate single spore from over 150 independent diseased samples with nearly no contaminations in a single working day. This approach is also suitable for isolating single spore from other fungal disease samples that produce abundant aerial conidia.     

香蕉枯萎病菌4号生理小种农杆菌介导遗传转化体系的建立及T—DNA插入突变体的筛选

【目的】通过农杆菌介导的遗传转化（ATMT）方法,建立香蕉枯萎病4号生理小种的高效转化体系,构建病原菌的突变体库并进行筛选,为已突变基因提供分子标记,在分子水平上对香蕉枯萎病菌的功能基因进行深入研究。【方法】通过单因子变量（试验材料、真菌孢子浓度、农杆菌预诱导终浓度、IM诱导培养基pH、共培养介质、共培养时AS浓度、共培养温度）试验,研究影响农杆菌介导的遗传转化效率的关键因素,并通过形态观察与致病性试验筛选突变体。【结果】得到的最佳转化条件为：农杆菌预诱导浓度OD600=0.8,病原菌孢子浓度106 CFU/mL,转化受体材料为分生孢子,共培养培养基pH 5.4,共培养温度25 ℃,共培养培养基中AS浓度200 μmol/L,共培养介质为硝酸纤维素膜。通过条件优化,转化效率可达到800-900个转化子/106个孢子。【结论】通过农杆菌介导的遗传转化成功将GFP基因转入病原菌中并表达,构建了病原菌的T-DNA插入突变体库,并通过筛选得到多个表型和致病性发生变化的突变体,为香蕉枯萎病菌基因组功能注释的研究奠定了基础。     

7.5%精恶唑禾草灵防除春小麦田野燕麦药效试验

7.5%精恶唑禾草灵浓乳剂对麦田野燕麦具有良好的防除效果,使用剂量以750~900ml/hm2为宜,对水225kg,于小麦4~5叶期,野燕麦3~4叶期均匀喷施。防除野燕麦效果达85%以上,对小麦安全,灭草后增产20%以上。研究结果表明,7.5%精恶唑禾草灵浓乳剂是防除野燕麦高效、低毒安全的农药,可以推广使用。     

大棚与露地豇豆病虫害发生情况比较

【目的】对设施大棚与露地栽培条件下豇豆病虫害发生情况进行比较分析,为设施大棚病虫害防治及其在海南省的推广应用提供依据。【方法】2010~2011年冬季和2011年春夏季,分别进行露地与设施大棚豇豆栽培试验,调查记录不同季节大棚及露地豇豆斜纹夜蛾、豆荚螟、斑潜蝇、蓟马、叶螨、白粉病、锈病、轮纹病、煤霉病等病虫害发生情况。【结果】大棚内豇豆斜纹夜蛾、豆荚螟、斑潜蝇、蓟马等虫口数略低于露地,其中蓟马在豇豆整个生育期虫口数较高,是危害豇豆的主要害虫;豇豆病害以锈病和轮纹病为主,其中2011年春夏季种植的豇豆锈病和轮纹病明显比2010～2011年冬季重。【结论】设施大棚对豇豆害虫有一定的隔离作用,达到降低害虫虫口基数的目的;但对于病害,露地与设施大棚豇豆病害总体未见太大差异。