互助藏羊肺炎病原绵羊肺炎支原体的PCR检测与分析

青海省互助某羊场藏系绵羊发生肺炎疾病,为了快速准确诊断藏羊肺炎发病的致病病原微生物,及时防控和治疗,采集病死绵羊肺样品,利用PCR分子生物学方法进行鉴定与生物信息学分析。经过分子鉴定,此羊场引发肺病的病原是绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae, MO);测序结果显示样品中鉴定的为同一株病原,鉴定的菌株的16S rRNA基因与参考序列EU265779的同源性达到99.86%。同时遗传进化树显示,鉴定的菌株与GenBank中的绵羊肺炎支原体聚成一大支,其关系最近,在进化角度证实此次鉴定的确实为绵羊肺炎支原体。结果表明,此羊场引发肺炎疾病的病原是绵羊肺炎支原体,提示要对羊群进行相关的病原学研究和流行病学调查,为针对性地对细菌性病原进行对症治疗提供参考。     

绵羊支原体肺炎诊断及病原的分离与鉴定

通过对送检病羊的临床症状、剖检变化、病料染色镜检,初步诊断为绵羊支原体肺炎。又经无菌采取病料接种改良Frey培养氏液,再取培养液接种于固体培养液后分离到可疑绵羊肺炎支原体。然后将培养生长的支原体分别进行革兰氏染色、姬姆萨染色、瑞氏染色和碱性复红染色;进行了各种生化试验,进行动物和鸡胚接种试验和平扳凝集等血清学试验;最后确诊为绵羊支原体肺炎,并分离获得了绵羊肺炎支原体。该结果为绵羊支原体肺炎的防制奠定了基础。     

绵羊支原体肺炎诊断及病原的分离与鉴定

通过对送检病羊的临床症状、剖检变化、病科染色镜检,初步诊断为绵羊支原体肺炎。又经无茵采取病料接种改良Frey培养氏液,再取培养液接种于固体培养液后分离到可疑绵羊肺炎支原体。然后将培养生长的支原体分别进行革兰氏染色、姬姆萨染色、瑞氏染色和碱性复红染色;进行了各种生化试验,进行动物和鸡胚接种试验和平扳凝集等血清学试验;最后确诊为绵羊支原体肺炎,并分离获得了绵羊肺炎支原体。该结果为绵羊支原体肺炎的防制奠定了基础。     

应用双重PCR方法检测羊支原体肺炎病原

通过对丝状支原体山羊亚种(M.mycoides subsp.capri,Mmc)特异性引物MmcF/MmcR和绵羊肺炎支原体(M.ovipneumontiae,Mo)特异性引物LmF/LmR退火温度、引物浓度比例等条件的选择,建立了一个可以同时检测Mmc和Mo的双重PCR方法。该方法可同时扩增出Mmc 195 bp和Mo 361 bp目的片段,但对其他病原菌不能扩增出任何条带,具有良好的特异性。敏感性试验表明,该方法能够分别检测出0.1ng的Mmc DNA和0.01 ng的Mo DNA,或同时检测出1ng Mmc和1ng Mo混合的DNA。用该双重PCR方法可对实验室保存的4株绵羊肺炎支原体和2株丝状支原体山羊亚种进行准确鉴定,并可从临床病料中检测出相应支原体,表明建立的双重PCR方法可用于Mmc和Mo的快速鉴定、实验室诊断和病原学调查。     

隆林黑山羊肺炎病原的分离鉴定

为了调查隆林黑山羊肺炎的病原,取肺炎病死羊的胸腔积液和肺组织分别接种改良Hayflick支原体液体和固体培养基进行病原分离与纯化、形态学观察、生长抑制和PCR扩增及测序鉴定,并对分离病原株进行药物敏感试验。结果显示:隆林黑山羊肺炎的病原为丝状支原体山羊亚种。药物敏感试验表明其对壮观霉素、阿奇霉素、卡那霉素、强力霉素和林可霉素高度敏感。     

从湖羊肺脏中分离绵羊肺炎支原体的鉴定

从新疆湖羊肺脏病料中分离出一株支原体XJ-3f，用其培养物人工感染80日龄健康绵羊，28d后剖杀，剖检可见肺表面肉粉色实变，显微病理变化为大灶性融合性肺炎。参考国际已知支原体16SrRNA序列，设计一对扩增700bp片段的通用引物，直接提取肺脏组织DNA进行PCR扩增并克隆、测序。将该序列与GenBank中33种支原体序列比较，结果证明该序列与绵羊肺炎支原体（M．ovipneumonia）标准株Y．98同源性为99．9％，而与山羊支原体山羊亚种（M．capricolum subsp．capricolum，Mcc）、丝状支原体山羊亚种（M．mycoides subsp．Capri，Mmc）、丝状支原体丝状亚种LC型（M．mycoides subsp．mycoides LC，M．mmLC）等同源率为81％。以感染羊血清和Y．98与从发病羊肺脏中分离出的三株支原体茵体蛋白进行Western blot，证明均与感染羊血清有特异性反应，且与Y．98相比无明显差异，故确定分离株为绵羊肺炎支原体（M．ovipneumonia）。     

绵羊肺炎支原体的分离与鉴定

绵羊肺炎支原体是一种引起羊传染性胸膜肺炎的病原微生物,它不仅能感染绵羊同时也可感染山羊,发病率和死亡率较高,易给养羊业造成较大损失。近年来,内蒙古境内羊传染性胸膜肺炎也多有发生,为了查明病原,分别在内蒙古一些发病地区采取病料,经分离得到了疑似绵羊支原体菌株7株。对该病原微生物的分离培养、形态学特征、理化特性等进行了阐述,以期为该病的快速诊断及防治提供参考。     

绵羊支原体肺炎的诊治

1　发病情况　 2 0 0 1年 1月 ,靖江市郊区一养羊户从浙江省某地调进湖羊 1 0 6只 (其中母羊 1 0 1只 ,多为怀孕绵羊 ) ,入场后第 5天发现一只公羊流浆液性鼻涕 ,咳嗽 ,体温升高 ,食欲减退 ,经常反复。到第 2 0天 ,部分母羊体温升高、不食 ,后经紧急治疗 ,疫病得到有效控制 ,共     

新疆伊犁地区哈萨克羊与萨福克羊感染支原体肺炎血清学调查与分析

为调查新疆伊犁地区哈萨克羊与萨福克羊感染支原体肺炎的情况,笔者使用绵羊肺炎支原体ELISA检测试剂盒,对新疆伊犁地区部分牧场的哈萨克羊和萨福克羊2个品种羊随机抽查共800份血清样本进行抗原抗体检测。结果显示,新疆伊犁地区的哈萨克羊和萨福克羊2个绵羊品种之间均存在MO感染的现象。哈萨克羊MP-Ab阳性率26.00%,萨福克羊MP-Ag阳性率7.34%;哈萨克羊MP-Ag阳性率22.91%,萨福克羊MP-Ag阳性率19.71%。血清学检测结果表明,新疆本地的绵羊品种（哈萨克羊）抗原抗体的阳性检出率均高于外来引进品种（萨福克羊）。本地绵羊品种抗体阳性率显著高于外来引进品种;不同绵羊品种抗原检测阳性率无显著差异。本试验为探究新疆伊犁地区不同品种绵羊支原体肺炎的诊治方案提供了科学依据。     

山羊中绵羊肺炎支原体的分离及鉴定

从四川省乐至县发生胸膜肺炎性传染病的山羊群中采集12个鼻拭子及4个肺组织病料,进行病原分离培养和特异性PCR检测。结果从9个鼻拭子和4个肺组织中分离到支原体,经鉴定均为绵羊肺炎支原体,未发现丝状支原体簇成员及多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌。结果表明,绵羊肺炎支原体是引起该山羊群发生胸膜肺炎的病原,同时说明绵羊肺炎支原体也是山羊支原体性肺炎的重要病原之一。     

山羊传染性胸膜肺炎病原分离与鉴定

本试验从传染性胸膜肺炎的山羊体内分离获得两株支原体Y1和Y2，通过病原分离、形态学观察、生化试验、HA、生长抑制试验和代谢抑制试验等试验，证实Y1和Y2的形态与培养特性、生化反应特性和血清学特性分别与模式株丝状支原体山羊亚种PG3和绵羊支原体Y98相接近；动物回归试验成功复制出山羊传染性胸膜肺炎的典型临床症状和病理剖解变化。结果表明Y1和Y2分别为丝状支原体山羊亚种和绵羊支原体。     

绵羊肺炎支原体分子致病机理研究进展

绵羊肺炎支原体（Mycoplasma ovipneumoniae,MO）引起的支原体肺炎（Mycoplasma pneumonia）是严重危害养羊业的重要呼吸道疫病。绵羊肺炎支原体感染具有隐蔽性、持续性,造成患病羊生产性能下降,严重影响养羊经济效益。综合近期国内外关于绵羊肺炎支原体分子致病机制的文献报道,从绵羊肺炎支原体与呼吸道上皮细胞黏附、致下呼吸道损伤和引起机体免疫抑制三方面进行综述,以期为后续深入研究绵羊肺炎支原体致病机理、开发新型防控技术奠定基础。     

山羊支原体性肺炎流行病学调查

山羊支原体性肺炎是威胁山羊养殖的重要传染病,为了解其流行情况,对四川省主要山羊养殖地区的山羊支原体性肺炎进行了流行病学调查。从四川省7个地区山羊养殖场采集肺脏和鼻腔棉拭子样本共135份,经过分离鉴定得到42株支原体,其中绵羊肺炎支原体36株,丝状支原体6株;其中6个羊场仅分离到绵羊肺炎支原体,1个羊场同时分离到绵羊肺炎支原体和丝状支原体。本试验结果表明,绵羊肺炎支原体是引起四川省山羊支原体性肺炎的主要病原,个别地方存在绵羊肺炎支原体和丝状支原体混合感染。     

广西黑山羊胸膜肺炎病原的分离与鉴定

本试验自广西南宁某个体黑山羊养殖户的病羊中分离得到疑似肺炎支原体菌株,经光学显微镜和电子显微镜对培养菌株的生长形态进行观察并结合菌株的生化特性、生长抑制试验、动物致病性试验和PCR检测鉴定为绵羊肺炎支原体。     

安哥拉山羊改良建昌黑山羊生产马海毛横交方案的研究

以安哥拉山羊、建昌黑山羊、一代羊(F1)、二代羊(F2)、三代羊(F3)、二代与三代同质个体横交后代(H)为供试羊只,采用形态遗传标记、生化遗传标记和分子遗传标记确定安哥拉山羊改良建昌黑山羊生产马海毛的横交方案。结果:F2、F3 和H白色毛被分别为93 5%、100%和100%,毛被同质和基本同质个体分别为27 7%、70 2%和65 3%;成年羊产毛量随代数增加而增加,但F3 和H与F2,H 与F3 公、母羊分别对应比较,差异均不显著(P>0 05)。成年羊体重F1 和F2 增加,杂种优势明显,但F3 母羊则不显著(P>0 05),H还有下降(P>0 05)。平均基因杂合度和一致度安哥拉山羊、建昌黑山羊、F3、H分别为0 113 1 和0 886 9, 0 062 1 和0 937 9, 0 110 3 和0 889 7, 0 110 4和0 889 6。安哥拉山羊与F3 和H的遗传距离小,分别为0 003 9和0 004 0,遗传相似系数大,相应为0 996 1、0 996 0。群体内谱带相似系数,安哥拉山羊、F2、F3 和H分别为0 454 0,0 407 6,0 611 3 和0 610 9。且F3 和H均极显著大于安哥拉山羊(P<0 01)。综合研究表明,可在F2 和F3 代中选择理想同质个体进行横交。     

山羊源绵羊肺炎支原体的耐药谱型分析

采用微量稀释法对从四川自贡、简阳、乐至等地分离的33株山羊源性绵羊肺炎支原体进行19种抗菌药物MIC值测定,试验数据利用WHONET5.4软件处理并分析其耐药谱型。试验结果表明,33株绵羊肺炎支原体对19种抗菌药物表现出多重耐药性,其耐药谱型以耐氯霉素、链霉素、红霉素、头孢噻呋、阿米卡星、利福平为主,约占78.79%。     

内蒙古地区绵羊肺炎支原体的分离鉴定及序列分析

本试验无菌采取内蒙古地区某发病羊场的绵羊病变肺脏组织,接种于支原体液体培养基进行分离培养后获得1株支原体,根据分离株的培养特性、形态学观察及生化试验等,初步鉴定为绵羊肺炎支原体。然后提取分离株的基因组,用通用引物体外扩增出分离株16S rRNA序列,将该序列与GenBank中已知33种支原体序列进行比较,结果表明该序列与绵羊肺炎支原体标准株Y-98的16S rRNA序列的同源性为99%,鉴定该分离株为绵羊肺炎支原体。