适合转录组测序的苹果果实RNA提取方法的筛选

为了筛选适用于转录组测序的苹果果实RNA提取方法,试验以苹果叶片、野生苹果未成熟和成熟果实、栽培种苹果成熟果实为材料,采用7种方法对4种材料进行RNA提取,并通过凝胶电泳、Agilent 2100 RNA芯片对提取的总RNA进行质量检测。结果表明,采用的7种方法中有2种方法可以成功提取4种材料的RNA,证实改良CTAB法是适合转录组测序的苹果果实RNA提取方法。     

小黑杨花粉总RNA提取方法的比较研究

以小黑杨(Populus simonii×P.ni gra)成熟花粉为试材,分别采用传统CTAB法、柱式植物RNAout试剂盒法、改良CTAB法及SDS法4种方法提取小黑杨花粉总RNA;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计及RT-PCR检测,研究比较了4种方法的优劣.结果表明:SDS法提取的总RNA纯度高、完整性好,总RNA质量显著高于其它3种方法,且该方法具有步骤简单、提取时间短、成本低等优点,是一种适用于小黑杨花粉总RNA提取的比较理想的方法.     

李果实果肉组织RNA提取方法的比较分析

以中国李品种‘槜李’的果肉组织为试材,比较了Trizol法、RNA提取试剂盒和改良的CTAB法提取RNA的效果,筛选出适合李果实果肉组织总RNA的提取方法。结果表明:Trizol法和RNA提取试剂盒均不能得到完整的RNA;改良的CTAB法能有效去除多糖,28S条带的荧光亮度是18S条带的1.5~2.0倍,D260/D280值都在1.8~2.1,样品的平均得率为770.96~1 029.04ng/μL,RT-PCR结果扩增出了特异性条带,说明改良CTAB法从李果实果肉组织中提取的RNA质量高、完整性好、产率高,完全可以用于后续的分子生物学试验。     

新疆阿魏RNA提取的不同方法比较

以新疆阿魏叶片为材料，采用3种不同的方法分别提取其总RNA，用核酸蛋白检测仪、琼脂糖凝胶电泳方法检测其浓度、纯度及完整性，旨在建立提取新疆阿魏总RNA的最适方法，为后续深入研究新疆阿魏生物合成途径及机制奠定基础。结果表明：3种方法均能提取出新疆阿魏叶片总RNA。试剂盒法提取的总RNA质量最好，28S RNA亮度是18S RNA的2倍，条带清晰，操作简单，耗时短；Trizol法提取的RNA质量次于试剂盒法，且过程中无法判断次级代谢产物对RNA提取的影响，Trizol裂解液存在毒性物质；改良CTAB法提取的总RNA质量较差，无法满足下一步试验的要求，操作复杂，耗时较长。因此，试剂盒法为提取新疆阿魏RNA最佳方法。以试剂盒法提取的总RNA为模板进行PCR检测，得到的扩增条带清晰，与目的片段大小一致，进一步证明此方法提取的总RNA质量能够满足后续试验的要求。     

核桃内果皮RNA提取方法研究

以核桃果壳硬化期的内果皮为试材,针对核桃内果皮木质化程度高且富含多酚多糖的特点,比较CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和试剂盒3种方法提取核桃内果皮RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA均可见3条带。CTAB法Ⅰ提取的RNA略微拖带,OD_(260)/OD_(280)为1.540,RNA产率为75.9μg/g,RNA完整性差,质量低;CTAB法Ⅱ的RNA图谱较完整,但亮度较弱,OD_(260)/OD_(280)为1.801,产率为86.1μg/g,但RNA提取过程耗时太长;试剂盒法提取的RNAOD_(260)/OD_(280)为2.055,RNA产率96.4μg/g,RNA图谱清晰、稳定、明亮,证明得到的RNA多糖及酚类等去除较彻底,纯度、完整性和产率均较高。因此,应用复杂植物总RNA提取试剂的试剂盒法可获得高质量与高产率的核桃内果皮总RNA,完全满足后续分子生物学研究。     

菊芋基因组DNA提取方法的比较

采用改良CTAB法、改进的高盐SDS法及两种植物基因组DNA提取试剂盒法等４种方法提取菊芋基因组DNA,并进行电泳分析、质量检测及ISSR引物扩增检测。结果表明,改良CTAB法优于其他3种方法,提取的DNA质量较好、纯度较高,能够满足ISSR-PCR扩增要求。     

几种果实不同组织总RNA提取及质量分析

以菊水梨为试验材料,通过2种改良CTAB法对果实不同成熟阶段提取的总RNA质量和产量的变化的影响,研究果实不同成熟阶段果皮和果肉总RNA提取的质量和产量,并针对梨果实不同成熟阶段采用不同的改良CTAB法,以较低的成本从果实中提取完整性好、质量高的总RNA。同时提取近成熟的红富士葡萄、富士苹果和丰香草莓3种果实总RNA。总RNA的质量和产量分析结果表明,方法Ⅰ和Ⅱ分别适用于成熟度较低和较高梨果实总RNA的提取,方法Ⅰ也适用于其它3种近成熟果实总RNA提取。并通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆和表达等分子生物学实验的要求。     

一种高质量葡萄基因组DNA提取方法

针对葡萄组织中多酚、多糖类物质含量较高的特点,对比研究了利用植物总DNA提取试剂盒和改良CTAB法提取葡萄总DNA.结果表明:改良的CTAB法能够从不同葡萄品种和不同生长时期的叶片中获得高质量、完整性好的总DNA,其OD260/OD260介于1.7～1.9之间,无降解现象,RNA去除干净,完全适于进行PCR和酶切等研究.     

3种方法提取辣椒根总RNA的效果比较

针对辣椒根中富含多糖多酚的特点,比较了Trizol法、改良Trizol法和改良CTAB法3种方法对辣椒根总RNA提取的效果。结果表明,Trizol法、改良Trizol法能提取到辣椒根总RNA,但效果不理想;改良CTAB法提取到的辣椒根总RNA,28 S rRNA的亮度是18 S rRNA的2倍,OD260/OD280和OD260/OD230值分别为1.88和1.80,RNA质量浓度为254.0 mg·L-1;用提取到的RNA进行RT-PCR后可扩增出acting基因特异片段。因此改良CTAB法提取辣椒根总RNA的效果好、质量高、完整性好,能够满足后续试验要求。     

山丹百合花蕾总RNA提取方法的比较

以SDS改进法、CTAB改进法及EASYAPIN试剂盒法3种方法提取山丹百合花蕾的总RNA,并通过紫外分光光度法和凝胶电泳检测对其提取效果进行分析比较.结果表明:SDS改进法提取的RNA效果不显著,CTAB改进法提取的RNA产量高,但有大量的DNA污染,需进一步纯化;EASYAPIN试剂盒法提取的RNA质量好,纯度高,完整性强,可直接进行下一步的分子生物学研究.     

大白菜游离小孢子培养技术高效体系的研究

以大白菜吉红82、#534DH 群体及#438 群体为试材，研究了利用细胞破碎仪机械提取小孢子与人工挤压提取小孢子对大白菜游离小孢子活力及提取量的影响。结果表明：机械提取替代人工挤压可在短时间内同时提取多份样品，并可快速调整小孢子的培养浓度。收集40 个适期花蕾于5 mL 离心管内，3 000 r·min-1 破碎10 s，将提取的小孢子定容于25 mL NLN-13 培养基，可确保小孢子浓度在适宜培养范围内，并成功诱导胚胎发生。     

刺五加总RNA提取方法的比较

为了获取到高质量的刺五加总RNA,以叶片为试材,比较不同提取方法的提取效果。结果表明,改良的异硫氰酸胍法效果最优,方法简单、经济,通过该方法获得的总RNA能够很好的满足后续分子生物学实验的要求,试剂盒方法效果次之,CTAB法效果第三,Trizol法最差。     

萝卜病毒病小RNA 分析及资源抗性表现

病毒病是为害萝卜的主要病害之一。基于核酸检测的植物病毒病检测技术，因其检测范围广、灵敏度高、适合大批 量检测而得以广泛应用。本试验利用小RNA 高通量测序方法鉴定萝卜病毒病的种类，并调查分析了264 份萝卜核心种质资 源及育种品系对病毒病的抗性。结果表明：萝卜病毒病的主要病原为芜菁花叶病毒（TuMV）。参试的核心种质资源和品系 多数表现出较好的抗性，且不同品系姊妹系间抗性表现基本趋于一致。田间抗病性调查结果显示：抗病材料有103 份，高抗 材料有64 份，且有25 份材料达到免疫。     

羊肚菌菌丝体总RNA提取方法的比较

采用SDS抽提法、TRIzol法、CTAB-LiCl、DEPC水法对羊肚菌菌丝体进行了总RNA的提取,并对其进行了紫外及琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:4种提取方法中DEPC水法提取的总RNA质量最好,SDS抽提法次之,CTAB-LiCl法和TRIzol法效果最差。从RNA质量、操作简单、经济与否等方面综合分析,DEPC水法是羊肚菌菌丝体总RNA提取较为理想的方法。     

大白菜渗透压应激活化蛋白激酶基因SRK2F的克隆与表达

以不耐盐、不耐旱的大白菜自交系SY-14-06为试材,提取根部总RNA,反转录为c DNA。根据大白菜SRK2F基因设计引物,PCR扩增SRK2F基因CDS序列1044bp。SRK2F编码347个氨基酸,预测分子量为39.3k D,理论等电点为4.88。利用p EASY-E1原核表达载体构建原核表达质粒p EASY-E1-SRK2F,转化表达菌株Transetta(DE3),通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。经Smart-embl预测其具有丝/苏氨酸激酶特有结构域,位于第4~260位氨基酸处。经Clustal X2比对,其与拟南芥同源性最高。最后利用镍离子金属螯合亲和层析介质对该蛋白进行纯化,得到了纯化的融合蛋白。     

荔枝败育胚S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的全长扩增和序列分析

 从荔枝‘桂味’的败育胚中提取总RNA，利用GeneRacer^TM Kit将RNA经去磷酸化反应、去mRNA的帽子结构及RNA Oligo连接，反转录合成cDNA，以cDNA为模板，分别用SSH分离得到的胚败育相关差异表达s一腺苷甲硫氨酸合成酶基因的部分cDNA序列(599 bp)设计出3’和5’端基因特异引物，进行PCR末端扩增。荔枝败育胚的s一腺苷甲硫氨酸合成酶基因序列全长为1515 bp，编码393个氨基酸，与其它物种的S一腺苷甲硫氨酸合成酶基因的核苷酸序列同源性在79%~82%之间，氨基酸序列同源性在88%～91%之间。结果表明所获得的基因为与荔枝胚败育相关的S一腺苷甲硫氨酸合成酶基因。关键词：     

4种冬虫夏草总RNA提取方法的比较

以冬虫夏草新鲜子实体为材料,分别采用SDS抽提法、TRIzol法、CTAB-LiCl法和DEPC水法4种方法进行总RNA的提取试验,并对其进行了紫外及变性琼脂糖凝胶电泳检测。检测结果表明,4种提取方法中DEPC水法提取的总RNA质量最好,SDS抽提法次之,CTAB-LiCl法和TRIzol法效果最差。从RNA质量、操作难度、经济与否等方面综合分析,DEPC水法是较为理想的提取冬虫夏草新鲜子实体总RNA的方法。     

不同夜温对茄子套管嫁接苗愈合的影响

以茄子砧木品种茄砧1号和接穗品种快圆茄为试材,采用显微观察等方法,研究不同夜温(19、24、29℃)对茄子套管嫁接苗愈合速率及质量的影响。结果表明:在29℃昼温条件下,随着夜温的升高,茄子嫁接苗接合部愈伤组织细胞层数增加,接合部直径增大,但维管束连接及愈合进程减缓,木质部输导能力减弱,愈合质量下降。夜温为19℃的处理,嫁接后第13天隔离层完全消失,维管束连接,愈合进程较快,木质部输导能力比夜温29℃处理提高了72.89%;夜温为29℃的处理,嫁接后前9d愈伤组织产生较多,接合部直径明显增大,比夜温19℃处理提高了13.35%,但愈合进程较慢。综上,在昼温29℃的情况下,夜温19℃最有利于茄子嫁接苗的愈合。     

基于营养动态积累的普通白菜最佳采收期综合评价

普通白菜（Brassica campestris L. ssp. Chinese）的苗菜—鸡毛菜生产中的采收期确定仍以传统的经济产量为主， 而忽略了品质。本试验以普通白菜品种华王为试验材料，使用72、128、200、288 孔4 种穴盘规格，于播种后5、8、11、14 d 和17 d 采样，研究不同规格穴盘栽培普通白菜苗菜的生理形态与营养品质变化规律；并采用主成分分析法筛选出普通白菜 综合品质的重要指标，提出“采收指数”这一指标对普通白菜的苗菜综合品质进行评价，以期在保证产量的前提下以营养 品质来确定最佳采收期。结果表明：不同规格穴盘普通白菜形态的变化趋势较好地拟合二次多项式函数。随着播种后时间的 延长，VC 含量整体呈增加趋势；可溶性蛋白含量在播种后14 d 达到最大值；硝酸盐含量前期高，在大幅度降低后小幅度回 升；72、128、200 孔穴盘普通白菜总叶绿素和类胡萝卜素含量在播种后14 d 增长至最大值，而288 孔穴盘普通白菜总叶绿 素和类胡萝卜素含量在播种后5～17 d 变化不大。主成分分析共提取4 个主成分，累积方差贡献率为72.244%。各规格穴盘 普通白菜采收指数均在播种后14 d 达到最大值，由大到小顺序为288 孔＞ 200 孔＞ 128 孔＞ 72 孔。至播种后17 d，288、 200 孔和72 孔穴盘采收指数均大幅下降，而128 孔穴盘普通白菜的采收指数下降幅度较小。因此，在本试验的5 个采收时 期中，上海地区春季玻璃温室穴盘生产普通白菜苗菜的最佳采收期为播种后14 d，其中288、200 孔穴盘的采收期不宜延迟， 而128 孔穴盘可适当延迟至播种后17 d。