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小黑杨花粉总RNA提取方法的比较研究 总被引:2,自引:0,他引:2
以小黑杨(Populus simonii×P.ni gra)成熟花粉为试材,分别采用传统CTAB法、柱式植物RNAout试剂盒法、改良CTAB法及SDS法4种方法提取小黑杨花粉总RNA;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计及RT-PCR检测,研究比较了4种方法的优劣.结果表明:SDS法提取的总RNA纯度高、完整性好,总RNA质量显著高于其它3种方法,且该方法具有步骤简单、提取时间短、成本低等优点,是一种适用于小黑杨花粉总RNA提取的比较理想的方法. 相似文献
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《现代园艺》2020,(15)
以新疆阿魏叶片为材料,采用3种不同的方法分别提取其总RNA,用核酸蛋白检测仪、琼脂糖凝胶电泳方法检测其浓度、纯度及完整性,旨在建立提取新疆阿魏总RNA的最适方法,为后续深入研究新疆阿魏生物合成途径及机制奠定基础。结果表明:3种方法均能提取出新疆阿魏叶片总RNA。试剂盒法提取的总RNA质量最好,28S RNA亮度是18S RNA的2倍,条带清晰,操作简单,耗时短;Trizol法提取的RNA质量次于试剂盒法,且过程中无法判断次级代谢产物对RNA提取的影响,Trizol裂解液存在毒性物质;改良CTAB法提取的总RNA质量较差,无法满足下一步试验的要求,操作复杂,耗时较长。因此,试剂盒法为提取新疆阿魏RNA最佳方法。以试剂盒法提取的总RNA为模板进行PCR检测,得到的扩增条带清晰,与目的片段大小一致,进一步证明此方法提取的总RNA质量能够满足后续试验的要求。 相似文献
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核桃内果皮RNA提取方法研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以核桃果壳硬化期的内果皮为试材,针对核桃内果皮木质化程度高且富含多酚多糖的特点,比较CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和试剂盒3种方法提取核桃内果皮RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA均可见3条带。CTAB法Ⅰ提取的RNA略微拖带,OD_(260)/OD_(280)为1.540,RNA产率为75.9μg/g,RNA完整性差,质量低;CTAB法Ⅱ的RNA图谱较完整,但亮度较弱,OD_(260)/OD_(280)为1.801,产率为86.1μg/g,但RNA提取过程耗时太长;试剂盒法提取的RNAOD_(260)/OD_(280)为2.055,RNA产率96.4μg/g,RNA图谱清晰、稳定、明亮,证明得到的RNA多糖及酚类等去除较彻底,纯度、完整性和产率均较高。因此,应用复杂植物总RNA提取试剂的试剂盒法可获得高质量与高产率的核桃内果皮总RNA,完全满足后续分子生物学研究。 相似文献
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几种果实不同组织总RNA提取及质量分析 总被引:7,自引:0,他引:7
以菊水梨为试验材料,通过2种改良CTAB法对果实不同成熟阶段提取的总RNA质量和产量的变化的影响,研究果实不同成熟阶段果皮和果肉总RNA提取的质量和产量,并针对梨果实不同成熟阶段采用不同的改良CTAB法,以较低的成本从果实中提取完整性好、质量高的总RNA。同时提取近成熟的红富士葡萄、富士苹果和丰香草莓3种果实总RNA。总RNA的质量和产量分析结果表明,方法Ⅰ和Ⅱ分别适用于成熟度较低和较高梨果实总RNA的提取,方法Ⅰ也适用于其它3种近成熟果实总RNA提取。并通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆和表达等分子生物学实验的要求。 相似文献
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《中国瓜菜》2016,(1):8-10
针对辣椒根中富含多糖多酚的特点,比较了Trizol法、改良Trizol法和改良CTAB法3种方法对辣椒根总RNA提取的效果。结果表明,Trizol法、改良Trizol法能提取到辣椒根总RNA,但效果不理想;改良CTAB法提取到的辣椒根总RNA,28 S rRNA的亮度是18 S rRNA的2倍,OD260/OD280和OD260/OD230值分别为1.88和1.80,RNA质量浓度为254.0 mg·L-1;用提取到的RNA进行RT-PCR后可扩增出acting基因特异片段。因此改良CTAB法提取辣椒根总RNA的效果好、质量高、完整性好,能够满足后续试验要求。 相似文献
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病毒病是为害萝卜的主要病害之一。基于核酸检测的植物病毒病检测技术,因其检测范围广、灵敏度高、适合大批
量检测而得以广泛应用。本试验利用小RNA 高通量测序方法鉴定萝卜病毒病的种类,并调查分析了264 份萝卜核心种质资
源及育种品系对病毒病的抗性。结果表明:萝卜病毒病的主要病原为芜菁花叶病毒(TuMV)。参试的核心种质资源和品系
多数表现出较好的抗性,且不同品系姊妹系间抗性表现基本趋于一致。田间抗病性调查结果显示:抗病材料有103 份,高抗
材料有64 份,且有25 份材料达到免疫。 相似文献
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以不耐盐、不耐旱的大白菜自交系SY-14-06为试材,提取根部总RNA,反转录为c DNA。根据大白菜SRK2F基因设计引物,PCR扩增SRK2F基因CDS序列1044bp。SRK2F编码347个氨基酸,预测分子量为39.3k D,理论等电点为4.88。利用p EASY-E1原核表达载体构建原核表达质粒p EASY-E1-SRK2F,转化表达菌株Transetta(DE3),通过SDS-PAGE检测该蛋白的表达。经Smart-embl预测其具有丝/苏氨酸激酶特有结构域,位于第4~260位氨基酸处。经Clustal X2比对,其与拟南芥同源性最高。最后利用镍离子金属螯合亲和层析介质对该蛋白进行纯化,得到了纯化的融合蛋白。 相似文献
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荔枝败育胚S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因的全长扩增和序列分析 总被引:3,自引:1,他引:3
从荔枝‘桂味’的败育胚中提取总RNA,利用GeneRacerTM Kit将RNA经去磷酸化反应、去mRNA的帽子结构及RNA Oligo连接,反转录合成cDNA,以cDNA为模板,分别用SSH分离得到的胚败育相关差异表达s一腺苷甲硫氨酸合成酶基因的部分cDNA序列(599 bp)设计出3’和5’端基因特异引物,进行PCR末端扩增。荔枝败育胚的s一腺苷甲硫氨酸合成酶基因序列全长为1515 bp,编码393个氨基酸,与其它物种的S一腺苷甲硫氨酸合成酶基因的核苷酸序列同源性在79%~82%之间,氨基酸序列同源性在88%~91%之间。结果表明所获得的基因为与荔枝胚败育相关的S一腺苷甲硫氨酸合成酶基因。关键词: 相似文献
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以茄子砧木品种茄砧1号和接穗品种快圆茄为试材,采用显微观察等方法,研究不同夜温(19、24、29℃)对茄子套管嫁接苗愈合速率及质量的影响。结果表明:在29℃昼温条件下,随着夜温的升高,茄子嫁接苗接合部愈伤组织细胞层数增加,接合部直径增大,但维管束连接及愈合进程减缓,木质部输导能力减弱,愈合质量下降。夜温为19℃的处理,嫁接后第13天隔离层完全消失,维管束连接,愈合进程较快,木质部输导能力比夜温29℃处理提高了72.89%;夜温为29℃的处理,嫁接后前9d愈伤组织产生较多,接合部直径明显增大,比夜温19℃处理提高了13.35%,但愈合进程较慢。综上,在昼温29℃的情况下,夜温19℃最有利于茄子嫁接苗的愈合。 相似文献
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普通白菜(Brassica campestris L. ssp. Chinese)的苗菜—鸡毛菜生产中的采收期确定仍以传统的经济产量为主,
而忽略了品质。本试验以普通白菜品种华王为试验材料,使用72、128、200、288 孔4 种穴盘规格,于播种后5、8、11、14
d 和17 d 采样,研究不同规格穴盘栽培普通白菜苗菜的生理形态与营养品质变化规律;并采用主成分分析法筛选出普通白菜
综合品质的重要指标,提出“采收指数”这一指标对普通白菜的苗菜综合品质进行评价,以期在保证产量的前提下以营养
品质来确定最佳采收期。结果表明:不同规格穴盘普通白菜形态的变化趋势较好地拟合二次多项式函数。随着播种后时间的
延长,VC 含量整体呈增加趋势;可溶性蛋白含量在播种后14 d 达到最大值;硝酸盐含量前期高,在大幅度降低后小幅度回
升;72、128、200 孔穴盘普通白菜总叶绿素和类胡萝卜素含量在播种后14 d 增长至最大值,而288 孔穴盘普通白菜总叶绿
素和类胡萝卜素含量在播种后5~17 d 变化不大。主成分分析共提取4 个主成分,累积方差贡献率为72.244%。各规格穴盘
普通白菜采收指数均在播种后14 d 达到最大值,由大到小顺序为288 孔> 200 孔> 128 孔> 72 孔。至播种后17 d,288、
200 孔和72 孔穴盘采收指数均大幅下降,而128 孔穴盘普通白菜的采收指数下降幅度较小。因此,在本试验的5 个采收时
期中,上海地区春季玻璃温室穴盘生产普通白菜苗菜的最佳采收期为播种后14 d,其中288、200 孔穴盘的采收期不宜延迟,
而128 孔穴盘可适当延迟至播种后17 d。 相似文献