金黄色葡萄球菌小菌落突变株研究进展

Jacobsen(1910)分离到一种异常的伤寒埃伯泽氏菌株,并依其特殊的表型特征命名为小菌落突变株(small colony variants,SCVs)。自此,人们开始了对SCVs的研究。深入研究发现,许多细菌(如表皮葡萄球菌、头葡萄球菌、绿脓杆菌、洋葱伯克氏菌、霍乱弧菌、志贺氏菌、羊布鲁杆菌、大肠埃希氏杆     

金黄色葡萄球菌小菌落突变株感染小鼠乳房炎模型的建立

为了建立由金黄色葡萄球菌小菌落突变株(small colony variants,SCVs)诱发感染乳房炎动物模型,本试验取40只分娩6~8 d的BALB/c小鼠,随机分成8组(n=5),分别为阴性对照、生理盐水组和不同剂量金黄色葡萄球菌SCVs及金黄色葡萄球菌质控菌株(1.0×10³、1.0×10⁴、1.0×10⁵ CFU/mL)试验组,对生理盐水组及各试验组小鼠第4对乳腺注射生理盐水和对应剂量的菌液(50 mL/只),注射后24 h解剖观察病理变化,一侧乳头制作石蜡切片,另一侧研磨后用ELISA检测试剂盒检测组织匀浆上清中的TNF-α含量。结果显示,注射菌液的试验组,小鼠均出现不同程度的临床症状,乳腺出现不同程度的炎性症状和病理变化。同一注射剂量下,金黄色葡萄球菌质控菌株较金黄色葡萄球菌 SCVs病理变化严重,通过SPSS等软件对试验数据进行统计分析后得出,高浓度处理组金黄色葡萄球菌质控菌株的TNF-α表达量极显著高于金黄色葡萄球菌SCVs(P<0.01)。结果表明,金黄色葡萄球菌及其SCVs均可用来建立小鼠乳房炎模型,且金黄色葡萄球菌SCVs引起的情况较其正常株轻微,这一结果为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究提供了新的材料和有益的探索,为SCVs与慢性乳房炎更深层次关系的研究奠定基础。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌小菌落突变株的表型鉴定及其遗传基础分析

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是导致奶牛乳房炎的主要病原菌,其在抗菌药物的作用下可形成小菌落突变株(small colony variants,SCVs)。为了探讨牛源性金黄色葡萄球菌在表型转变过程中的遗传基础,对临床分离的奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌野生型及其SCV、人工诱导的SCV、临床SCV的表型回复株进行了相关特性及基因组序列的分析。结果发现:金黄色葡萄球菌的SCV和野生型差异显著,野生型菌株在庆大霉素及磺胺甲噁唑/甲氧苄啶(SXT)的诱导下绝大多数产生甲萘醌缺陷型SCV,仅有1株经SXT诱导产生的SCV为胸腺嘧啶核苷(胸苷)缺陷型。菌株基因与表型之间存在明显关联,与野生型基因组相比,临床SCV均显示喹啉/醌代谢相关基因menA的碱基缺失,可能导致蛋白表达提前终止。庆大霉素诱导的SCV在基因menB处出现碱基位点突变;SXT诱导的SCV在代谢相关基因MW1485和aroA处分别出现基因片段的缺失和插入。回复株可能通过在代谢相关基因menA二次突变来恢复功能。本研究首次利用全基因组测序技术分析牛源性金黄色葡萄球菌SCV表型改变的遗传基础,有助于对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌SCV产生更深入的理解。     

金黄色葡萄球菌小菌落突变株体外感染乳腺上皮细胞的研究

为研究金黄色葡萄球菌小菌落突变株(S.aureus small colony variants,SASCVs)与正常株对原代培养的乳腺上皮细胞的侵袭情况,并观察对比其对细胞结构的损坏程度和对乳腺上皮细胞的影响,本试验对由云南农业大学动物医学实验教学中心实验室分离的一株SASCV进行体外感染小鼠乳腺上皮细胞试验,将分离出的一株SASCV及质控菌株ATCC 25923分别注入实验室体外培养的小鼠乳腺上皮细胞内,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察质控菌株ATCC 25923及SASCVs诱导乳腺上皮细胞凋亡的细胞形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI双染法)定量检测质控菌株ATCC 25923及SASCVs感染乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用,观察细胞的变化。结果显示,质控菌株ATCC 25923及SASCVs感染小鼠乳腺上皮细胞3 h后,可诱导乳腺上皮细胞发生凋亡,显示为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型的凋亡特征。Annexin V-FITC/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,并且阳性对照组的细胞凋亡率明显高于试验组。结果表明,SASCVs在侵染细胞的过程中达到一定数量不再上升;SASCVs的凋亡率明显的较正常金黄色葡萄球菌低。因此,SASCVs也可诱导乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征。本试验结果为以后预防和控制SASCVs感染奶牛慢性乳房炎提供试验依据。     

一株金黄色葡萄球菌小菌落突变株全基因组测序分析

对金黄色葡萄球菌小菌落突变株(small colony mutant strains Staphylococcus aureus,SASCVs)和CP000253.1基因组差异进行了研究,为后续研究金葡菌分泌抗药物相关物质能力提供数据支持。对一株金葡菌小菌落突变株进行全基因组测序,并与CP000253.1参考序列进行序列比较。结果显示,金葡菌SCVs的文库插入片段为350bp,测序读长为150bp,SCVs的原始数据量为551 Mb,SCVs的碱基含量分布在处理前后有所不同,通过重测序,存在单核苷酸多态性(SNP)的数量较大。金葡菌SCVs与CP000253.1参考序列之间存在明显的序列差异,该数据为研究金葡菌感染奶牛乳房炎提供了一定的序列依据。     

鸽金黄色葡萄球菌的分离与鉴定

１９９７年１２月底,我市某鸽场存栏的１０００多只青年鸽群中,有４０多只发现以眼疾为主要症状的传染病。患鸽拉绿色稀便,单侧眼红肿,流出粘性分泌物,眼睑周围有黄色结痂,无法睁开,有的鼻孔亦被黄色干酪物阻塞,喙部溃烂,严重的甚至脱落。发病半个月,死亡５只,...     

兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定

本研究从福建省某养殖场病兔分离到3株革兰氏阳性球菌,并对其进行了16S rRNA扩增、生化反应、药敏试验等检测,结果显示该病原菌为金黄色葡萄球菌。     

兔金黄色葡萄球菌的分离与鉴定

兔金黄色葡萄球菌的分离与鉴定孙善发（贵阳医学院实验动物中心，贵阳５５０００４）林凤仙（贵阳市传染病院细菌室）我省某实验种兔场，多年来少数兔局部有波动性肿胀症状，行走困难，卧笼不起，食欲减退，逐渐消瘦；初生兔常因皮肤外伤或脐带感染致病，生后２～１０日龄...     

鼠金黄色葡萄球菌的分离与鉴定

20 0 1年 9月 1 1日 ,我市某动物房饲养的 1 0 0 0多只小鼠中 ,有 60多只发现以溃疡性皮炎为主要特征的传染病。病鼠被毛耸立 ,精神萎靡 ,面部和颈部自然溃烂。公鼠生殖器包皮腺脓肿 ,在腹股沟和阴茎基部形成坚实、隆起的结节。母鼠受精、妊娠率下降。鼠群发病 1周 ,死亡 1 0只 ,其余因采食量下降而造成贫血、极度消瘦。剖检后 ,发现肝脏和肾脏肿大 ,睾丸和子宫充血、出血 ,有多量血红色胶冻样炎性渗出物。经细菌学鉴定 ,确诊为金黄色葡萄球菌感染。报告如下 :1　材料与方法1 .1　材料1 .1 .1　培养基 :普通营养琼脂、鲜血琼脂和高甘露醇琼…     

鸡金黄色葡萄球菌的分离鉴定

本试验对从病鸡分离到的病原进行微生物经细菌形态学观察、鉴别培养、生化试验、血浆凝固酶试验、过氧化氢酶试验,结果鉴定为金黄色葡萄球菌。     

槲皮素-替米考星混合物纳米粒的制备及对金黄色葡萄球菌小菌落变异株抗菌活性研究

【目的】 制备一种适用于治疗由金黄色葡萄球菌小菌落变异株(Staphylococcus aureus small colony variants,SASCVs)引起奶牛乳腺炎感染的槲皮素-替米考星混合物纳米粒,评价其对SASCVs菌株的抗菌活性。【方法】 通过对槲皮素(0.05、0.10、0.15和0.20 g)和替米考星原料药用量(0.2、0.3、0.4和0.5 g)及转速(500、1 000、1 500 r/min)、反应时间(0.5、1.0、2.0 h)、反应温度(25、50、75 ℃)、溶剂浓度(5.0%、7.5%、10.0%)进行考察,以外观性状为指标,筛选槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优配方和制备条件;以微观形态、沉降体积比、再分散性、粒径和Zeta电位为指标,对制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒表征;通过琼脂扩散法、微量肉汤稀释法和体外杀菌曲线,对比槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抗菌活性,评价槲皮素-替米考星混合物纳米粒的优势。【结果】 当替米考星为0.4 g、槲皮素为0.1 g、溶剂为20 mL 7.5%的聚乙二醇溶液,在转速为1 000 r/min、反应时间为1 h、反应温度为50 ℃时,所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优,其溶液外观性状显示颜色清亮,无沉淀和絮状物;微观形态显示该混合物纳米粒分布均匀,颗粒大小一致;沉降体积比为1,再分散性良好,平均粒径为741.9 nm,Zeta电位为-7.69 mV。替米考星标准品、槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抑菌圈直径分别为2.54、1.51和1.38 cm,对SASCVs菌株的最低抑菌浓度分别为1、1和2 μg/mL;体外杀菌曲线表明,槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株表现出明显的浓度依赖性。【结论】 本研究所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株具有较强杀菌能力,可为治疗由SASCVs菌株引起的奶牛乳腺炎提供基础研究资料。     

Estabishment of Mastitis Model in Mouse by Artificial Infection of Staphylococcus aureus Small Colony Variants

In order to establish the mouse mastitis model induced by Staphylococcus aureus small colony variants (SCVs),40 BALB/c mice 6 to 8 days postpartum were randomly divided into eight groups,negative control group,physiologic saline group and six treated groups with different doses (1.0×10³,1.0×10⁴ and 1.0×10⁵ CFU/mL) of Staphylococcus aureus SCVs or Staphylococcus aureus quality control strains.50 μL physiologic saline and Staphylococcus aureus liquid were injected into the forth mammary glands in physiologic saline group and the six treated groups,respectively.All the mice were sacrificed 24 h after treatment.One side of the forth mammary glands was used to make pathological section,the other side was used to detect the concentration of TNF-α in the supernatant.The results showed that mice had different degrees of clinical symptoms in the treated groups,their mammary glands appeared different degrees of inflammatory symptoms and pathological changes.Under the same injected dose,the Staphylococcus aureus quality control strains group pathologic changed more severe than the Staphylococcus aureus SCVs group.The experimental data had been statistically analyzed by using SPSS software,the result showed that the expression of TNF-α of the Staphylococcus aureus quality control strains group were extremely significantly higher than that of Staphylococcus aureus SCVs group with high dose (P<0.01).The results indicated that Staphylococcus aureus and its SCVs could be used to establish the mice mastitis model,and Staphylococcus aureus SCVs caused relatively minor inflammation than the normal strains.The results provided a new research materials and meaningful exploration to research the prevention and control of chronic mastitis cows and its pathogenic mechanism caused by Staphylococcus aureus SCVs,and laid the foundation for studying the deeper relationship between Staphylococcus aureus SCVs and chronic mastitis.     

兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定及体外抑菌试验

为鉴定外伤感染死亡兔的病原菌,采集病死兔肝、肺、肾等器官进行细菌分离鉴定及体外抑菌试验。结果表明:分离菌靛基质、枸橼酸盐等试验为阴性,凝固酶和过氧化氢酶试验为阳性,分解葡萄糖、麦芽糖等,不能分解淀粉;病菌对青霉素、卡那霉素等高度敏感,对氨卡西林,阿莫西林等耐药;枯草芽孢杆菌和鸡唾液乳酸杆菌对其均有较强的抑制作用。因此,分离菌为免金黄色葡萄球菌,该病是由金黄色葡萄球菌引起的兔葡萄球菌病,防治首选药物为青霉素,枯草芽孢杆菌和鸡唾液乳酸杆菌可减少或部分取代抗生素对该病的防治。     

Study on Infection of Staphylococcus aureus Small Colony Variants on Mammary Epithelial Cells in Vitro

In order to study the situation of S. aureus small colony variants (SASCVs) and the normal strains hitting the mammary epithelial cells of primary culture, we observed and compared the degree of damage to the cellular structure and the effects on mammary epithelial cells. This test was carried out with a strain of SASCV which was separated by Yunnan Agricultural University Animal Medical Experimental Teaching Center Laboratory via infecting mice mammary epithelial cells in vitro. We put the SASCVs and quality control strains ATCC 25923 respectively into the mammary epithelial cells cultivated in vitro in the laboratory, and observed the morphological change of mammary epithelial cell apoptosis induced by quality control strains ATCC 25923 and SASCVs using ordinary light microscope and scanning electron microscope; At the same time, we also observed the mammary gland epithelial cells apoptosis induced by quality control strains ATCC 25923 and SASCVs using flow cytometry (Annexin V-FITC/PI double staining). The results showed that 3 h after quality control strains and small colony mutant strains infecting the mammary epithelial cells, the mammary epithelial cells could be induced to apoptosis. It showed some typical characteristics of apoptosis such as the nucleus shrivelled, chromatin marginalized, mammary gland epithelial cells could be induced apoptosis, expression was shrinking nucleus, chromatin marginalized, the increase of cell intracytoplasmic vacuoles and so on. After testing using the Annexin V-FITC/PI double staining, we found that compared with the control group, the apoptosis rate of infection group was obviously higher, and the apoptosis rate of the positive control group was obviously higher than that of the experimental group. The results showed that in the process of infecting cells, the SASCVs reached a certain number and then stopped; The apoptosis rate of SASCVs was obviously lower than the normal of S.aureus. Therefore, SASCVs could also induce mammary epithelial cells apoptosis. It had the typical morphological characteristics of apoptosis. It provided experimental basis for the prevention and control of SASCVs chronic mastitis cows.     

长毛兔金黄色葡萄球菌的分离鉴定

从内蒙古包头市某养殖场患有肺炎的病兔分离到一株革兰氏阳性球菌,通过形态学观察和生化试验进行了初步鉴定,并通过16S rRNA序列扩增和测序进行分析,BLAST分析结果显示,该菌与金黄色葡萄球菌的核酸序列同源性达99.6%,确定该分离菌株为兔金黄色葡萄球菌,并将其命名为BTSH1。     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

[目的] 了解泰州市某奶牛场乳房炎中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）感染情况及其对常用药物的敏感性。[方法] 试验选用Baird-Parker培养基分离、生化鉴定、PCR检测等方法,对采集的9份奶牛乳房炎奶样进行分离鉴定和药敏试验。[结果] 共分离到6株葡萄球菌,进一步通过凝固酶试验和16S rDNA测序等方法鉴定其中3株为金黄色葡萄球菌。药敏试验结果显示,3株金黄色葡萄球菌对青霉素G均耐药,2株对四环素耐药,2株对红霉素和苯唑西林表现为中介。[结论] 该次分离的金黄色葡萄球菌主要对青霉素G和四环素耐药,对其他常用抗生素表现为敏感。     

生驼乳中金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解生驼乳中金黄色葡萄球菌的污染状况,本文从骆驼养殖户中采集了90 份生驼乳,对其进行金黄色葡萄球菌的增菌、培养和分离,并利用全自动微生物生化鉴定仪进行鉴定,同时对分离出的阳性菌株采用纸片扩散法进行耐药性分析。生化鉴定结果表明,90 份生驼乳样本中分离出8 株金黄色葡萄球菌,分离率8.9%。耐药性分析表明,8 株阳性菌株对青霉素耐药率达75%;对氧氟沙星敏感率最高,可达100%;对头孢哌酮钠、环丙沙星敏感性较高,敏感率可达87.5%;对链霉素、卡那霉素、阿莫西林、头孢唑啉和头孢西丁,四环素、氯霉素、头孢噻肟、林可霉素、苯唑西林、庆大霉素较敏感,敏感率在37.5%~75.0%之间。本研究为对生驼乳中的金黄色葡萄球菌的污染防控提供了参考依据。     

北京地区奶牛隐性乳房炎金黄色葡萄球菌的分离鉴定及药敏试验

为了解北京地区奶牛隐性乳房炎中金黄色葡萄球菌的感染情况及对常用药物的敏感性,用科玛嘉显色培养基和16SrRNA PCR检测方法对5个奶牛场的100份隐性乳房炎奶样进行金黄色葡萄球菌的分离鉴定,采用K-B纸片扩增法进行药敏试验。结果表明,显色培养基分离到24株疑似金黄色葡萄球菌,经16SrRNA PCR鉴定,15株为金黄色葡萄球菌;药敏试验结果显示,15株金黄色葡萄球菌均对β-内酰胺类中的氨苄西林产生普遍耐药性,对克林霉素和环丙沙星的耐药率较高,分别为53.33%和40%;对氧氟沙星、庆大霉素、头孢噻肟和头孢曲松的耐药性较低,耐药率为6.67%。说明15株金黄色葡萄球菌分离株对7类9种抗菌药物都有不同程度的耐药性。