腹泻仔猪肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌的分离鉴定与耐药性研究

为探明仔猪细菌性腹泻肠道致病性大肠埃希氏菌和沙门氏菌流行的血清型、耐药表型及耐药基因型,本试验采集了贵州省5个地（州）市7个规模化养猪场的128份腹泻仔猪肠道样本,并对采集的样本进行了大肠埃希氏菌和沙门氏菌分离与鉴定,通过动物试验鉴定菌株的致病性,利用血清学方法鉴定其血清型,并通过药敏纸片法对主要致病菌进行耐药性研究,采用PCR技术检测各致病菌株耐药相关基因,分析细菌耐药表型和耐药基因型相关性。结果显示,本研究共分离鉴定到78株致病性大肠埃希氏菌与21株沙门氏菌,致病性大肠埃希氏菌血清型以O138、O87为主,沙门氏菌血清型以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌居多;药敏试验结果表明,本试验分离到的78株致病性大肠埃希氏菌对β-内酰胺类药物耐药率达80%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均超过40%,分离鉴定的21株沙门氏菌对氨基糖苷类药物耐药率达50%以上,对其他种类的抗菌药耐药率均达20%以上;本试验分离鉴定的致病性大肠埃希氏菌共检出12种耐药相关基因,沙门氏菌共检出10种耐药相关基因,两种细菌耐药基因型与耐药表型符合率均达60%以上,且均为多重耐药。本研究为仔猪腹泻的综合防控提供了理论依据。     

腹泻仔猪肠道沙门氏菌耐药性研究

为了解贵州省规模化养殖场腹泻仔猪肠道沙门菌耐药表型与耐药基因型相关性,本试验采集了贵州省7个规模化养猪场的腹泻仔猪肠道样本进行沙门菌分离鉴定,并对分离的沙门菌用药敏纸片法进行耐药表型分析,利用PCR方法对分离菌进行耐药基因扩增。结果显示:共分离鉴定沙门菌21株;药敏试验表明所鉴定的沙门菌对抗菌药物的耐药率从高到低依次是卡那霉素、磺胺异口恶唑和诺氟沙星等,且均为多重耐药株,耐药种类达8种以上;耐药基因与耐药表型分析结果显示分离的沙门菌β-内酰胺类耐药基因与耐药表型符合率高达100%,喹诺酮耐药基因与耐药表型符合率为62.5%,氨基糖苷耐药基因符合率为73.3%,磺胺类耐药基因符合率81.8%。研究结果对合理使用药物控制仔猪沙门菌感染提供了理论依据。     

陕西省avian—likeH1N1猪流感病毒的遗传进化分析

为监测陕西省猪流感的流行与传播情况，为猪流感研究提供参考。西北农林科技大学动物医学院任娟娟等从生猪养殖场和屠宰场表观健康猪中随机采取猪鼻／气管拭子样本。经SPF鸡胚分离，对HA阳性样本进行猪流感病毒RT—PCR鉴定。     

西藏部分地区牦牛源肺炎克雷伯菌的分离、鉴定、毒力及耐药基因分析

利用细菌分离纯化、生化鉴定、分子生物学及WHO推荐的K-B纸片法等研究方法,对从西藏不同地区采集的103份牦牛鼻拭子样品进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定,对分离鉴定的疑似菌株进一步进行16S rDNA测序及系统发育分析,荚膜血清学分型、毒力基因和耐药表型及耐药基因检测.结果显示,从西藏林芝市、那曲市分离鉴定出8株牦牛源克雷伯...     

鹅源鼠伤寒沙门菌的分离鉴定及药敏试验

对临床送检疑似鼠伤寒沙门菌感染的病例进行细菌分离,利用沙门菌所具有的种属特异性的亲膜蛋白基因inv A做PCR鉴定,结合生化鉴定和血清型鉴定,并分析分离菌的耐药性。从4例病死鹅病料中共分离到4株细菌,经inv A PCR鉴定、生化特点和血清型鉴定确认为鼠伤寒沙门菌。药敏试验结果显示,4株分离菌对庆大霉素、诺氟沙星、头孢曲松等药物敏感性较强,但对多黏菌素B、多西环素耐药。其中,有2个分离株表现出多重耐药性。     

生鲜牛乳中病原菌的分离鉴定与药物敏感性分析

为了检测生鲜牛乳中病原菌种类及其对药物的敏感程度,从郑州市附近奶牛场采集5个生鲜牛乳样本,通过细菌形态、培养特性、生化试验进行鉴定,采用微量液体二倍稀释法测定了24种临床常用抗菌药物对临床分离菌的抗菌活性。结果表明:5个牛奶样本分离出了赫尔曼埃希菌、铜绿假单胞菌、耶尔森菌及屎肠球菌,这些细菌仅对氟喹诺酮类(盐酸环丙沙星和恩诺沙星)、氯霉素类(氯霉素和氟苯尼考)敏感,盐酸环丙沙星的最小抑菌浓度(MIC值)低至0.5μg/m L。说明这些分离菌交叉耐药和多重耐药情况较严重,不仅对β-内酰胺类药物存在耐药性,而且对其他抗菌药物(如氨基糖苷类、四环素类、大环内酯类)存在多重耐药的情况。     

四川省凉山州健康奶牛粪便源细菌的分离及耐药性检测

为调查四川省凉山州健康奶牛肠道不同细菌的耐药情况,课题组成员从2013年起采集不同奶牛场健康奶牛粪便样本,按细菌常规分离、鉴定方法对粪便样本中的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和肠球菌进行了分离、纯化及鉴定,采用纸片扩散法测定各分离菌对不同抗菌药物的敏感性。结果表明:从198份粪便样本中共获得294株菌株,其中大肠杆菌138株、金黄色葡萄球菌51株、肠球菌105株;分离菌株中大肠杆菌、肠球菌对多数抗菌药物呈低水平耐药(耐药率低于30%);金黄色葡萄球菌则表现出较高的耐药性。说明凉山州健康奶牛胃肠道主要的共生菌(大肠杆菌、肠球菌)耐药情况不严重,但金黄色葡萄球菌的耐药状况比较严重,应加强对金黄色葡萄球菌耐药性监测,奶牛养殖业应谨慎使用抗菌药物。     

致犊牛出血性腹泻病原的分离与鉴定

为查明山东某肉牛养殖场犊牛出血性腹泻的病因,采集患病牛粪便,进行细菌分离培养、革兰染色镜检、生化鉴定和16SrRNA测序分析,接种MDBK细胞分离病毒,运用RT-PCR方法检测分离的病毒,并进行测序分析。结果表明,分离的细菌为大肠埃希菌,血清型鉴定为O8型,且该菌耐药性严重。分离到的病毒为基因2型牛病毒性腹泻病毒。初步判定该病是由致病性大肠埃希菌O8和基因2型牛病毒性腹泻病毒混合感染引起。     

临床病死犬细菌分离鉴定及耐药性分析

为更全面地掌握犬源细菌的流行及抗生素耐药情况,本试验对2012-2015年采集自某规模化养殖场的60余份病死犬样本进行细菌分离鉴定,并参考CLSI推荐的纸片扩散法检测了部分分离菌对21种抗菌药物的敏感性。结果显示,3年共计分离鉴定出28株病原菌和条件致病菌,混合感染为犬细菌感染的主要形式;分离菌普遍呈多重耐药,以大肠杆菌耐药性最为严重。犬的细菌感染应在临床引起足够的重视,临床治疗应合理有效用药。     

一株马源宋内志贺菌的分离鉴定与耐药性分析

为鉴定马粪便中分离到的1株细菌种类,笔者结合形态学观察与序列分析鉴定细菌,采用PCR法检测分离其耐药基因,并使用药敏试验对分离菌进行耐药性分析。结果显示,分离菌株在MAC琼脂培养基和SS琼脂培养基上均呈半透明、光滑、边缘整齐的圆形小菌落,镜检可见分离菌呈两端钝圆的革兰阴性短菌;基于16S rDNA基因位点,分离菌的序列经比对后,与英国人源宋内志贺菌的序列同源性为100%,结合形态学观察结果,鉴定为宋内志贺菌;采用PCR法检测10种耐药基因,发现分离菌株携带4种耐药基因,分别为parC、gyrA、gyrB和blaCTX;采用9种药物对分离菌株进行药敏试验,发现分离菌株对氨苄西林、红霉素、庆大霉素、四环素等药物耐药,呈现多重耐药性;对头孢西丁、阿米卡星敏感。研究结果为志贺菌病的防治提供了基础参考。     

貂源肺炎克雷伯氏菌的分离与鉴定

2013~2016年山东省、河北省、黑龙江省、吉林省的部分水貂养殖场发生了严重的出血性肺炎,导致水貂大量死亡,为了客观评估水貂出血性肺炎的危害及为综合防控提供参考依据,试验对423个水貂病例样本进行分离鉴定并且对所分离的细菌进行了形态特征观察、16SrRNA基因测序、血清型鉴定、小鼠毒力试验测定、生化试验鉴定及药敏试验测定。结果表明:423个样本中分离到68株肺炎克雷伯氏菌,其中最为流行的血清型为K2型(35株);并筛选出4株菌株对小鼠有很强毒力性;生化试验结果表明同一血清型的不同菌株之间也存在明显差异;药敏试验结果表明,4株K2型肺炎克雷伯氏菌强毒菌株对氧氟沙星、阿米卡星2种抗生素均为敏感或介于中间;对强力霉素、环丙沙星等8种抗生素均耐药;对诺氟沙星、庆大霉素等4种抗生素均为耐药或介于中间。     

一株鸡源性肠球菌的鉴定及耐药机制分析

本试验旨在鉴定一株从肉鸡体内分离的广谱耐药菌,并从分子生物学角度对该株细菌的耐药机理进行探讨。根据《常见细菌系统鉴定手册》标准对该菌进行培养特性、生化试验鉴定,设计1对16S rDNA通用引物扩增其16S rDNA并测序鉴定;根据该菌的药物敏感性试验结果设计了12对引物扩增其基因组上耐药基因。细菌培养特性和生化试验结果显示该菌为一株肠球菌,PCR扩增出大小为1465 bp的目的片段,药敏试验显示该株细菌耐受多种抗生素,PCR扩增其耐药基因发现存在ant(6)-iv、OXA-10、tetM、CTX-M-1、TEM基因。最终鉴定该株细菌为一株肠球菌,耐药基因的存在是其产生耐药性的原因之一。     

恒河猴源大肠杆菌的分离鉴定及耐药性和致病性

为了查明引起海口市某进境实验动物隔离场3例恒河猴死亡的原因，本试验分别采集3只恒河猴的心脏、肝脏、脾脏、肺脏和淋巴结样本，进行细菌分离，通过细菌形态特征、显微镜镜检、生化鉴定、16S核糖体RNA(16S rRNA)序列分析对分离菌进行病原学鉴定；采用纸片扩散法(K-B法)测定分离菌的耐药表型；采用玻片凝集法测定分离菌的血清型；采用动物回归试验分析分离菌的致病性。结果显示，从3只恒河猴上各分离鉴定出1株大肠杆菌，命名为H01株(分离自脾脏)、H02株(分离自淋巴结)和H03株(分离自肝脏);3株大肠杆菌对12种常用抗菌药物产生不同程度耐药，并且都呈现多重耐药，其中对阿莫西林、庆大霉素、氯霉素、氟苯尼考和复方新诺明表现为耐药，仅对阿莫西林-克拉维酸钾、阿米卡星和多黏菌素B表现敏感；玻片凝集试验显示，H01株的血清型为O8,H02株的血清型为O3,H03株的血清型为O9;动物回归试验显示，3株分离菌都是强毒株。本试验为实验动物恒河猴源大肠杆菌病的防治提供参考依据。     

1株大鲵源葡萄牙柠檬酸杆菌的全基因组测定及毒力基因和耐药基因的分析

葡萄牙柠檬酸杆菌是一种新发现的条件性致病菌,为明确重庆地区大鲵源多重耐药葡萄牙柠檬酸杆菌的基因组及其耐药特征,本试验对患病大鲵分离菌进行鉴定、药敏试验、全基因组测序及毒力、耐药基因的分析。分离菌首先通过16S rDNA进行初步鉴定,腹腔注射健康小鼠观察其致病性;利用Kirby-Bauer(K-B)纸片法进行9类共35种抗生素的敏感性试验;再利用二代测序技术进行全基因组测序,通过生物软件和数据库对分离菌的毒力基因和耐药基因进行分析。结果显示,分离菌鉴定为葡萄牙柠檬酸杆菌,将其命名为CQ-CP1,该菌对小鼠具有较强的致病性。药敏试验显示CQ-CP1对多种抗生素不敏感,为多重耐药菌株。全基因组测序该菌株共有5 006 960 bp, G+C含量为51.8%,共编码有4 722个结构蛋白,基因组信息在GenBank中的登录号为RZIH00000000.1。病原毒力因子数据库(VFDB)比对发现CQ-CP1中共有49个与毒力相关的基因,与细菌的运动、黏附、转录等相关;耐药基因数据库比对结果显示,该菌携带6个耐药基因(ARG),分别是氨基糖苷类aadA1,喹诺酮类qnrS1、qnrB32,β内酰胺...     

一株鹅源鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定

为对河北省张家口赤城县某肉鹅养殖场的雏鹅死亡病原进行检测,剖检雏鹅进行初步诊断后采用常规方法分离细菌病原,并对分离菌进行鉴定试验以及药物敏感性试验.结果 表明,分离菌经鉴定为鸭疫里默氏杆菌,对雏鹅具有较强致病性,分离菌对庆大霉素、卡那霉素和大观霉素等8种抗生素表现耐药,仅对阿莫西林表现敏感.     

重庆某牛场乳房炎病原菌分离鉴定及药物敏感试验

对重庆某牛场患乳房炎奶牛的乳汁进行细菌分离鉴定,共分离出8种11株细菌。将11株分离细菌经人工感染小鼠,结果显示嗜水气单胞菌、微球菌、表皮葡萄球菌,鲍曼不动杆菌和枯草杆菌5种菌有致病性。表明主要致病菌对链霉素等药物敏感,但嗜水气单胞菌对氨苄青霉素、头孢噻吩耐药,枯草杆菌对氨苄青霉素、头孢噻吩、阿莫西林和磺胺耐药。     

某父母代肉种鸡群泄殖腔拭子与环境样本中细菌分离鉴定及耐药性分析

为了解山东某规模化父母代肉种鸡场中鸡群及鸡舍环境中细菌的种类和流行情况,采用细菌分离培养与微生物质谱鉴定对56份鸡只泄殖腔拭子及15份环境样品进行细菌分离鉴定,同时对10份泄殖腔拭子的增菌液进行耐药表型分析,通过血清分型方法进一步明确分离到的大肠杆菌血清型。结果显示,从71份样品中共分离鉴定到10种共85株细菌,主要优势菌为大肠杆菌（49/85,57.65%）,49株大肠杆菌中有5株进一步鉴定为肠道致病性大肠杆菌,其余44株为非肠道致病性大肠杆菌。发现10份鸡只泄殖腔拭子的增菌液对11中常用抗菌药物呈现不同程度的耐药情况,其中对复方新诺明、四环素、氨苄西林等5类抗菌药物均高度耐药（10/10,100%）,对加替沙星、头孢西丁、氧氟沙星、阿莫西林和链霉素的耐药性在50%～90%。结果显示,该规模化肉鸡养殖场中鸡群和环境存在细菌种类具有多样性,这可能是导致鸡群耐药情况严重的原因之一,本研究证实,泄殖腔拭子及环境样本可用于评估养殖场是否合理用药,对鸡群健康养殖及细菌病综合防治具有重要意义。     

贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解贵阳市散养奶牛牛奶中沙门氏菌的污染及耐药情况,采集散养奶牛牛奶样本26份,运用细菌分离培养技术对样本进行细菌分离;PCR鉴定后测序;细菌药敏试验。结果:共分离鉴定沙门氏菌3株,分离率为11.5%(3/26);3株沙门氏菌对庆大霉素(GEN)、卡那霉素(KAN)、阿莫西林(AMC)等耐药,对四环素(TET)、环丙沙星(CIP)、恩诺沙星(ENR)等较为敏感。     

西班牙养猪密集地区同时流行A型流感病毒H1N2、H1N1和H3N2亚型的证据

本文报道了对西班牙养猪密集地区进行的猪流感病毒(SIV)血清学和病毒学调查结果,其目的是检测H1N2亚型猪流感病毒是否和在欧洲其它地区一样也流行于这些地区。在西班牙北部和东部地区100个未接种猪流感疫苗的繁育群采集了600份母猪血清,以进行抗H1N1、H3N2和H1N2亚型病毒的血凝抑制试验(HI);再借助鸡胚病毒分离法和商品薄膜免疫分析法,对采自有呼吸道疾患的225份病猪肺样本进行检测以确定是否存在猪流感病毒。通过HI和逆转录酶-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,再辅以cDNA部分序列的测定,对分离毒株进行鉴定。对血清所作的HI试验表明,在83%受测猪群和76·3%受测猪中至少存在抗一种猪流感病毒亚型的抗体。在受检的600份母猪血清中,仅含抗H1N2、H3N2或H1N1亚型病毒抗体的样本数分别为109份(占总样本比例的18·2%)、60份(10%)和41(6·8%)。从有呼吸道疾患的猪肺样本中分离到12株H3N2亚型病毒、9株H1N1亚型病毒和1株H1N2病毒。对H1N2亚型分离株的神经氨酸酶基因436个核苷酸序列进行的分析,进一步证实了其身份。显然,猪流感依然流行于所研究猪群中,同时一种新的亚型病毒(即H1N2亚型病毒)可能正在开始流行,并且也在西班牙引起了临床发病。     

5株中间型葡萄球菌的鉴定及耐药性分析

为了对临床上分离的5株葡萄球菌进行鉴定及耐药性研究,将分离的细菌用血浆凝固酶检验、进行生化试验和纸片扩散法药敏试验。结果 5株细菌均为中间型葡萄球菌,凝固酶试验阳性,可以还原硝酸盐、可利用果糖等,不能利用甘露醇、木糖;分离菌对多黏菌素、万古霉素、新霉素、新生霉素等药物的敏感性较高,而对洁霉素和萘啶酸耐药。结果表明:分离的细菌总体耐药率并不高,临床上应注意中间型葡萄球菌的用药量,避免造成严重的耐药现象。