山羊精液保存与人工授精

正精液保存与人工授精技术最大限度地提高了优秀种公畜的利用率,加速了品种改良。精液保存技术分为常温保存、低温保存和冷冻保存三种类型。常温保存因保存时间很短,在生产上意义不大,研究较少。目前对山羊精液保存技术的研究主要集中于低温保存(冷藏)和冷冻保存。精子代谢速率决定了精液低温保存时间,暂时抑制精子的代谢活动,可在不丧失受精能力的前提下延长精子的存活时间。抑制精子代谢率的方法主要有降低环境温度、降低稀释液p H及提高稀释液     

猪精液体外低温保存技术新进展

伴随猪联合育种的开展及人工输精技术的推广运用,猪精液低温保存技术已成为研究的热点。精液低温保存是通过降低或抑制精子新陈代谢、维持精子质膜及顶体结构完整性,延长精子体外存活时间。主要包括:液氮超低温(-196?℃)冷冻保存、4~5?℃低温"冷休克"保存以及15~17?℃鲜精体外保存。早期研究主要集中在低温保护剂和技术方法的筛选与优化,对猪精液低温保存进行了深入探索。近年来,有关猪精液低温保存过程中抑制猪精子低温损伤、延长精子的存活寿命及提高精子的受精能力等研究取得突破性进展。该文就近年来不同保存技术、保护剂及未来重点解决的问题进行简要概述,旨在为开展相关研究以及实际生产应用提供理论参考。     

保存温度和不同种类稀释液对猪精液品质的影响

猪精液在室温保存时,含庆大霉素的稀释液保存效果优于含青、链霉素的稀释液,两种稀释液在保存72h时,精子活率、顶体完整率、GOT和LDH活性以及存活指数差异极显著(P<0.01).低温保存时,含蜂蜜和卵黄的稀释液对防精子冷刺激、维持精子活率的效果比含葡萄糖、奶粉的稀释液理想.在冷冻保存条件下,以含2%甘油的稀释液保存效果最佳.液态保存(室温、低温)的猪精液,LDH活性随精子活率下降而下降;pH值则都呈先上升后下降的变化趋势.室温保存主要是引起精子顶体脊膨大和保存后期的顶体前端膨大;低温保存主要引起顶体前部膨大和保存后期的少数顶体脱落;冷冻保存主要是造成顶体的膨大程度加大和顶体脱落.3种保存条件都造成精子线粒体透性增强.液态保存和冷冻保存精液的精清GOT活性与顶体完整率无显著相关性(P>0.05).     

干冰用于鸡超低温冷冻精液短期保存和运输的可靠性评估

为解决液氮保存下鸡冷冻精液的异地运输难题,研究对北京油鸡冷冻精液在干冰（-79℃）中进行短期保存,分别保存0 h（对照组）、12 h、24 h、48 h和72 h,以模拟冷冻精液在干冰中的短期运输,并测定干冰不同保存时间的鸡冷冻精液精子质量和受精能力。结果显示：干冰保存后北京油鸡冷冻精液的精子活力、存活率、顶体完整率、质膜完整率和受精率均显著降低（P<0.05）,精子畸形率显著增高（P<0.05）,且随着干冰保存时间的增加,精子质量和受精能力逐渐下降。研究表明,干冰作为冷源对鸡冷冻精液的精子质量有较大的损害作用,使用干冰难以实现对鸡冷冻精液的有效短期保存和运输。     

蓝狐精子常温保存与低温保存的比较研究

为探讨行之有效的精液保存方法,提高狐人工授精技术的效率,对9只种公蓝狐的精液进行了常温保存与低温保存试验。结果表明,常温保存精液精子平均存活时间为26.2 h,平均生存指数为12.75;低温保存精液精子平均存活时间为40 h,平均生存指数为17.92。低温保存可以延长精子的体外存活时间。数据分析结果表明,低温保存生存指数与常温保存生存指数的比值与常温保存生存指数呈线性关系,即低温保存效果与精液品质呈正相关,精液品质越高,低温保存效果越好。     

褪黑素对羊精液低温保存效果的影响

为研究精液低温保存稀释液中添加不同浓度褪黑素对羊精液低温保存效果的影响,本试验将不同浓度褪黑素(0、10、20、40、80mg/L)添加到羊精液低温保存稀释液中,通过分析5d内各组之间的精子活率、顶体完整性、质膜完整性、线粒体活性等精子质量评定指标的差异。结果表明:经过5d的保存,20mg/L试验组对山羊精液的精子活率、顶体完整率、质膜完整率以及线粒体活性均显著高于其他试验组(P0.05)。说明适度浓度(20mg/L)的褪黑素有利于提高精子保存品质;但随着添加褪黑素浓度的升高(至80mg/L),精子低温保存效果下降明显。     

低温保存对绵羊精子运动参数与线粒体活性和抗氧化水平的影响

低温造成的氧化损伤是精液品质下降的主要原因。本试验旨在研究4℃低温保存对绵羊精子运动参数、线粒体活性和抗氧化水平的影响。采集3只杜泊公羊的精液,使用常规卵黄稀释液进行8倍稀释后放入4℃冰箱保存,分别在0 h、24 h、48 h和72 h后检测精子运动参数和抗氧化水平。结果表明,随着保存时间的延长,精子活率和运动参数逐渐下降,但72 h后精子活力仍保持在50%左右,活率高于70%;GSH-Px酶活性和T-AOC逐渐降低,MDA逐渐升高,72 h后精子线粒体活性显著低于0 h,但与48 h相比差异不显著。研究表明,精液在低温保存72 h后,其质量、抗氧化水平和线粒体活性均会显著下降,可以考虑在这个时间段加入线粒体靶向抗氧化剂,以延长精子的保存时间,减缓精液品质下降程度。     

水蛭素对猪精液低温保存的影响

为了改善猪精液低温保存方法,通过在改进的猪精液低温稀释液中添加不同浓度(0,0.50,1.00,1.50,2.00 mg/mL)的水蛭素,研究在4℃低温保存条件下其对猪精液品质的影响。试验采用PI荧光染色检测精子活率,利用计算机辅助精液分析仪(CASA)检测精子活力,Diff-Quik染色检测精子畸形率,考马斯亮蓝染色检测精子顶体完整率及采用低渗肿胀法(HOST)检测质膜完整率。猪精液保存7 d,每天检测上述指标,试验重复5次。结果表明:稀释液中添加一定浓度的水蛭素在一定时间内有利于维持精子的活率、活力,降低精子的畸形率,提高精子的顶体完整率和质膜完整率,并且水蛭素浓度越高,保存效果越好。因此,在本试验条件下,2.00 mg/mL是水蛭素在猪精液低温保存时的最佳添加浓度。     

稀释液冻干粉剂低温超长时间保存绵羊精液效果

为研究经过冷冻干燥处理的粉剂稀释液与原稀释液对绵羊精液保存的效果,采集6只盘羊与巴什拜羊杂交公羊的精液,分别用粉剂稀释液(A组)和原稀释液(B组)稀释降温后的冰水混合物长期保存,在第0、1、3、6、9和12天分别对精子活率和顶体完整率进行检测,并统计低温保存第9天的精液进行人工授精的受胎率。结果表明:粉剂稀释液与原稀释液低温长时间保存绵羊精子,在保存第9天的精子活率均能达到0.5,顶体完整率均高于65%,粉剂稀释液与原稀释液对精子活率和顶体完整率的保护能力无明显差异(P0.05);粉剂稀释液与原稀释液在低温保存第9天后进行人工授精,受胎率分别为66.9%和67.8%,两者受胎率差异不显著(P0.05)。说明稀释液冻干粉剂与液体稀释液低温保存绵羊精子具有相同效果。     

犬精液低温保存稀释液的研究

试验对苏联红犬精液的低温保存稀释液进行了研究。结果表明,犬精液低温保存的稀释液以Tris-葡萄糖稀释液(Tris3.04%,柠檬酸1.7%,葡萄糖1.25%,卵黄20%)为最佳,在4℃保存3 d后,犬精液的精子活率仍可达0.662 5±0.058 2,精子活率>0.1的存活达5.750 0 d±0.462 9 d。在Tris-葡萄糖稀释液中加入0.5%的甘氨酸或1%的牛血清白蛋白并不能明显提高犬精子的低温保存效果,反而添加BSA后,精子活率在0.1以上的存活时间出现明显缩短(P<0.01)。     

葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的影响

为提高精液低温保存质量,在山羊精液低温保存基础稀释液中分别添加浓度为0、10、30、50、70 mg/L葡萄籽原花青素,检测精液保存过程中各组之间的精子活率、顶体完整性、质膜完整性、线粒体活性、T-AOC、MDA等精子质量评定指标,探讨葡萄籽原花青素对山羊精液低温保存效果的影响及最适添加浓度。结果表明:一定浓度葡萄籽原花青素可提高精液保存质量,且最适添加浓度30 mg/L。在30 mg/L处理组中,精液各项指标(MDA除外)在保存期间均最高,且5 d时精子活率、顶体完整率.、线粒体活性、T-AOC显著高于其他组(P0.05),其精子活率为51.46%,顶体完整率为67.55%,质膜完整率为50.97%,线粒体活性为50.78%。     

EGTA对猪精液液态保存的影响

猪精液液态保存体系中,钙离子浓度升高将降低精子活力,缩短精子体外保存时间。常用的金属螯合剂EDTA的溶解度较低,且容易发生沉淀,因此改进螯合剂对于改进猪精液保存液配方,提高猪精液液态保存质量十分重要。本研究中我们在精液液态保存液中分别添加不同浓度(1.5,3,6,12 mmol/L)的钙离子螯合剂EGTA,检测其对猪精子的活力、质膜完整性、顶体完整率、获能情况以及受精能力的影响。结果表明,精液保存液中添加EGTA能显著提高猪精子保存质量,其中添加3 mmol/L EGTA效果最好(P<0.05)。与对照组相比,添加3 mmol/L EGTA时,体外受精率和囊胚率显著提高(P<0.05)。因此,精液保存液中添加EGTA有助于提高猪精液液态保存的质量。     

家畜精液保存技术的研究

简要综述哺乳动物精液新鲜保存和低温保存技术的发展。精液保存技术始于本世纪初的精液低温保存试验,以后的重要发展是基于发现甘油的低温保护作用,而建立的冷冻保存技术。以牛、猪、兔精子为主,讨论精子代谢、膜功能和细胞结构特性与保存效果间的关系。     

家蚕生殖细胞冷冻保存及精液冷冻生存评价

家蚕人工授精已是较为成熟的技术,而家蚕生殖细胞的冷冻保存在特定基因的长期保存等方面具有重要意义.目前评价精子冷存效果的标准主要是依据精子的数量、密度、活动能力、畸形率、顶体完整率等,但这些指标并不能准确反映精子的受精能力.而精液当中各种酶活力的变化确切反映了精子的受精能力,因而精子酶学研究在评定冷冻精液品质、顶体完整率以及受精过程中的调控等方面具有很好的应用前景.     

添加低剂量大豆卵磷脂稀释液低温保存绵羊精液的优化研究

本实验旨在探讨添加低剂量大豆卵磷脂稀释液对绵羊精液低温保存效果。实验一采用6个浓度(0%、0.25%、0.5%、0.75%、1.0%、1.25%)大豆卵磷脂替代TRIS专利稀释液中卵黄低温保存绵羊精液,在第0、1、4、7、10、12、18天检测精子活率、顶体完整率;实验二选用实验一中最优添加组(0.5%组)和TRIS专利稀释液制成粉剂低温保存绵羊精液,在保存第0、1、4、7、10、12天对精子活率和顶体完整率进行测定,并在保存第10天对绵羊进行人工授精。结果表明:实验一中,0%组从第1天精子活率低于其他组(P<0.05),0.25%组精子活率观测值从第10天开始低于0.25%以上浓度组(P<0.05),0.5%、0.75%、1.0%、1.25%组保存第10天精子活率均大于50%,0.5%组保存第18天精子活率高于1.0%、1.25%组(P<0.05);各组顶体完整率缓慢下降,各时间点均无显著性差异;实验二中,0.5%组与TRIS组在各时间点的精子活率、顶体完整率与受胎率均无显著性差异,保存第10天精子活率均高于50%;0.5%组受胎率为65.49%,略低于TRIS组67.65%(P>0.05)。本实验条件下,绵羊精液低温保存稀释液中添加0.5%大豆卵磷脂替代卵黄效果最佳。     

不同稀释液对蓝狐精子低温保存的影响

为探讨行之有效的精液保存方法,提高狐人工授精技术的效率,用4种稀释液对4只公蓝狐精液进行体外低温保存,采用伊红-苯胺黑法检测精子活率,低渗肿胀法检测精子质膜的完整性,考马斯亮蓝染色法检测精子的顶体状态。结果表明:低温保存时精子的活率、质膜的完整性、顶体的完整性明显比常温保存时比率高;氨基乙酸稀释液对精子的保存效果优于其他3种稀释液,精子活率为(63.62±2.47)%,质膜完整性为(57.00±3.17)%,顶体完整性为(65.30±2.48)%。     

不同保存方法对火鸡精子超微结构和受精率的影响

本文研究了3种稀释液在0～5℃下保存火鸡精液48 h后对精子超微结构和受精率的影响以及用稀释液Ⅰ稀释的火鸡精液在-196℃下保存5周对精子超微结构与活率的影响.结果,在0～(?)℃下保存48 h的稀释精液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的活率分别为55％,50％,35％;冷冻精液及原精的活率分别为45％,85％;以上各精液的顶体完整率分别为59.2％,51.85％,37.50％,36.84％,73.08％;稀释精液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及原精输精后的受精率分别为52.4％,45.3％,20.4％,71.7％.火鸡精液在低温保存及冷冻处理过程中,精子的超微结构都遭受不同程度的损伤, 但以冷冻对精子的损害最严重.     

N-乙酰半胱氨酸对绵羊精液低温保存效果的影响

为研究精液稀释液中不同浓度N-乙酰半胱氨酸(NAC)对绵羊精液低温保存效果的影响,试验用含有不同浓度(0,0.5,1.0,1.5,2.0 mmol/L)NAC的绵羊精液稀释液在4℃条件下保存绵羊精液,并对精子活率、有效存活时间以及48小时的精子畸形率和顶体完整率进行了检测。结果表明:在稀释液中添加1.0 mmol/L的NAC能显著提高精子有效存活时间、总存活时间和48小时精子的顶体完整率(P0.05)。说明添加1.0 mmol/L NAC的精液稀释液能显著改善绵羊精液的低温保存效果。     

还原型谷胱甘肽对西门塔尔牛精液低温保存效果的影响

本实验旨在探究还原型谷胱甘肽（GSH）对西门塔尔牛精液低温保存（0℃）的影响。在精液稀释液中分别添加0（对照组）、1、2、4、6 mmol/L的GSH,在0℃条件下保存24、72、120、168、216 h时检测精子活力、顶体完整率和质膜完整性等指标;保存72 h和168 h时检测精子的丙二醛（MDA）水平、三磷酸腺苷（ATP）含量、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和过氧化氢酶（CAT）活性。结果表明：在精液低温保存72 h时,4 mmol/L GSH添加组的精子活力、顶体完整率、质膜完整性、CAT活性、ATP含量和GSH-Px活性高于对照组（P<0.05）;在精液低温保存168 h时,4 mmol/L GSH添加组的精子活力、顶体完整率、质膜完整性、CAT活性、ATP含量和GSH-Px活性高于对照组与其他GSH添加组（P<0.05）,MDA水平低于其他组（P<0.05）。因此,在本实验条件下,在精液稀释液中添加4 mmol/L GSH可以有效提高精液品质和精子的抗氧化能力,延长精子的保存时间。     

羧甲基纤维素钠对4℃保存藏猪精液指标的影响

试验旨在研究羧甲基纤维素钠(CMC)对藏猪精液4℃保存效果的影响,采用电刺激法采集健康藏猪精液,在改进的猪精液低温稀释液为基础液中,添加不同浓度的CMC(0、6、12、18和24μmol/L),将藏猪种公猪新鲜精液稀释后于4℃环境保存至第5天,以藏猪精子活力、精子畸形率和精子顶体完整率为评价精液品质指标,探讨CMC对藏猪精液4℃保存效果的影响。结果显示:12μmol/L CMC添加组藏猪精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率均极显著好于其他试验组(P0.01)。总之,在改进的猪精液稀释液中添加CMC 12μmol/L可明显改善4℃环境保存藏猪精液品质,该试验研究为今后藏猪精液低温保存的生产应用奠定了基础。