养殖鲤和锦鲤中的鲤浮肿病毒检测与分析

鲤浮肿病毒（carp edema virus,CEV）是一种严重危害养殖鲤和锦鲤的病毒。2014年在北京地区确诊的首例鲤浮肿病意味着该病已进入中国。为调查CEV在养殖鲤、锦鲤中的流行现状,同时筛选适宜的CEV普查方法,探索其发病条件,试验于2016年5月至2016年9月共采集13个样品,采用日本学者建立的Nest-PCR法及英国学者研究的Nest-PCR法、Real-time PCR法进行CEV检测。结果发现,13个样品中共检测到5个CEV阳性,3个为锦鲤样品,2个为普通鲤或杂交鲤样品。Real-time PCR法检出所有阳性,日本的Nest-PCR法检出3个锦鲤阳性和1个普通鲤阳性,英国的Nest-PCR法仅检出3个锦鲤阳性。在阳性样品中,3号和10号样品的养殖鱼并未发病死亡,且3号样品鱼体内的病毒拷贝数高于有临床症状并出现死亡的7号、8号和13号样品。说明目前养殖鲤、锦鲤的CEV阳性率较高,亟需加强该病毒的监测、防控。英国学者建立的Real-time PCR法不会漏检,更适合用于中国CEV的监测普查。没有外界环境条件刺激,养殖鱼即使感染CEV或CEV在其体内增殖,也不一定发生鲤浮肿病。结合鲤浮肿病发病温度范围较宽,提示环境条件刺激才是导致该病发生的关键因素,避免环境刺激是降低该病发生的一个有效措施。     

养殖锦鲤鲤鱼浮肿病的检测与鉴定

北京房山某锦鲤养殖场锦鲤发生大量死亡,患病锦鲤呈烂鳃、肾脏糜烂、身体浮肿;症状类似锦鲤疱疹病毒（koi herpes virus,KHV）感染,但经PCR检测排除了KHV感染。为进一步确定病原,对发病鱼进行了临床症状观察、病毒分离、细菌分离培养、病鱼组织超薄切片电镜观察和PCR扩增等检测。通过病鱼组织超薄切片电镜观察,在肾脏内可见200 nm×400 nm的痘病毒样颗粒。抽提病毒核酸后,用已知的鲤鱼浮肿病毒（carp edema virus,CEV）的保守序列设计2对引物进行PCR扩增,扩增出548和180 bp片段,测序结果和GenBank公布的CEV H504株序列完全一致。根据发病鱼临床症状和实验室检测结果,最终确定该病为CEV引起的鲤鱼浮肿病。这是在中国首次发现的鲤鱼浮肿病。     

鲤浮肿病毒传入风险分析

为评估鲤浮肿病毒(CEV)跨境传播风险,提出科学可行的防控措施,基于病原学和流行病学特征,对CEV进入我国的可能因素进行了风险分析。分析认为,CEV的传入威胁主要来自疫区的活养殖鲤、锦鲤,以及金鱼等其它活敏感鱼类,其次是用于食用的活敏感鱼类,以及冰冻、冰鲜的敏感鱼类。因此,根据进口对象,制定不同的风险管理方案并采取相应的检疫措施,对有效控制CEV传入我国具有重要意义。     

鲤浮肿病毒环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立及应用

为了给鲤浮肿病(carp edema virus disease,CEVD)的防控提供特异、灵敏、快速的检测方法,针对鲤浮肿病毒(carp edema virus,CEV)的P4a基因序列设计5条特异性引物,建立CEV的环介导等温扩增检测方法(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)。结果表明该方法具有很高的特异性。最低可检出6 000拷贝/μL,检测灵敏度与Real-time PCR方法相当。对30个鲤及锦鲤养殖场样品进行检测并与Real-time PCR方法进行比较,该方法的检测结果符合率达到96.7%以上。本方法的建立及应用为CEVD的防控提供依据。     

Detection and Analysis of Carp Edema Virus (CEV) in Farmed Carp and Koi

The carp edema virus (CEV) disease were caused by CEV, which may result in high losses in carp culture. In 2014, it had spread into China according to the report of the first CEV case confirmed in Beijing region. To investigate the epidemic status of CEV in farmed carps, select suitable method for CEV survey, and explore its pathogenic mechanism, from May to September in 2016, 13 samples were collected and detected CEV using Nest-PCR methods developed by Japanese researchers, and Nest-PCR methods and Real-time PCR method developed by UK researchers. The results showed that 3 koi samples and 2 common carp samples of CEV positive were found. Real-time PCR and Nest-PCR could be well used to detect CEV in koi samples, but Nest-PCR could not detect CEV well in common carp. In positive samples, there were no clinical signs and death in case 3 and case 10 of farmed fish, and case 3 harboured higher copy numbers of CEV-specific DNA than that of case 7, case 8 and case 13 with signs of disease. Based on the above information, surveillance programs need to carry out urgently to avoid further spread of CEV according to the epidemic status of CEV. And Real-time PCR method was more suitable for CEV survey than Nest-PCR method. In addition, the farmed carps did not always occurred CEV disease in optimum temperature when the farmed fish carried CEV or the CEV mass reproduction in fish body. Therefore, the environmental stress was the crucial factor leading to the occurrence of the CEV disease, avoiding environmental stress was an effective measure to reduce the occurrence of the CEV disease.     

鲤浮肿病毒荧光RAA快速检测方法的建立

为建立一种简单、快速的鲤浮肿病毒(CEV)重组酶介导的链替换扩增(RAA)检测方法,本研究通过比较分析CEVP4a基因序列,设计引物与探针,经过筛选优化,建立了实时荧光RAA检测方法。结果显示,该方法在39℃恒温反应20min即可快速、特异性地检测出CEV,与常见的鱼类病毒不发生交叉反应,其对质粒标准品的检测下限为2.8×10^1拷贝/μL,组内和组间变异系数均小于5%。利用本研究建立的方法对35份临床鲤科鱼类样品进行检测,检测结果与荧光定量PCR方法结果一致。本研究建立的检测方法操作简单,特异性强、敏感性高,结果可靠,不依赖于复杂的仪器,适用于现场对CEV的快速检测。     

沙门氏菌病的防控

沙门氏菌病是由沙门氏菌属细菌引起的疾病的总称,是重要的人畜共患病.该病普遍发生于世界各地,给牲畜的繁殖和幼畜的健康带来严重威胁.对沙门氏菌病的病原、流行病学特点、临诊症状、病理变化、诊断及防控措施作一介绍,以期为有效防控该病提供参考.     

沙门氏菌病的防控

沙门氏菌病是由沙门氏菌属细菌引起的疾病的总称,是重要的人畜共患病。该病普遍发生于世界各地,给牲畜的繁殖和幼畜的健康带来严重威胁。对沙门氏菌病的病原、流行病学特点、临诊症状、病理变化、诊断及防控措施作一介绍,以期为有效防控该病提供参考。     

鲤浮肿病毒RAA-LFD检测方法的建立

为建立一种简便、快捷的现地检测鲤浮肿病毒(CEV)的方法,本研究联合重组酶介导扩增(RAA)和侧向流试纸条(LFD)技术,在优选的RAA下游引物和探针的5’端分别进行Biotin和FAM标记,通过RAA反应时间和温度等条件的优化,建立了可用于CEV现地检测的RAA-LFD方法.该检测方法在34 ℃～40℃恒温反应10 ...     

感染鲤浮肿病毒镜鲤的组织病理变化及病毒分布规律研究

【目的】研究感染鲤浮肿病毒(Carp edema virus, CEV)镜鲤的组织病理特征及CEV在各组织中的分布规律,以期为鲤浮肿病的诊断和防控提供参考。【方法】利用HE染色观察发病镜鲤心脏、肝脏、皮肤、脾脏、肾脏、脑、鳃组织的病理变化情况;用免疫组织化学法检测CEV在镜鲤各组织的分布和蛋白表达情况;利用CEV P4a基因保守区域设计3条探针,于5′-端标记FAM进行原位杂交,检测CEV在镜鲤各组织的核酸分布情况;实时荧光定量PCR检测感染镜鲤各组织的病毒载量。【结果】HE染色观察发现,患病镜鲤的鳃丝肿胀、充血,鳃丝间有脱落堆积的红细胞和炎性细胞,肝脏细胞深染萎缩,胆小管出血,脾脏组织出现明显间隙并伴有出血,肾脏组织充血明显,肾小管有明显闭合现象。免疫组织化学结果显示,在患病鱼的鳃和肝脏组织中大量表达CEV P4a蛋白,在其他组织中也有少量表达。原位杂交结果显示,CEV核酸大量存在于鳃组织中,在心脏、脾脏和肾脏中均有少量阳性信号。实时荧光定量PCR结果显示,鳃组织病毒载量极显著高于心脏、肝脏、皮肤、脾脏、肾脏、脑组织(P<0.01)。【结论】感染CEV后,镜鲤内脏组织出现不同程...     

Testing and Identification of Carp Edema Virus Disease in Cultured Koi

An acute infectious diseases occurred in a koi farm in Fangshan district, Beijing, and it resulted in mortalities of more than 50%.The main symptoms of sick koi were gills necrosis, kidney erosion and edema,which were similar to the clinical signs of koi herpes virus disease (KHVD).But PCR tests showed negative results for KHV. For further diagnosis, bacterial cultures, transmission electron microscopy studies, virus isolation and PCR tests were used. Electron microscopic observation revealed pox virus particles having a size of about 200 nm×400 nm in the kidney. 548 and 180 bp fragments were amplified from organs of sick koi by PCR method using specific primers of carp edema virus (CEV). The fragments were sequenced and analysed. The results showed that they were shared 100% nucleotide identity with CEV-H504. All the results indicated that this disease was carp edema virus disease, caused by a kind of pox virus, CEV. This was the first report on the CEV of cultured koi in China.     

猪水肿病发病机理研究进展

猪水肿病主要发生于断奶后2周内的仔猪,是常见的一种急性致死性传染病。该病是由利用其菌毛(F18ab)黏附于小肠上皮细胞,并产生类志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)的产类志贺毒素大肠埃希菌引起的一种肠毒血症。仔猪断奶后的免疫能力,营养水平和遗传抗性是导致猪水肿病的主要影响因素。文章着重阐述了猪水肿病的致病机理,为该病的预防和治疗提供重要的理论依据。     

施马伦贝格病及其检测技术研究进展

作者从病原学、流行病学、诊断及预防措施等方面,对2011年秋欧洲大部分地区暴发的新型传染病——施马伦贝格病进行全面综述,重点总结了此病的诊断方法,为对此病的发病机理、感染机制和其他新型检测技术的深入研究奠定基础。     

口蹄疫病毒整合素受体研究进展

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)感染宿主细胞首先是病毒与被感染细胞表面的病毒受体结合,通过网格蛋白介导的内吞途径,酸化的内吞泡运输进入细胞内,然后衣壳迅速解体,释放出基因组RNA,细胞受体决定口蹄疫病毒宿主特异性和组织特异性.对口蹄疫病毒细胞受体的研究将有助于揭示口蹄疫病毒的感染机制、复制过程、致病机理和疫病预防及治疗等,细胞受体的研究已经成为目前口蹄疫病毒研究中的重点领域之一,论文就近年来FMDV整合素受体研究现状进行了综述,并对其发展进行了展望.     

新城疫病毒基因组中HN基因的研究进展

新城疫病毒的分类位置,据国际病毒分类委员会(ICTV)报告归列于副粘病毒亚科下的新属Avu-lavirus内,由NP、P、M、F、HN、L六个基因组成,其中HN基因对宿主细胞的感染、促进病毒与细胞及细胞与细胞之间的融合、病毒粒子的播散、病毒毒力和抗原性的决定等方面具有重要作用,本文就HN     

新城疫病毒分子流行病学研究进展

新城疫在世界范围内已经引起了4次大流行,每次大流行都是由一种新基因型引起的。尽管新城疫病毒只有1个血清型,但其基因型众多。论文主要综述了新城疫病毒基因型的划分方法以及国内外不同时期新城疫的流行状况及其特点,分析了国内外流行毒株及流行趋势,目前在国内外三大家禽中主要流行基因Ⅶd亚型毒株,鸽群中主要流行基因Ⅵb亚型毒株,为我国新城疫的防控提供理论基础。此外,弱毒株在新城疫的传播中所起的作用也值得关注。     

新城疫病毒在肿瘤治疗中的研究进展

新城疫病毒(NDV)是一种新兴的肿瘤生物治疗因子,反向遗传学操作技术的成熟使其在肿瘤治疗中的应用研究越来越深入.NDV能够通过其直接的溶瘤作用杀死肿瘤细胞,也可通过感染自体肿瘤细胞制成疫苗对患者进行主动特异性免疫治疗.但直接溶瘤效应会对患者产生一定的负面影响,自体肿瘤疫苗的免疫治疗也不能彻底杀死肿瘤细胞.目前,以NDV为复制型病毒栽体的肿瘤基因治疗已成为该病毒肿瘤生物治疗的研究热点,这种基因治疗方法被认为是人类征服癌症的潜在手段.论文综述了NDV在肿瘤治疗中的研究与应用,对其溶瘤及抗肿瘤免疫学机制进行了分析,并对NDV作为载体的肿瘤基因治疗前景进行展望.     

Research Progress on Avian Tembusu Virus

Avian Tembusu virus(ATMUV) is a newly viral infectious disease of laying duck.Since April 2010,the disease has caused severe economic loss to the duck industry in China southeast coastal areas.ATMUV can also cause chickens,geese and other poultry disease.The present article summarized research progress on ATMUV regarding etiology,epidemiology,biological characteristics,genomics,methods of virus detection and vaccine developments,and provided references for further research ATMUV.