PCR和ELISA法检测畜禽类乙型肝炎病毒的研究

从河南省部分地区收集鸡血清３１２份，猪血清２０４份，奶牛血清２００头份，分别用人乙型肝炎“两对邓ＨＢｓＡｇ，抗－ＨＢｓ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ抗－ＨＢｃ试验盒检测。然后取经”两对半”系统检测有“＋”的鸡血清２６份，猪血清２５头份，奶牛血清２５头份，人血清４份，进行ＰＣＲ扩增，其扩增片断选择以ＨＢＶ－ＤＮＡ相对保守区域，扩增后的产物电泳３０ｍｉｎ，紫外灯下观察６００ｂｐ的片断为阳性，ＨＢＶ－ＤＮＡ阳     

PCR检测鸡类乙型肝炎病毒的研究

本课题从河南省部分地区收集鸡血清312份,首先用人乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、c抗体等试剂盒,ELISA法分别检测312份血清结果血清样品阳性数分别为:HBs—Ag18份、HBs—Ab16份;HBe—Ag14份,HBe—Ab2份;HBc—Ab零份.其中10份血清样品为两种抗原阳性即双阳性.取经过“两对半”系统检测有“十” 的26份血清和阴性血清4份,人阳性血清4份作为对照,进行PCR扩增分析.结果鸡血清HBV—DNA阳性21份,人血清样品4份阳性.以上结果说明鸡群中类乙型肝炎病毒和人乙型肝炎病毒有相同的核酸型,均为DNA型.也表明鸡群中存在着一种与人乙肝病毒抗原密切相关的共同抗原成分.这一研究成果在兽医学、医学、HBV流行病学、公共卫生学上具有非常重要的意义.这在国内属首次报导.     

PCR和ELISA在食源性致病菌检测中的应用

阐述了PCR和ELISA这两种技术在食源性致病菌检测中的研究,并对这两种方法特点与应用进行了探讨。     

兰州百合病毒多重PCR和ELISA检测体系的比较与应用

采用多重PCR和ELISA 2种方法分别对兰州百合中的主要病毒进行检测,以调查田间发病率,对比筛选病毒检测最优的方法.结果表明:通过多重PCR,从带有黄瓜花叶病毒、百合无症病毒和百合斑驳病毒的样品中同时扩增出3条与试验设计大小相符的特异条带.ELLSA检测表明,兰州百合病情含量随种植年限的增加而增加,3年生＞2年生＞1...     

ELISA和PCR方法在香蕉病原检测中的应用

应用ELISA和PCR方法对香蕉病样进行BBTV、CMV、BCV病原检测。结果表明,病样在ELISA反应中对BBTV和CMV表现为阳性,对BSV表现为阴性;而在PCR反应中,对上述3种病毒均表现为阳性。初步研究认为,该病可能是由BBTV和CMV 2种病毒复合侵染所致。     

ELISA技术检测马铃薯病毒的研究

应用ＤＡＳ ＥＬＩＳＡ方法对甘肃省种植的６个马铃薯品种老龄薯和幼龄薯及２个品种的茎尖组培苗进行了针对ＰＶＸ、ＰＶＹ及ＰＬＲＶ的病毒检测。结果表明,老龄薯块携带以上３种病毒,并以ＰＬＲＶ为主体的复合侵染为主,幼龄薯块仅带其中一种病毒,且带毒量少;茎尖剥离组培法可使陇薯３号和１６７ ４５脱毒率达２０％。以幼龄薯为脱毒基础材料可望进一步提高脱毒率。文中还对ＤＡＳ ＥＬＩＳＡ技术在马铃薯病毒检测中的优势进行了评价。     

猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒混合感染的PCR检测

笔者实验分别建立了用于检测猪传染性胃肠炎病毒及猪轮状病毒的RT-PCR方法,通过该方法对52份疑似病料进行了检测,以调查猪群中猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒混合感染情况。实验结果表明,17份样品表现为猪传染性胃肠炎病毒与猪轮状病毒混合感染,占样品总数的28.8%。     

PCR法检测香蕉束顶病毒

用3种方法，提取来自漳州的香蕉束顶病病叶组织中的DNA，并以此为模板，用台湾大学及美国夏威夷大学的4种引物进行PCR检测，通过2种反应成分、3种循环参数的选择试验建立了PCR反应体系，并发现用CTAB法提取到的模板DNA无论质量、数量都较高，用于PCR扩增，反应灵敏且效果好，可以从5μg的香蕉病叶组织中检测到BBTV。     

出口家禽新城疫病毒PCR和ELISA联合检测方法的建立

针对出口家禽新城疫泄殖腔棉拭样品病毒检测的需要,建立了PCR和ELISA联合检测方法.结果表明:检测时间较常规缩短7～14 d;通过被检样品鸡胚传代,提高了阳性检测率;特异性强,只与不同类型新城疫病毒反应,不与其他常见禽类病毒反应;所检的3 216个样本,符合率98.8%,用多重RT-PCR和脑内接种试验两种方法鉴定的114份样品,符合率99.1%,与GenBank中部分新城疫病毒F基因比较,同源性81%～100%.     

应用ELISA法检测天津红小豆病毒类型

<正> 近年来,随着天津郊县外向型农业的发展,在国际市场久享盛誉的天津红小豆种植面积逐年增加。同时影响红小豆产量的重要因素之一,红小豆病毒病的危害也日趋严重。据1985—1989年的田间调查,红小豆病毒病发生的普遍率达100%,轻病田减产60%,重病田减产86%,绝收率达25%,产量损失十分严重。因天津过去未开展这方面     

HRP-SPA ELISA检测猪日本乙型脑炎病毒抗体的研究

将盐析法提纯的、用Hela细胞系增殖的猪日本乙型脑炎病毒JapaneseBencephalitis(JEV)抗原包被酶标板,以HRP-SPA作为第二抗体,建立了检测JEV抗体的ELISA试验方法。结果表明,抗原的最适包被浓度为1∶800,待检血清最适稀释度为1∶50,HRP-SPA最佳工作浓度为1∶1000,各步反应时间确定为5min。交叉试验、阻断试验、重复性试验、敏感性试验证明本实验特异性强,重复性好,敏感性高。包被的病毒抗原经甲醛固定15min即可进行正式试验。确定其测定标准为:S/N≥14.81为阳性,S/N<12.53为阴性,12.53≤S/N<14.81为可疑。     

猪圆环病毒Ⅱ型特异抗体检测间接ELISA法的建立

利用巴斯德毕赤酵母表达的猪圆环病毒2型株Cap蛋白为包被抗原,成功地建立了一种检测血清中PCV-2特异抗体的间接ELISA方法.确定了血清样品阴、阳性判定标准.临床检测结果表明,自建ELISA试剂盒具有较高的敏感性和特异性.     

草鸡J亚群禽白血病病毒的PCR检测

通过对GenBank发表的ALV的基因序列的分析,针对J型ALV保守区设计并合成1对特异性引物。通过对反应条件的优化,确定了检测ALV的PCR检测方法,对来源于江苏地区不同草鸡养殖基地的10份病料组织样本提取DNA进行PCR扩增。结果对疑似J亚群ALV病料和正常鸡肝脏组织的病原核酸检出率分别为90%和0,同时将扩增的目的基因进行克隆测序,并与GenBank中的参考毒株进行比较,结果表明目的基因片段序列长300 bp左右,与参考毒株核苷酸序列同源性为97%以上。试验表明,江苏地区草鸡群中确实存在J亚群鸡白血病病毒感染的情况。     

猪细小病毒和猪伪狂犬病毒复合PCR检测方法的建立

在已经建立的PPV和PRV的单项PCR诊断方法的基础上。通过对扩增条件的筛选，成功地建立了PPV和PRV诊断方法，并应用于临床，利用一次PCR反应，即可同时扩增PPV的445bp和PRV217bp的特异性片段。该方法的建立对临床上进行这2种疾病的鉴别诊断和混合感染的检测都具有重要意义。     

猪圆环病毒2型和猪细小病毒混合感染的PCR检测

2012年9月河南省新乡市某养猪场发生一例以初产母猪流产、死产,断奶仔猪精神沉郁、呼吸困难、食欲不振、轻微腹泻、渐进性消瘦为特征的疾病。采用PCR技术进行检测,结果表明猪圆环病毒2型和猪细小病毒均为阳性,结合发病情况、临床症状及剖检变化,初步确定为PCV2和PPV混合感染。     

奶牛新孢子虫病的巢式PCR诊断及ELISA检测

为确定焦作某奶牛场奶牛流产是否与新孢子虫感染有关,对采自该奶牛场流产奶牛的胎牛组织进行新孢子虫Nc5基因巢式PCR检测诊断,并用ELISA方法对该奶牛场不同年龄阶段奶牛血清样品进行新孢子虫抗体检测。结果显示,在4例流产胎牛样本中有3例检出新孢子虫DNA;新孢子虫血清抗体阳性率达44.80%(112/250),其中,经产奶牛阳性率为55.40%(77/139),未经产奶牛或犊牛阳性率为31.53%(35/111);经产奶牛中有流产史的阳性率为73.17%(30/41),其余未发生过流产的阳性率为47.96%(47/98)。综上推断,新孢子虫是导致该奶牛场奶牛流产的主要病原。     

多重PCR检测猪伪狂犬病毒、猪细小病毒和猪圆环病毒2型的研究

根据GenBank上已发表的猪伪狂犬病毒(PRV)的gH基因、猪细小病毒(PPV)的VP2基因序列和猪圆环病毒2型(PCV2)的ORF2基因序列,设计合成了3对特异引物,分别建立了PRV,PPV和PCV2的单项PCR诊断方法;通过对扩增条件的筛选,建立了PRV,PPV,PCV2的复合PCR诊断方法,利用1次PCR反应,即可同时扩增PRV的355 bp,PPV的195 bp和PCV2 487 bp的特异性片段,而猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、正常细胞(PK-15)扩增结果均为阴性,对PRV,PPV,PCV2的最低检出量分别为100 fg,1 pg和10 pg的DNA.该方法适合对PRV,PPV和PCV2的联合检测和鉴别诊断.     

PCR和多重PCR技术对人工感染鸡毒支原体SPF鸡样品的检测

应用聚合酶链式反应(PCR)和多重PCR技术对人工感染鸡毒支原体(MG)SPF鸡的样品进行检测，在第1～24d，所采集喉头及腭裂处粘液、喉气管组织、肺组织均可检出MG，阳性检出率要比传统分离鉴定方法高。在整个试验期不同样品的MG分离、PCR和多重PCR对样品(喉头腭裂粘液、喉气管、肺、气囊膜)的检出率分别为70％、81．3％、76．7％。试验结果表明了PCR和多重PCR对MG的检测不仅特异、敏感、快速，而且操作简便．对阳性样品检测的符合率100％，十分适合在临床上推广应用。     

间接Dot—ELISA检测EDS—76病毒抗原的研究

本研究成功地建立了间接酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）用于检测ＥＤＳ－７６病毒抗原的标准化程序。对纯化ＥＤＳ－７６病毒抗原的最低检出量为１ｎｇ／Ｄｏｔ,其敏感性约为ＨＡ的１５．６倍。ＥＤＳ－７６阳性鸡血清特异性阻断试验及交叉反应试验证明,该法对ＥＤＳ－７６病毒抗原的检测具有特异性。试验结果表明,间接Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测ＥＤＳ－７６病毒抗原,具有敏感性高、特异性强、重复性好、经济、方便、快速等优点,适合于大规模样本的检测。     

斑点ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒及抗体

采用鼠抗鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）高免血请作第１抗体，利用酶标羊抗鼠ＩｇＧ作第２抗体，建立间接法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ程序检测ＩＢＶ抗原；利用鸡抗ＩＢＶ血清阻断试验检测ＩＢＶ抗体。试验表明，本程序检测ＩＢＶ抗原及其抗体具有高度过感性和特异性。最低抗原检出量达１０￣（－８）ｇ数量级，阳性检出率９８％，阳性阻断率１００％。