雄激素受体及共调节因子在睾酮调节绵羊附睾GPX5表达中的作用分析

为探究雄激素受体(Androgen receptor,AR)及共调节因子对绵羊附睾上皮细胞(Epididymal epithelial cells,EECs)谷胱甘肽过氧化物酶5(Glutathione peroxidase 5,GPX5)的调节机制,本研究采用CCK-8检测睾酮对EECs增殖的影响;利用qRT-PCR、免疫荧光法和 Western Blot法分别检测AR、GPX5、甾体激素受体共激活子 1(Steroid receptor coactivator 1,SRC-1)、CREB结合蛋白(cAMP-response element-binding protein,CBP)、p300和核受体共抑制因子2(Nuclear receptor corepressor 2,NCOR2)的mRNA水平和蛋白表达情况,采用双荧光素酶报告基因测定干扰SRC-1或p300后EECs的荧光素酶活性。结果表明:1)与对照组相比,100 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量极显著升高(P<0.01),1 000 nmol/L睾酮组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量差异不显著(P>0.05),但分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)低于100 nmol/L睾酮组;100 nmol/L睾酮组细胞中的AR mRNA和蛋白表达量分别呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)高于对照组,然而1 000 nmol/L睾酮组细胞中的AR mRNA和蛋白的表达量显著低于对照组(P<0.05);1 000 nmol/L睾酮组细胞中的CBP、p300、SRC-1蛋白表达极显著高于对照组(P<0.01),特别是核内的表达量明显增高。2)与对照组相比,siRNA-AR组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白的表达量差异不显著(P>0.05),而SRC-1和p300蛋白表达量极显著升高(P<0.01)。pcDNA3.1-AR组GPX5 mRNA和蛋白表达量较对照组呈极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)升高。3)siRNA-SRC-1 和siRNA-p300组细胞中的GPX5 mRNA和蛋白表达量较对照组均显著降低(P<0.05),而AR的蛋白表达量与对照组差异不显著(P>0.05),AR的转录活性显著降低(P<0.05)。综上,睾酮对绵羊EECs GPX5、AR及其共调节因子的表达具有浓度依赖性的调节效应,睾酮通过AR及其共调节因子SRC-1和p300/CBP的协同调节GPX5表达。本研究为探究GPX5在绵羊附睾中的调节机制提供理论依据。     

雄激素和氢化可的松对山羊附睾头上皮细胞增殖的影响

为研究雄激素和氢化可的松对山羊附睾上皮细胞生长的作用模式,本研究利用酶标仪检测附睾头部上皮细胞增殖情况,实时荧光定量PCR及ELISA检测雄激素受体(AR)的表达,检测睾酮与氢化可的松对山羊附睾上皮细胞体外增殖的作用以及对AR表达的影响。结果表明:100nmol/L睾酮对附睾头上皮细胞增殖的促进效应最高且与对照组差异极显著(P0.01),200nmol/L氢化可的松促进附睾头上皮细胞增殖效应最佳并与对照组差异显著(P0.05),前者的效应明显且可以被AR阻断剂阻断;睾酮和氢化可的松对附睾头上皮细胞增殖表现为协同作用;100nmol/L睾酮与200nmol/L氢化可的松均使附睾头上皮细胞的AR mRNA和蛋白表达量上调,与对照组差异显著(P0.05),且二者共存时附睾头上皮细胞的AR mRNA和蛋白表达量极显著高于对照组(P0.01)。本研究表明睾酮和氢化可的松对附睾头上皮细胞体外增殖均有促进作用,呈明显的浓度依赖性,且二者之间存在协同作用,这为进一步研究附睾上皮细胞增殖及功能的调节机理提供了基础。     

肾虚肝郁证迟发性性腺功能减退症大鼠模型的建立与评价

目的 建立“肾虚肝郁证”迟发性性腺功能减退症（Late onset hypogonadism,LOH）动物模型,并对其进行评价。方法 以中医理论“房劳过度伤肾”、“郁久伤肝”为指导,采用“退役种鼠（40周龄）+复合情志刺激+孤养”方法,建立“肾虚肝郁证”LOH动物模型,与正常组（8周龄）比较,以血清总睾酮、悬尾实验、睾丸间质细胞超微结构、睾酮合成相关酶以及Caspase-3 mRNA和蛋白表达为指标。结果 模型组大鼠出现一系列典型的LOH精神、心理、体能改变,与正常组比较,模型组大鼠血清总睾酮水平明显降低,悬尾不动时间显著延长,睾丸组织Caspase-3 mRNA和蛋白表达增强,睾酮合成相关酶类固醇激素合成急性调节蛋白（Steroidogenic Acute Regulatory Protein,StAR）^[13]、细胞色素胆固醇侧链裂解酶（Cytochrome P450 side-chain cleavage,P450scc）^[14]、3β-羟甾脱氢酶（3beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD）mRNA和蛋白表达下降,差异均有统计学意义（P<0.01）;模型组睾丸间质变少,睾丸间质细胞线粒体数量减少,出现水肿,线粒体嵴消失。结论 “退役种鼠+复合情志刺激+孤养”方法复制“肾虚肝郁证”LOH模型切实可行,有较高的实用价值。     

外源雄激素促进绵羊附睾GPx5基因的表达

为研究外源雄激素丙酸睾酮对绵羊附睾特异表达基因谷胱甘肽过氧化酶5(GPx5)的影响,应用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清和附睾头部内睾酮(T)、二氢睾酮(DHT)的含量,及附睾头部雄激素受体(AR)蛋白表达量;应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测了附睾头部GPx5-mRNA和AR-mRNA相对表达量;并结合免疫印迹(WB)法检测了附睾头部GPx5蛋白相对表达量。结果表明:丙酸睾酮处理(TPT)组与对照组相比绵羊血清DHT含量,附睾头部T含量、DHT含量均显著提高,分别是对照组的0.5、6.0、0.8倍;GPx5-mRNA和ARmRNA相对表达量显著提高,分别是对照组的0.75和0.77倍(P0.05);AR及GPx5蛋白表达量显著提高,分别是对照组的0.63和0.58(P0.05)。因此,外源雄激素丙酸睾酮可大量提高绵羊附睾头部GPx5基因的表达,对绵羊附睾头部GPx5基因的表达具有促进作用。     

4-硝基苯酚对大鼠肾上腺皮质孕酮分泌的影响

[目的]设计体内体外试验研究环境内分泌干扰物4-硝基苯酚(4-nitrophenol,PNP)对雄性大鼠肾上腺皮质孕酮分泌的影响.[方法]体内试验采用24只SPF级雄性未成年SD大鼠,随机分为4组,连续2周皮下注射(剂量为0、0.1、1.0和10.0 mg·kg-1的PNP).最后一次注射24 h后称体质量,然后麻醉处死,收集血液及各脏器,以备测定;为进一步确定PNP对肾上腺皮质孕酮分泌的影响,体外试验利用肾上腺皮质细胞原代培养,细胞贴壁后用不同浓度的PNP(0、101、10-5和10-4 mol· L-1)培养24h.[结果]体内试验结果显示:0.1和1.0 mg·kg-1 PNP处理组大鼠脾脏质量显著低于对照组(P＜0.05),但是体质量及其他脏器质量和脏器指数均无显著性差异(P＞0.05);10.0 mg·kg-1组大鼠血清睾酮水平显著升高(P＜0.05),而孕酮水平显著降低(P＜0.05),雌二醇水平差异不显著(P＞0.05);光学显微镜组织学检查未发现注射PNP组肾上腺皮质形态异常,但RT-PCR结果显示10.0 mg·kg-1 PNP处理大鼠肾上腺中StAR、P450scc和P450c17 mRNA表达显著增加(P＜0.05),而3β-HSD mRNA表达显著降低(P＜0.05).体外试验结果显示:与对照组相比,注射PNP组培养液中孕酮水平显著降低(P＜0.05).[结论]4-硝基苯酚可能主要通过影响肾上腺类固醇合成酶的表达来影响肾上腺皮质孕酮的分泌功能.     

热应激对黄体孕酮代谢通路的影响

[目的]以假孕大鼠为模型,探讨热应激对氯前列烯醇(PGF)诱导的黄体退化过程中孕酮水平及其代谢通路相关蛋白表达的影响。[方法]用PMSG/h CG(D0)联合处理50只大鼠,诱导假孕,然后随机分为非热应激(NHS)和热应激(HS)两组。每天在相同时间,将HS组置于40℃应激2 h。假孕第7天,热应激结束2 h后,各组大鼠以PGF分别处理0、1、2、8和24 h后屠宰,收集血清和卵巢组织。用酶联免疫法检测血清孕酮浓度,蛋白免疫印迹法和免疫组织化学法检测孕酮水平及其代谢通路相关蛋白的表达。[结果]热应激前、后假孕大鼠的直肠温度差异显著(P0.05);PGF降低了两组大鼠血清孕酮浓度,热应激抑制了PGF诱导的孕酮浓度下降(P0.05);PGF或热应激处理对PKA磷酸化底物、St AR、P450scc、3βHSD及NR4A1-F表达均无显著影响(P0.05),但均诱导NR4A1-S表达上调(P0.05),且热应激降低PGF诱导的NR4A1-S表达(P0.05);PKA磷酸化底物主要在类固醇生成细胞的细胞核中表达,而St AR、P450scc、3βHSD和NR4A1-F均在类固醇生成细胞的细胞质表达。[结论]热应激降低了PGF诱导的假孕大鼠黄体退化过程中NR4A1-S的表达,提示NR4A1-S可能参与调控黄体退化过程中孕酮的代谢。     

日粮中大豆异黄酮对公鸡繁殖性能的影响

大豆异黄酮(SIs)是一种植物雌激素,可与体内雌激素进行竞争,在繁殖过程中起着重要作用,但其对公鸡睾丸发育的作用目前尚未明确。本试验旨在探讨SIs对雏公鸡睾丸发育及血清中生殖激素含量的影响(70~133日龄)。试验通过饲喂4种不同浓度的SIs,观察其对公鸡睾丸睾酮合成相关的类固醇激素合成急性调节蛋白基因的表达(STAR)、胆固醇侧链裂解酶(p450scc)和3β-羟类固醇脱氢酶(3βHSD)的影响。虽然SIs对公鸡体重变化无显著影响,但饲料中添加5 mg·kg~(-1)可显著提高睾丸指数、血清中生殖激素(促性腺激素释放激素、卵泡刺激素、黄体生成素、睾酮)含量。通过荧光定量PCR进一步检测STAR、P450scc和3βHSD相关m RNA含量,结果表明,饲料中添加5 mg·kg~(-1)SIs对P450scc和3βHSD相关m RNA含量无显著影响,但促进了精原细胞的生长及生殖细胞层的数量。结果表明,SIs可促进与STAR表达相关的生殖激素的分泌,从而促进公鸡睾丸发育,提高公鸡的繁殖性能。     

日粮中添加三聚氰胺和三聚氰酸对生长前期蓝狐消化代谢及生长性能的影响

本试验旨在探讨在基础日粮中添加三聚氰胺、三聚氰酸及其混合物对蓝狐消化代谢和生长性能的影响。采用单因素随机试验设计,将48只10周龄健康公蓝狐随机分为6组,每组8个重复,每个重复1只蓝狐。对照组饲喂常规基础日粮;Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组为试验组,分别饲喂在基础日粮中添加三聚氰胺20mg/kg、三聚氰胺50mg/kg、三聚氰胺100mg/kg、三聚氰酸20mg/kg和三聚氰胺15mg/kg+三聚氰酸5mg/kg的日粮。试验前期(第1~46天),各组蓝狐的体重和日增重没有产生显著性差异(P0.05);试验后期(第46~61天),Ⅴ组蓝狐的体重和日增重显著低于对照组、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组(P0.05)。与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组的日采食量、干物质消化率、饲料转化率、食入氮、粪氮、尿氮、氮表观消化率和脂肪消化率没有显著差异(P0.05);Ⅴ组氮沉积、氮沉积率和氮生物学效价显著降低(P0.05)。试验组蓝狐与对照组相比,日排尿量和排尿频率都没有显著性差异(P0.05),Ⅲ组蓝狐排尿频率显著高于Ⅴ组(P0.05)。三聚氰胺(15mg/kg)和三聚氰酸(5mg/kg)在日粮中混合添加能显著降低蓝狐体重、氮沉积率和氮生物学效价,相对降低蓝狐排尿频率,二者的协同效应是影响蓝狐体重和氮代谢指标的重要因素。     

注射ACTH对断奶母猪卵泡促黄体素受体表达及卵泡液中类固醇激素合成的影响

[目的]为了探讨应激对断奶母猪繁殖障碍的影响机制,本试验以促肾上腺皮质激素(ACTH)注射所致的应激模型来研究应激对断奶母猪卵泡液中类固醇激素合成及卵泡促黄体素受体表达的影响。[方法]对10头苏淮断奶母猪进行颈静脉插管手术,随机均分为对照组与ACTH处理组(n=5)。手术第3天开始以每次间隔8 h给ACTH处理组母猪注射ACTH(1 IU·kg-1),对照组母猪注射生理盐水,连续注射7 d。利用ELISA方法检测受试母猪卵泡液中类固醇激素及血浆中皮质醇的含量变化;利用荧光定量PCR测定胆固醇侧链裂解酶(CYP11A1)、17α-羟化酶(CYP17A1)、芳香化酶(CYP19A1)、类固醇激素合成急性期调节蛋白(St AR)、3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、促黄体素受体(LHR)等基因的表达;利用免疫组化法检测CYP17A1、CYP19A1、LHR和3β-HSD蛋白的表达。[结果]人工注射ACTH后40%的受试母猪出现排卵障碍;其血浆中皮质醇的含量极显著升高(P0.01);母猪卵泡液中雌二醇、雄烯二酮含量均显著下降(P0.05);CYP17A1、CYP19A1、LHR和3β-HSD基因表达量降低,其编码的蛋白CYP17A1、CYP19A1、LHR和3β-HSD表达量也明显下降。[结论]ACTH注射所致应激过程中,受试母猪的皮质醇含量升高可导致类固醇合成酶的基因、蛋白表达量明显下降,从而影响类固醇激素的合成及卵泡的发育。类固醇激素合成降低及LHR的低表达影响断奶母猪的正常排卵。     

α-亚麻酸对TM3细胞活性及相关基因表达的影响

α-亚麻酸(ALA)是哺乳动物必需脂肪酸的重要成员,在机体生长和发育过程中起着重要作用。在雄性动物生殖系统,ALA通过代谢生成二十二碳六烯酸(DHA)和二十碳五烯酸(EPA),进而对生殖系统发挥调控功能。本研究旨在利用WST-1、JC-1以及RT-PCR等方法研究ALA对体外培养的小鼠睾丸间质细胞TM3细胞的活力及相关基因表达的影响。结果显示,培养体系中添加10、50、100、200、400μM的ALA,处理24 h可以显著提高TM3细胞活力(P0.05),并且呈剂量依赖性。与对照组相比较,50μM的ALA处理24 h可以促进TM3细胞增殖,提高线粒体膜电位,抑制凋亡相关基因Caspase-3基因表达(P0.05),促进类固醇代谢相关基因St AR基因表达(P0.05)。结果表明,体外培养体系中添加ALA可以增加TM3细胞活性,促进细胞增殖和St AR基因表达,相反抑制Caspase-3基因表达。     

克隆猪隐睾症雌雄激素及其受体基因表达的研究

利用化学发光免疫技术测定了3头隐睾克隆猪和3头正常猪不同阶段(2—6月龄)的睾酮(T)和雌二醇(E_2)激素的水平;运用相对荧光定量PCR技术检测AR和ER基因在睾丸组织中的mRNA表达量。结果表明:正常猪血清T和E_2浓度从2月龄到6月龄呈上升趋势,隐睾克隆猪血清E_2浓度变化趋势与对照组相似,T变化趋势为先缓慢升高然后降低,5月龄达到最高[(1.98±1.06)ng/mL],且各阶段血清浓度均显著低于正常猪;ER基因在克隆猪睾丸中表达量高于对照组,但差异不显著,AR基因表达量则反之,且差异显著。血清T的低水平和睾丸AR基因mRNA低表达均可能是引起克隆猪发生隐睾的因素。     

Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响

为明确Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的作用,采用荧光定量PCR和ELISA方法研究了Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞孕酮分泌的影响。结果表明:Kisspeptin对牛卵巢颗粒细胞的孕酮分泌有促进作用,且在一定范围内呈剂量依赖性。100 nmol/L Kisspeptin-10(Kp-10)处理颗粒细胞24 h后,显著增加了孕酮的分泌(P0.05),而10 nmol/L和1 000 nmol/L Kp-10处理组对孕酮的分泌无显著影响(P0.05)。100 nmol/L Kp-10可显著提高孕酮合成的关键基因3β-HSD和St AR的mRNA表达水平(P0.01)。研究结果提示,Kisspeptin可促进牛卵巢颗粒细胞孕酮的分泌,推测这一作用可能通过上调孕酮合成关键基因表达来实现。     

睾酮诱导的小鼠骨髓巨噬细胞凋亡途径研究

用睾酮诱导,研究小鼠骨髓巨噬细胞(BMMs)凋亡过程中Fas/FasL途径上caspase-8表达的改变。以BMMs经L929条件培养基(LCM)诱导5d后,用流式细胞仪分选出F4/80阳性细胞,并将细胞分为两大组。第1组是空白对照组,睾酮(100nmol·L-1,下同)处理组,去除LCM组,去除LCM同时用睾酮处理组。第2组用FADD反义寡核苷酸(ASODN)转染BMMs后,重复第1组的4个处理组,并以FADD错义寡核苷酸(MSODN)转染后的睾酮处理组作为对照。处理12h后,用流式细胞仪检测巨噬细胞的凋亡情况,并通过RT-PCR、Real-timeRT-PCR和WesternBlot方法检测各组中caspase-8基因及蛋白的表达。结果显示,在缺少LCM或用睾酮处理时,睾酮可在体外诱导小鼠骨髓巨噬细胞凋亡,并伴随caspase-8的活化。FADD反义寡核苷酸能抑制睾酮诱导的小鼠骨髓巨噬细胞的凋亡,其下游的caspase-8表达也被抑制。     

牛至香酚对LPS所致的免疫应激小鼠脾脏细胞因子及核转录因子mRNA表达的影响

将80只小鼠随机分成5组(空白对照组、模型组及牛至香酚低、中、高剂量组),牛至香酚低、中、高剂量组小鼠分别按25、50、100 mg·kg~(-1)的剂量灌胃牛至香酚,空白对照组、模型组灌胃相同体积的橄榄油,每日1次,连续14 d.第15天时,牛至香酚试验组、模型组小鼠腹腔注射8 mg·kg~(-1)脂多糖(LPS),6 h后采集脾脏组织,用qRT-PCR检测小鼠脾脏细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-1β)、NF-κB及核转录因子(T-bet、GATA-3)mRNA的表达量,研究牛至香酚对LPS所致的免疫应激小鼠脾脏细胞因子及核转录因子mRNA表达的影响.结果表明:与空白对照组相比,模型组小鼠TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10、IL-1β、NF-κB、T-bet mRNA的表达量提高(P<0.01),GATA-3 mRNA的表达量降低(P<0.01);与模型组相比,牛至香酚低、高剂量组IL-1β mRNA的表达量降低(P<0.01),低、中、高剂量组IL-6、TNF-α mRNA的表达量降低(P<0.01、P<0.05),低、中、高剂量组IFN-γ mRNA的表达量极显著或显著降低(P<0.01或P<0.05),高剂量组NF-κB mRNA的表达量降低(P<0.05),低、中、高剂量组T-bet mRNA的表达量降低(P<0.05),中剂量组GATA-3 mRNA的表达量提高(P<0.05).由本试验结果可知,牛至香酚通过提高或降低小鼠脾脏细胞因子、核转录因子的表达,调节免疫应激小鼠的免疫功能.     

小鼠脾Th17细胞分化模型中IL-17F、RORα、Stat3 mRNA表达

目的研究小鼠脾Th17细胞分化模型中IL-17F、RORα、Stat3表达。方法提取C57/BL6J小鼠脾淋巴细胞,采用免疫磁珠纯化CD4-＋CD62L-＋T细胞,分为对照组及Th17分化组。对照组用RPMI1640培养;Th17分化组加抗小鼠CD3ε、CD28、IFN-γ、IL-4单抗及IL-6、TGF-β1、IL-23孵育。培养48 h后,采用Real-time PCR检测两组细胞IL-17F、RORα、Stat3 mRNA表达。结果 Th17分化组IL-17F、RORα、Stat3 mRNA表达明显高于对照组（P〈0.01）。结论小鼠脾Th17细胞分化过程中伴有RORα、Stat3 mRNA表达上调。     

FRBI对CA125、EGF、E2和IP3分泌及ERβmRNA和蛋白表达的影响

为了探究促卵泡激素受体结合抑制剂(FRBI)是否影响卵母细胞中糖类抗原125(CA125)、表皮生长因子(EGF)、雌二醇(E_2)、三磷酸肌醇(IP3)和cAMP分泌,雌激素受体β(ERβ)mRNA和蛋白表达水平,并阐明FRBI作用的信号通路。以绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)作为研究对象,在培养基中分别添加10,20,30,40μg/mL的FRBI,分别检测培养液中CA125、EGF、E_2、IP3和cAMP的浓度,研究卵母细胞中ERβmRNA和蛋白表达水平。结果显示与对照组(CG)相比较,FRBI-3组和FRBI-4组CA125和IP3浓度降低。FRBI-1组CA125和FRBI-2组IP3浓度明显高于CG。E_2浓度随FRBI添加量增加(从10μg/mL到30μg/mL)而升高,FRBI-3组E_2浓度最高。FRBI-3组和FRBI-4组cAMP浓度明显低于CG和FSH组。FRBI组ERβmRNA和蛋白表达水平逐渐降低,FRBI-4组ERβ蛋白水平低于FSH(P0.05)。FRBI浓度与EGF和E_2呈正相关。结果表明,高剂量的FRBI能抑制绵羊卵母细胞中CA125、cAMP和IP3产生,增加E_2浓度,降低卵母细胞ERβ基因和蛋白表达水平,FRBI可能抑制IP3和cAMP信号通路。     

金雀异黄素对围绝经期模型小鼠卵巢组织及其安全性的影响

通过建立围绝经期小鼠模型,观察金雀异黄素(Gen)对卵巢组织及安全性的影响。选用50只11~12月龄雌性ICR小鼠,按体重随机分为5组,即对照组、阳性对照组、高、中、低剂量组(15、30、60 mg·kg~(-1) Gen灌胃)。采用ELISA法测小鼠卵巢组织中Bcl-2与Bax蛋白水平,对小鼠重要脏器进行病理组织学检查。结果显示小鼠体重及重要脏器无明显变化,高剂量组、阳性对照组Bax蛋白下降明显(P0.05)。揭示实验剂量下Gen对围绝经期小鼠重要脏器及体重无明显影响,可通过调节Bcl-2与Bax蛋白水平来保护卵巢细胞。     

丙烯酰胺对小鼠成体神经发生及增殖相关基因的影响

【目的】探讨丙烯酰胺对成年小鼠海马成体神经发生及增殖相关基因的影响,为了解丙烯酰胺的毒性机理提供参考。【方法】将20只10周龄雄性成年昆白小鼠(体质量(30±2)g/只),随机均分为丙烯酰胺染毒组和生理盐水对照组,丙烯酰胺染毒组通过腹腔注射丙烯酰胺进行染毒,注射剂量为50mg/kg,连续注射14d,第15天注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU,50mg/kg,2次/d,共3d),观察2组小鼠体质量及行为活动的变化。用BrdU标记和免疫组织化学染色方法分析丙烯酰胺染毒对小鼠齿状回神经干细胞数量的影响,用RT-PCR法研究丙烯酰胺对小鼠海马增殖相关基因JNK3、Akt1、Gsk-3β、RhoA和Rac1mRNA表达的影响。【结果】丙烯酰胺染毒组小鼠体质量极显著低于对照组,精神萎靡、后肢无力,走路时后肢偶成劈叉姿势;与对照组相比,丙烯酰胺染毒组小鼠齿状回亚颗粒细胞层中的BrdU阳性细胞数量极显著降低(P0.01),海马组织中JNK3和Rac1的mRNA表达量显著升高(P0.05),Akt1、Gsk-3β和RhoA的mRNA表达量极显著升高(P0.01)。【结论】丙烯酰胺中毒能显著抑制小鼠齿状回中成体神经干细胞增殖,可使海马组织中增殖相关基因JNK3、Akt1、Gsk-3β、Rac1和RhoA的表达量发生明显变化。     

小鼠Th17细胞分化模型的构建

目的构建小鼠Th17细胞体外诱导分化模型。方法提取小鼠脾淋巴细胞,采用免疫磁珠纯化++CD4 CD62L T细胞(原始T细胞),分对照组及Th17组。Th17组采用CD3、CD28、IFN-、IL-4抗体及IL-6、TGF-1、IL-23培养72 h,采用Real-time PCR检测RORt和IL-17F mRNA表达。结果 Th17组T细胞RORt、IL-17F mRNA表达明显高于对照组(P<0.01)。结论构建Th17细胞体外诱导分化模型可用于T细胞分化研究。     

雌二醇和孕酮对小鼠子宫半胱亚磺酸脱羧酶基因表达和牛磺酸含量的调控

实验主要研究了17β-雌二醇(E2)和孕酮(P4)对小鼠子宫组织中半胱亚磺酸脱羧酶基因(CSD)表达和牛磺酸含量的调控。给去卵巢小鼠分别皮下注射植物油(对照组)、17β-雌二醇(E2)、孕酮(P4)、E2和P4、E2和氟维司群(ICI 182780)、P4和米非司酮(RU486),24h后观察各组小鼠子宫中CSD的表达和牛磺酸的含量。Real-time PCR和Western blot定量分析结果显示,每只小鼠注射1μg E2能够显著抑制CSD的mRNA和蛋白的表达,6mg P4能够显著促进CSD mRNA和蛋白的表达,其受体抑制剂RU486和ICI182780都能逆转它们的作用。高效液相色谱(HPLC)测定结果显示,注射1μg E2和6mg P4分别下调和上调子宫组织中牛磺酸的含量。上述结果提示E2和P4可能通过受体途径参与调节子宫CSD的表达,从而调节子宫中牛磺酸含量。