龙胆不同器官中可溶性糖和龙胆苦苷动态积累研究

为揭示龙胆不同器官中可溶性糖和龙胆苦苷的积累规律,采用蒽酮试剂比色法和高效液相色谱法测定其可溶性糖和龙胆苦苷在不同生长时期的含量。结果表明:龙胆不同器官中的可溶性糖和龙胆苦苷随植株发育节律而波动。地下器官中可溶性糖含量明显高于地上器官,在整个生长季基本呈逐渐升高的趋势,休眠期达到较高峰值。茎中的可溶性糖含量逐渐下降并基本趋于平稳;叶中可溶性糖总体含量低,蕾期出现峰值;花中可溶性糖含量先升高后降低。根和根茎内龙胆苦苷的含量明显高于地上器官,在整个生育期内一直维持较高水平,并在6月中下旬出现1个峰值;茎中的龙胆苦苷含量随植株发育逐渐降低并趋于平稳;叶中的龙胆苦苷含量较低,变化平稳;花中的龙胆苦苷含量初期逐渐升高,果期开始下降。地下器官中的可溶性糖和龙胆苦苷变化有一定的相关性,结合产量及效益等因素,龙胆适宜的采收期应在花果期之后。     

滇龙胆草7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶基因的克隆与表达分析

克隆滇龙胆7-脱氧番木鳖酸-7-羟化酶基因GrDL7H,并进行表达分析,为龙胆苦苷生物合成途径的解析奠定基础。根据滇龙胆转录组GrDL7H序列,使用RT-PCR(逆转录PCR)和3′RACE(cDNA末端快速扩增)技术从滇龙胆幼叶中克隆该基因及其启动子,并进行序列分析和组织特异性表达分析。结果表明,GrDL7H基因(登录号:KT306971)全长2 154 bp,包含5个外显子和4个内含子,其中GrDL7H基因(登录号:KP340980)开放阅读框长1 542 bp,编码513个氨基酸;GrDL7H蛋白质相对分子质量为59.08 ku,等电点(pI值)为8.88,属于CYP450蛋白超家族成员,可能定位于叶绿体;GrDL7H蛋白质无信号肽,为亲水稳定蛋白质,主要由α-螺旋和环构成;GrDL7H蛋白质具有CYP450蛋白质保守结构域,功能为参与氧化还原反应;滇龙胆GrDL7H蛋白质与黄金鸡纳树CcDL7H蛋白质的亲缘关系最近;GrDL7H基因启动子主要包含6个光应答元件、1个赤霉素应答元件、6个参与茉莉酸甲酯应答的顺式调控元件和1个热胁迫应答元件等;组织特异性表达分析结果表明,GrDL7H基因主要在叶片中表达。     

不同林药复合种植模式滇龙胆有效成分含量研究

【目的】以云南林药复合种植滇龙胆为研究材料,探讨不同种植模式滇龙胆有效成分积累特征。【方法】采用高效液相色谱法测定滇龙胆根茎部位中龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷和当药苷4种有效成分含量。【结果】7种复合种植模式滇龙胆中龙胆苦苷含量的平均值为67.95 mg/g,当药苷含量的平均值为1.85 mg/g,獐牙菜苦苷含量的平均值为9.69 mg/g,马钱苷酸含量的平均值为7.19 mg/g。其中滇龙胆-尼泊尔桤木复合种植龙胆苦苷含量最高,为(85.99±9.58)mg/g;滇龙胆-杉木复合种植当药苷含量最高,为(2.05±0.23)mg/g;滇龙胆-核桃复合种植獐牙菜苦苷含量最高,为(10.10±0.95)mg/g;滇龙胆-核桃复合种植马钱苷酸含量最高,为(9.74±1.94)mg/g。不同林药复合种植模式滇龙胆有效成分的相关性分析结果显示,龙胆苦苷和獐牙菜苦苷含量呈极显著正相关(R=0.35,P0.01),当药苷分别与马钱苷酸和獐牙菜苦苷含量呈极显著正相关(R=0.49,P0.01;R=0.41,P0.01)。【结论】不同林药复合种植模式下滇龙胆有效成分含量不同,其有效成分含量变化可能与其生长的小环境有关。     

红花1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶基因CtDXS1的克隆及表达分析

1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合成酶(1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase,DXS)是2-C-甲基-D-赤藓糖醇-4-磷酸(2-C-methyl-D-erythritol-4-phosphate,MEP)途径中的第一个关键酶,在植物萜类化合物生物合成中起着重要作用.为了明确红花...     

蓝莓果实花色素苷生物合成及其调控途径

蓝莓浆果因富含花色素苷而呈现蓝色或红色,具有较高的食用保健价值与商品价值,近几年受到广泛关注。从花色素苷的结构与性质、花色素苷生物合成的结构基因与调控基因以及光照调控花色素苷生物合成机制等方面进行了综述,最后展望了蓝莓花色素苷合成及其调控研究。     

不同栽培模式对滇龙胆中龙胆苦苷含量的影响

滇龙胆为龙胆科重要资源植物,本研究以云南临沧栽培滇龙胆为研究对象,利用高效液相色谱法测定滇龙胆根、茎、叶、花各部位中龙胆苦苷的含量.结果表明,栽培模式对滇龙胆不同部位龙胆苦苷的含量具有影响.木瓜茶树滇龙胆套种时根部龙胆苦苷含量最高(3.80 mg/g),荒坡种植时叶(1.34 mg/g)、花(1.22 mg/g)部龙胆苦苷含量最高;4种栽培模式滇龙胆根均可作为龙胆药材入药,质量较好.本研究结果可为滇龙胆质量控制、栽培技术研究提供基础数据.     

麻花艽生长、根产量和品质对不同种植密度的响应

试验采用单因素随机区组设计,以根产量、番木鳖酸含量、龙胆苦苷含量、獐牙菜苦苷含量为指标,研究了不同种植密度对麻花艽根产量和品质的影响,以期为麻花艽的人工栽培提供理论依据和技术指导。结果表明,种植株行距为20 cm×20 cm处理的根产量最高,且比最低的5 cm×5 cm处理高84.79%;但株行距为25 cm×25 cm处理的单株丛叶数、根径、主根长度、番木鳖酸含量、龙胆苦苷含量和獐牙菜苦苷含量最高。因此麻花艽在生产中最适宜的种植株行距为20 cm×20 cm～25 cm×25 cm,建议在生产中大力推广。     

植物萜类合成酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原酶研究进展

综述了近年来植物萜类合成酶1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原酶（DXR）的研究进展,指出DXR是萜类物质生物合成途径中的关键酶,从植物中克隆出的DXR基因结构相似,表达于植株的大部分器官中;它们大多与植物体内萜类物质的合成有关,植株体内上调DXR基因有可能增加萜类物质的含量。     

60CO-γ辐照灭菌对秦艽花中龙胆苦苷含量的影响

[目的]研究60CO-γ辐照灭菌对秦艽花中龙胆苦苷含量的影响。[方法]色谱柱为Luna C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-浓度0.1%醋酸(15∶85,V/V),检测波长为272 nm,建立HPLC含量测定方法测定秦艽花中龙胆苦苷的含量,并通过测定不同60CO-γ辐照剂量对秦艽花中龙胆苦苷含量来评价60CO-γ辐照灭菌对秦艽花品质的影响。[结果]秦艽花中龙胆苦苷含量随60CO-γ射线照射灭菌剂量的增大而明显降低。[结论]秦艽花及其相应产品不适用采用60CO-γ辐照灭菌。     

藏药大籽獐牙菜的化学成分研究

目的研究藏药大籽獐牙菜Swertia macrosperma C.B.Clark全草的化学成分。方法运用硅胶柱层析和高效液相色谱法进行化学成分的分离纯化,通过理化常数和波谱分析鉴定化合物结构。结果从大籽獐牙菜的80%乙醇提取物中分离得到9个化合物,分别鉴定为芒果苷(Ⅰ)、1-羟基-3,7,8-三甲氧基口山酮(Ⅱ)、1,8-二羟基-3,7-二甲氧基口山酮(Ⅲ)、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基口山酮(Ⅳ)、1,5,8-三羟基-3-甲氧基口山酮(Ⅴ)、1,7,8-三羟基-3-甲氧基口山酮(Ⅵ)、獐牙菜苦苷(Ⅶ)、龙胆苦苷(Ⅷ)、獐牙菜苷(Ⅸ)。结论上述化合物Ⅳ、Ⅵ～Ⅸ为首次从大籽獐牙菜中分离得到。 更多还原     

高速逆流色谱法分离制备抱茎獐牙菜中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷

[目的]建立抱茎獐牙菜（Swertia franchetiana H.Smith）中分离制备龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的高速逆流色谱法。[方法]采用溶剂系统为氯仿∶甲醇∶水=4∶4∶2（V/V/V）;上相为固定相,下相为流动相;上下相超声波脱气20min;转速850r/min;流动相流速2ml/min;检测波长254nm。所得产物用旋光仪测定其旋光度,计算其比旋光度,进行纯度鉴定。[结果]从100mg抱茎獐牙菜粗提物中得到龙胆苦苷14mg,獐牙菜苦苷27mg。测得龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的比旋光度[a]Dt分别为-196.3°和-126.6°,纯度较高。[结论]该研究可为用高速逆流色谱法大量制备龙胆苦苷和獐牙菜苦苷提供可行的方法。     

正交优选动态回流法提取秦艽中龙胆苦苷工艺

采用正交试验法,以龙胆苦苷含量为指标,研究溶剂用量、提取时间及提取次数对秦艽中龙胆苦苷提取率的影响,优选出合理的提取工艺。结果表明:以65%乙醇为溶剂,用动态回流法提取秦艽龙胆苦苷的最佳工艺条件是溶剂用量为药材的10倍,提取时间为30min,提取次数为1次。经验证性试验证明所优选条件可靠,可供秦艽中龙胆苦苷的提取工艺参考。     

花色苷的生物合成及其影响因素研究进展

花色苷是一种天然的水溶性色素,常分布于植物的花、果实、茎、叶细胞中,能赋予植物丰富的色彩。花色苷对植物具有重要的生理生态功能,能帮助植物适应和抵御不良环境,对人类还具有疾病预防和保健作用。研究结果证明,花色苷的生物合成至少需要苯丙氨酸解氨酶(PAL)、查尔酮合成酶(CHS)、查尔酮异构酶(CHI)、黄烷酮-3-羟基化酶(F3H)、类黄酮-3′-羟化酶(F3′H)、类黄酮-3′,5′-羟化酶(F3′5′H)、二氢黄酮醇-4-还原酶(DFR)、花色素合成酶(ANS)、类黄酮3-O-葡萄糖基转移酶(3GT)等酶共同参与,同时受内在因素与外在因素的共同调控,本文重点从花色苷生物合成及影响因素两方面进行综合评述,为花色苷的生物合成及开发和利用研究提供基础。     

坚龙胆中龙胆苦苷含量的测定

为扩展坚龙胆中龙胆苦苷含量测定方法及坚龙胆药材资源的更好利用和临床应用,采用高效毛细管区带电泳法(简称HPCE)测定坚龙胆中龙胆苦苷含量,并对坚龙胆的不同部位、不同炮制品中龙胆苦苷含量进行测定。结果表明:HPCE法测定龙胆苦苷在0.06～0.48 mg/mL呈良好的线性关系(r=0.999 3),平均回收率为101.31%,RSD为1.99%,该方法准确性、重现性好;坚龙胆不同部位、不同炮制品中龙胆苦苷含量有较大差异,其根含量>叶含量>茎含量,生品>炮制品。     

宁夏产秦艽中龙胆苦苷分布状态研究

[目的]研究宁夏产秦艽中龙胆苦苷的分布状态。[方法]采用RP-HPLC测定宁夏产3种秦艽不同部位中龙胆苦苷的含量。[结果]根部龙胆苦苷的含量高于地上其他部位,而且秦艽最高,麻花秦艽次之,小秦艽最低;部分秦艽的花、叶或茎所含的龙胆苦苷超过中国药典2％的要求。[结论]考虑开发利用秦艽的地上资源。     

正交试验优选龙胆炮制工艺的研究

[目的]比较龙胆生品、酒炙、姜炙、甘草炙、炒炭等不同炮制品中龙胆苦苷的含量,并利用正交试验进一步优化其炮制工艺,探讨提高龙胆苦苷含量的最佳炮制工艺。[方法]分别对龙胆药材进行不同的炮制处理,采用超声法进行提取,利用高效液相色谱法(HPLC)分别测定其含量,选择龙胆苦苷含量最高的样品进行正交试验,进一步优化炮制工艺。[结果]龙胆不同炮制品中酒炙龙胆的含量高于其他炮制品。当炮制温度为100℃,闷润时间为1 h,龙胆与黄酒用量比例为5∶1时,龙胆苦苷含量最高。[结论]酒炙法是适用于龙胆的炮制方法,且最适宜的炮制条件为炮制温度100℃、闷润时间1 h、龙胆与黄酒用量比例5∶1。     

宁夏栽培秦艽中龙胆苦苷含量的影响因素研究

[目的]考察生态及人工因素对宁夏栽培秦艽中龙胆苦苷含量的影响,为评价栽培秦艽的质量、开发利用当地秦艽资源和确保人工种植的品质提供科学依据。［方法]采用PR-HPLC测定秦艽中龙胆苦苷的含量。[结果]产地、生长年限、采收季节、肥料类型及施肥水平等因素对宁夏栽培秦艽中龙胆苦苷的含量都产生影响。［结论]宁夏隆德适合大面积种植秦艽;在秋季采收3年生秦艽为宜;单一使用草木灰和复合使用尿素、磷肥为5.0、20.0 kg/hm^2栽培秦艽时,龙胆苦苷的含量最高。     

滇龙胆优质种质筛选及离体培养条件优选研究

以大理州不同居群滇龙胆(Gentiana rigescens Franch.ex Hemsl.)、同一居群不同植株为试验材料,采用高效液相色谱法(HPLC)对滇龙胆根及根茎中龙胆苦苷的含量进行测定;再以龙胆苦苷含量≥7.0%的优质种质资源为外植体,采用正交试验设计方法研究培养基、蔗糖浓度、pH及培养温度对滇龙胆离体培养植株再生的影响。结果表明,大理州6个居群滇龙胆根及根茎中的龙胆苦苷含量较高,不同居群间龙胆苦苷含量具有显著差异(P0.05),以鹤庆县居群的龙胆苦苷含量最高(80.70 mg/g),含量最低的巍山县居群也超过国家药典规定标准的2倍多;同一居群内不同植株滇龙胆根及根茎中龙胆苦苷含量差异较小,只有云龙县居群不同植株间具有显著差异(P0.05),其他居群不同植株间无显著差异(P0.05);滇龙胆生长点离体培养及植株再生最适培养基和培养条件是1/2MS+30 g/L蔗糖+pH 5.2+20℃/25℃变温培养,再生植株诱导率最高可达88.9%,试验初步建立了滇龙胆离体培养及植株再生体系。     

不同初加工滇龙胆HPLC指纹图谱及其有效成分含量测定

建立不同初加工方法滇龙胆(Gentiana rigescens)样品的高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,并测定其中马钱苷酸、獐芽菜苦苷、龙胆苦苷和当药苷4种有效成分含量,结合化学计量学方法对4种有效成分含量测定结果进行主成分分析(Principal Component Analysis,PCA),对9种初加工方法进行评价。结果显示,样品间相似度高于0.960。经水洗净后室内通风干燥处理的滇龙胆中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、当药苷含量最高,分别为(5.89±0.23)、(15.62±0.84)和(3.79±0.16)mg/g,微波带皮处理的滇龙胆中马钱苷酸含量最高,为(8.58±1.48)mg/g,4种有效成分总含量达到(27.67±6.09)mg/g。主成分分析结果显示,前2个主成分累积贡献率为86.822%,与4种有效成分的线性关系为F_((PC1))=-0.003X_1+0.409X_2+0.31X_3+0.398X_4,F_((PC2))=0.875X_1-0.168X_2+0.329X_3-0.078X_4;计算不同初加工滇龙胆的主成分综合得分排名,带皮水洗后室内通风干燥滇龙胆综合得分最高。不同初加工处理对滇龙胆有效成分的含量会产生影响,其中带皮水洗后通风干燥的传统初加工方法对滇龙胆品质影响最小,是理想的初加工方法。     

乙醇浓度对宁夏六盘山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响

[目的]探讨乙醇浓度对宁夏六盘山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响。[方法]以室温冷浸为提取方法,采用HPLC测定秦艽中龙胆苦苷的含量,比较浓度45%、55%、65%和75%的乙醇对宁夏六盘山栽培秦艽中龙胆苦苷提取率的影响。[结果]采用浓度45%、55%、65%和75%的乙醇提取的秦艽龙胆苦苷提取率分别为12.50%、13.26%、14.53%和14.42%;当乙醇浓度为65%时,提取率最高。[结论]乙醇浓度对宁夏六盘山栽培的秦艽中龙胆苦苷的提取率有明显影响,以浓度65%的提取率最高。