猪流行性腹泻与传染性胃肠炎混合感染的综合防制

猪流行性腹泻（PED）与猪传染性胃肠炎（TGE）都是由冠状病毒引起的急性、高度接触性肠道传染病,以呕吐、严重腹泻和脱水为主要特征。近年来,该类疾病在养猪场流行愈来愈严重,并多混合感染,很难从临床症状上区别开来,因此习惯上将二者合称为“冬季拉稀病”或“雪风灌肠”。     

反义RNA介导的抗猪传染性胃肠炎病毒感染

构建了重组逆转录病毒表达质粒plxas-N,该质粒能表达互补猪传染性胃肠炎病毒N基因全长的反义RNA序列。用质脂体方法将重组质粒plxas-N转染至PA317细胞中,经抗生素G418（500μg/ml）筛选出稳定的产毒细胞克隆。分别扩大培养细胞克隆,取其上清液感染小鼠成纤维细胞NIH3T3,测定细胞克隆产生的重组病毒滴度,并用高滴度重组病毒感染IBRS2细胞。提取被感染的IBRS2细胞的总RNA,RT-PCR证明plxas-N整合到IBRS2细胞基因组。通过TGEV分别感染IBRS2和IBRS2抗性细胞产生的病变,结果表明该反义RNA对病毒的复制有抑制作用,其抑制率近50%。     

猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白在转基因玉米中的表达

本研究拟构建携带猪传染性胃肠炎病毒纤突糖蛋白基因(TGEV-S)的转基因玉米植株并检测其表达情况。首先利用PCR方法自携带TGEV-S基因的重组质粒中扩增2.2kb的S基因片段,然后插入植物表达载体pBAC176中,该表达载体以编码除草剂草甘膦抗性的EPSP基因作为选择标记,目的基因以双增强子的CaMV35S(E35S)及其玉米Hsp70第一内含子为驱动。以授粉后10～12d约0.5～1mm大小的玉米幼胚为受体,用基因枪进行转化,经过愈伤组织诱导、草甘膦抗性筛选和分化再生培养,先后获得74株转化再生植株。利用PCR和Southern blot检测表明,T0代转基因苗有9株检测结果为阳性。T1代转基因玉米株系经PCR检测有14个转基因株系为阳性,初步确定了目的基因在这些转基因玉米中的稳定整合。进而通过间接ELISA分析初步确定目的基因在7个T1代转基因玉米株系获得了表达。研究结果为进一步研究表达TGEV-S转基因玉米的生物学活性奠定了基础。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因不同编码区的表达和反应原性鉴定

通过原核表达系统表达猪传染性胃肠炎病毒( TGEV) S基因不同编码区,以鉴定不同编码区表达产物与TGEV抗体的结合能力。在对TGEV S蛋白抗原位点分析的基础上,针对S蛋白N端的4个抗原位点C、B、D和A,设计引物分别扩增含C、B位点的TCB片段(411 bp)、含D位点的TD片段(441 bp)和含A位点的TA片段(456 bp),经克隆测序后分别插入原核表达载体pET-32a中进行表达,SDS-PAGE电泳显示各片段均高效表达,表达的TCB片段、TD片段和TA片段融合蛋白大小分别为34.6,35.1,36.1 kDa。 Western Blot结果表明,表达蛋白与TGEV感染猪阳性血清和His标签抗体均产生阳性反应。结果显示,3个S基因编码片段均具有与TGEV抗体结合的能力,为进一步鉴定不同编码区的免疫原性及抗原保护能力奠定了基础。     

不同佐剂对猪传染性胃肠炎病毒S蛋白和猪流行性腹泻病毒S蛋白免疫原性的影响

本研究旨在探究不同佐剂对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白和猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白免疫原性的影响。IPGT诱导重组表达菌株Rosetta(DE3)-pET28a-TGEV-S2/3和BL21(DE3)-pET28a-PEDV-S1/2/3,制备重组蛋白TGEV-S2、TGEV-S3、PEDV-S1、PEDV-S2和PEDV-S3,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,将重组蛋白等量混匀分别与3种佐剂ISA 71VG、ISA 201VG和ISA 15AVG进行乳化制备免疫原免疫蛋鸡;Western blot检测蛋鸡血清抗体效价,免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体与病原的反应活性;监测鸡群平均日增重。结果显示,重组蛋白TGEV-S2、TGEV-S3、PEDV-S1、PEDV-S2和PEDV-S3的分子量依次为25 ku、28 ku、26 ku、24 ku和21 ku。Western blot分析显示,5种蛋白均具有良好的免疫原性;疫苗二次免疫后7天抗体效价达到高峰,ISA 201VG佐剂组、ISA 71VG佐剂和ISA 15AVG佐剂组组最高抗体效价依次为64000倍、32000倍和8000倍,对照组未检测到特异性抗体;ISA 71VG和ISA 201VG组对产蛋率下降相对较大,ISA15AVG 佐剂疫苗免疫组对产蛋率影响相对较小,免疫后7天后试验组产蛋率恢复正常。ISA 71VG佐剂组蛋鸡平均日增重显著降低,ISA 201VG和ISA 15AVG佐剂组蛋鸡平均日增重与对照组无显著差异;ISA 201VG佐剂组血清抗体与病毒反应活性良好,中和效价可达1:256。ISA 201VG佐剂配伍的疫苗免疫效果优于其他两种佐剂疫苗。     

猪传染性胸膜肺炎的防治

贵州省剑河县南加镇某养殖场5头断奶仔猪突然发病,表现为体温升高达42℃,精神沉郁,出现短暂的腹泻和呕吐等;初期病猪躺卧,无明显的呼吸道症状,渐渐出现心脏衰竭,全身皮肤发绀;后期出现严重的呼吸困难,呈犬坐势,张口呼吸,濒死前口和鼻腔中有大量的带血泡沫。笔者对病猪肌注恩诺沙星20毫克／头,     

浅谈猪支原体肺炎的防治

<正>猪支原体肺炎,又称猪地方流行性肺炎,俗称猪气喘病。该病是由猪肺炎支原体引起的猪的一种慢性、接触性传染病。不同品种、日龄、性别的猪都有易感性,一年四季均可发生。患猪和带菌猪是该病的传染源,传播途径主要为呼吸道。该病潜伏期长、病程长,病原体在猪体内存在时间长,患猪在耐过或治愈后半年,甚至更长时间,仍可带菌、排菌。因此,猪场发病后如果净化不彻底,又会造成新进猪只感染,再次发生猪气喘病。     

猪流行性腹泻的综合防制

猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种肠道传染病,以水样腹泻、呕吐、脱水为特征。其临床表现与猪传染性胃肠炎很难区别。由于本病常发生于冬季,因此人们一般把本病归入猪的冬季腹泻病之列。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点的克隆及原核表达载体的构建

【研究目的】对猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点进行克隆和原核表达载体的构建。【方法】参考GenBank上公布的TGEV S基因A抗原位点序列,应用Primer6.0设计一对含酶切位点的引物,用于RT-PCR扩增A抗原位点目的片段,将扩增产物连接于paesy-T克隆载体上构建克隆载体,用EcoR I和Xhol I对表达载体PET-32a（+）和重组质粒进行酶切,将酶切产物亚克隆至PET-32a（+）多克隆位点上,连接、转化至BL21(DE3),构建A位点的原核表达载体,并对阳性重组质粒进行酶切、PCR和测序鉴定。【结果】所扩增的目的片段的大小为534bp,与原核表达载体连接后,经核苷酸及推导的氨基酸序列分析表明,该基因与其它猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性,说明成功地构建了TGEV S 基因A抗原位点的原核表达载体。【结论】TGEV S 基因A抗原位点原核表达载体的成功构建,填补了中国国内单独针对此位点进行研究的空白,也为TGEV诊断方法的建立提供良好的技术基础。     

猪传染性胸膜肺炎与伪狂犬病混合感染的诊治

猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌引起的猪呼吸系统的一种严重接触性传染病，多在4～5月和9～11月发生。急性型病死率很高，慢性型常能耐过。猪伪狂犬病一年四季均可发生，但多发生于冬、春季，发病猪主要是15日龄以内仔猪，死亡率可达85％，常给养猪业造成很大的经济损失。笔者在门诊中遇到一起猪传染性胸膜肺炎与伪狂犬病混合感染的典型病例，现介绍如下：     

猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白亲和肽的原核表达及其病毒亲和性分析

为了研究猪传染性胃肠炎病毒膜蛋白(M蛋白)亲和肽的病毒亲和性,建立快速有效的TGEV检测方法,设计了1条含有TGEV M蛋白亲和肽的串联基因,核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工基因合成获得了含有M蛋白亲和肽基因的重组质粒pUC57-MQHT。然后,根据合成基因的序列,设计合成了1条特异性引物,以pUC57-MQHT为模板,通过PCR获得了150 bp的TGEV M蛋白亲和肽基因。亲和肽基因通过BamHⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a和pGEX-6p-1,获得重组质粒pET-32a-MQHT和pGEX-6p-MQHT。重组质粒经BamHⅠ单酶切和BamHⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-MQHT和GST-MQHT,分子质量分别为25,31 ku。切胶纯化后,重组蛋白TRX-MQHT和GST-MQHT分别经His标签单克隆抗体和GST标签单克隆抗体鉴定,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。Western Blot分析表明,2种重组蛋白可与TGEV特异性结合。Dot-ELISA分析表明,在TGEV滴度为1×10~3,5×10~2,2.5×10~2 TCID50/mL时2种重组蛋白都可显示出阳性反应,而在1.25×10~2 TCID50/mL滴度时无可见斑点,具有良好的TGEV亲和性。阻断试验表明,1∶100或1∶200稀释的TGEV阳性血清可完全阻断TGEV H株(1×10~5 TCID50/mL)与2种重组蛋白的结合,特异性良好。为建立TGEV诊断方法奠定了一定的理论和物质基础。     

猪增生性肠炎的诊断与防治

猪增生性肠炎是由胞内劳森菌引起的猪接触性传染病，是在肠道出现单纯增生性变化的基础上引发坏死性、局部性及出血性肠炎等一系列病理变化过程。该病以回肠和结肠段的黏膜呈腺瘤增生发炎为主要特征，主要类型有慢性型、亚临床型和急性型。现将该病的诊断和防治报道如下：     

鸭传染性法氏囊病的诊断与综合防治技术

鸭传染性法氏囊病是鸭的一种急性、高度接触性传染病。死亡率高、淘汰率高,影响增重,同时可导致免疫抑制,造成免疫失败,使鸭群对其他病原的易感性增加。现将鸭传染性法氏囊病的诊断与综合防治技术介绍如下,以期为临床生产提供一些帮助。     

猪衣原体病的诊断与防治体会

猪衣原体病又称鹦鹉热,主要是由鹦鹉热衣原体感染引起不同猪群的一种接触性传染病。临床表现为不同品种、年龄的猪群都可感染,以妊娠母猪和幼龄仔猪最易感。妊娠母猪表现流产,产死胎、木乃伊胎和弱仔;新生仔猪出现关节肿大、肺炎、肠炎、脑炎和结膜炎;种公猪出现睾丸炎、附睾炎、     

牛传染性腹泻病的防治

在牛养殖过程中腹泻是一种较为常见的疾病，一旦发生传染性腹泻便会影响到养殖户的经济收益。牛传染性腹泻的病原体可能为细菌病毒、寄生虫等，为了避免遭受经济损失养殖户在牛养殖过程中要提高对传染性腹泻病的重视。基于此，本文阐述了牛传染性腹泻的发病机理及造成传染性腹泻的主要病因，分析了牛传染性腹泻的临床症状，提出防治牛传染性腹泻的有效对策，以及日常养殖过程中应注意的预防措施。     

猪传染牲胃肠炎与流行牲腹泻的鉴别诊断

两病简介,猪传染性胃肠炎（TGE）,该病发生有明显的季节性,常发于深秋、冬季和早春,可通过消化道和呼吸道感染。1周龄内哺乳仔猪病死率可高达100％。症状：仔猪突然呕吐和腹泻,几天内可波及全群。粪便呈黄白色或浅绿色,内含未消化的凝乳块,恶臭。患病仔猪很快出现脱水症状,1周龄内仔猪常于发生腹泻后2～4天死亡。随着年龄的增长,30日龄后少见死亡。成年猪的临床症状只限于腹泻、减食,偶尔会呕吐,排糊状至水样粪便,粪便呈黄灰色、灰白色不等,恶臭,通常在1周内恢复正常。     

治疗猪传染性萎缩性鼻炎新方法

猪患传染性萎缩性鼻炎后，如治疗不及时或不当,则生长停滞,有的成为僵猪，重症者死亡,给养殖业造成严重的经济损失。     

鸡传染性鼻炎的防治

鸡传染性鼻炎是由副鸡嗜血杆菌引起的一种急性上呼吸道传染病,特征是患鸡流泪、流涕,鼻窦部肿大,上呼吸道黏膜发炎,雏鸡生长停滞,产蛋鸡群产蛋率显著下降,可给养鸡业造成较大的经济损失。 一、流行病学     

鸭传染性浆膜炎的防治

养殖白鹜鸭已经成为许多地方农民致富的好项目,但在养殖过程中要着重防范危害较大的鸭传染性浆膜炎。鸭传染性浆膜炎又名鸭疫巴氏杆菌病,是侵害雏鸭的一种慢性或急性败血性传染病。其特征是发生纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎及关节炎。     

猪病毒性腹泻及防治措施

在养猪生产中，病毒性腹泻是消化道疾病中危害最大的一类传染病，可引起仔猪死亡、育肥猪生长期延长、饲料报酬降低、药费开支增加、管理人员劳动强度加大等问题，同时使整个生产计划遭到破坏。目前流行的猪病毒性腹泻主要有传染性胃肠炎、流行性腹泻、轮状病毒等。如有慢性猪瘟、仔猪副伤寒、大肠杆菌及梭菌性肠炎等并发症，将使病情更为复杂。所以，猪病毒性腹泻应引起广大养殖户足够的重视。