吉林省牛病毒性腹泻病毒与牛肠道病毒混合感染的流行病学调查

应用检测牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)与牛肠道病毒(bovine enterovirus, BEV)抗原的双抗体夹心ELISA试剂盒,分别对2019-2020年采集于吉林省5个地区的738份粪便样品进行检测,并以PCR和免疫荧光试验对部分样品进行了确证。结果显示,吉林省不同地区、不同年龄及不同品种的牛群均存在BVDV与BEV混合感染,其中,BVDV感染率为10.26%～42.65%,BEV感染率为8.33%～20.83%,2种病毒的混合感染率为3.42%～14.71%。对不同品种牛群BVDV与BEV混合感染的检测结果显示,荷斯坦牛混合感染率为13.04%、西门塔尔牛为7.84%、延边牛为3.65%、利木赞及其他牛群为3.42%。检测不同年龄牛群混合感染的结果显示,各个年龄牛群均存在不同程度的BVDV与BEV混合感染,其中,成年牛群混合感染率高达57.63%,犊牛混合感染率为3.39%。PCR和免疫荧光试验检测结果显示,在BVDV与BEV混合感染的样品中均可同时扩增出或检测出BVDV与BEV的混合感染。本研究首次揭示出吉林省牛群的B...     

牛病毒性腹泻的流行病学调查与防控

[目的]了解陕西省榆林市奶牛场牛病毒性腹泻病毒（BVDV）感染情况。[方法]从5家奶牛场采集156份血清样品,采用双抗体夹心ELISA方法进行BVDV抗原检测。[结果]除1家未检测到BVDV,其余4家均存在BVDV感染,BVDV抗原阳性率0～6.38%,平均为4.49%(7/156),成母牛、犊牛、育成牛BVDV抗原阳性率分别为5.66%、4.44%、3.45%。[结论]陕西省榆林市5家奶牛场存在一定的BVDV流行和持续性感染牛,且感染率较高,建议奶牛场采取定期检测、引种检疫、免疫接种等综合防控方法,以有效净化BVDV。     

4 种呼吸道疫病血清学调查分析——以凯里市A奶牛场为例

[目的]为了解凯里市A奶牛场牛呼吸道疫病的流行情况。[方法]本次采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对142 份奶牛血清样品进行牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛病毒性腹泻（BVDV）、牛传染性鼻气管炎（IBRV）、牛支原体感染抗体检测。[结果]凯里市A奶牛场4 种呼吸道疾病病原普遍存在,BRSV阳性率为41.5%（59/142）;BVDV阳性率为40.1%（57/142）;IBRV阳性率为45.0%（64/142）;支原体阳性率为33.8%（48/142）。犊牛4 种呼吸疾病单一感染率为15.1%~45.5%;BVDV感染最严重,为45.5%;成年牛单一感染率为33.8%~45.1%。此外,奶牛场存在IBRV、BRSV、BVDV、支原体多种病原体混合感染,二重感染率为18.3％~30.2％;BVDV+IBRV感染率最高,为30.2%;三重感染以BVDV+支原体+IBRV感染率最高,为19.7%;四重感染率为9.9%。[结论]凯里市A奶牛场存在4 种疫病,有不同程度的病原体感染,应加强对上述病原体的流行控制,提高奶牛场管理水平,减少奶牛场疫病发生和经济损失。     

青藏高原牦牛感染BVDV和BEV的分子流行病学调查

为了解青藏高原地区牦牛牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛肠道病毒(BEV)的感染情况,应用RT-PCR对青藏高原地区(西藏、青海、四川和云南)共计222份出现腹泻症状的牦牛粪便样品开展了分子流行病学调查。从222份样品中,检出44份BVDV阳性,BVDV阳性检出率为20%(95%CI:15.5%~25.6%);检出65份BEV阳性,BEV阳性检出率为29.4%(95%CI:24.1%~35.0%);BVDV/BEV混合感染阳性率为4.8%(95%CI:2.5%~8.0%)。结果表明,所有被检地区牦牛均存在BVDV和BEV感染,且部分地区感染较为严重,有混合感染的情况。研究结果旨在为青藏地区牦牛腹泻的综合防控措施提供基本数据,丰富BVDV和BEV的分子流行病学调查资料。     

河北省唐山市奶犊牛病毒性腹泻流行病学调查

试验旨在掌握河北省唐山市13个县（市、区）奶牛场奶犊牛病毒性腹泻病原的流行状况,有效防控奶犊牛腹泻。采集唐山市不同地区38个奶牛场腹泻犊牛粪便样品788份,提取腹泻粪便样品中的基因组RNA。根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）E2基因、牛轮状病毒（Bovine rotavirus,BRV）VP6基因、牛冠状病毒（Bovine coronavirus,BCV）N基因序列,利用Primer Premier 5.0软件分别设计特异性引物,采用PCR方法检测粪便样品中这3种基因,利用Excel 2007对不同地区、不同季节和混合感染病原检测结果进行汇总分析。在采样范围内的788份犊牛腹泻粪便样品中,BVDV、BRV和BCV阳性检出率分别为29.82%（235/788）、29.44%（232/788）和18.02%（142/788）;在所有被检地区,滦南县BVDV感染率最高,阳性检出率为45.38%（59/130）,汉沽区BRV和BCV感染率最高,阳性检出率分别为55.00%（22/40）和37.50%（15/40）;从采样季节来看,春季、夏季和秋季BRV感染率最高,阳性检出率分别为27.71%（46/166）、39.58%（114/288）和19.89%（39/196）,冬季则以BVDV感染为主,阳性检出率为52.17%（72/138）;从混合感染情况来看,以BRV＋BCV二重混合感染为主,感染率为8.37%（66/788）。河北省唐山市各地区腹泻犊牛群中均存在BVDV、BRV和BCV感染,以BVDV、BRV单一感染为主。     

青海省湟中县牦牛病毒性腹泻5种相关病原的检测与分析

为了掌握湟中县牦牛病毒性腹泻病原的流行现状,对湟中县内11个乡镇的138份腹泻牦牛粪便样品进行了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛肠道病毒(BEV)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCV)和牛星状病毒(BAstV) 5种病毒性腹泻致病原进行检测与分析。结果:BVDV、BEV、BRV、BCV和BAstV的平均感染率分别为44. 93%、21. 74%、8. 70%、5. 07%和6. 52%,5种病原中BVDV和BEV在所有乡镇均有流行,BRV、BCV、BAstV在部分乡镇呈散发性流行; 5种病原在1～6月龄犊牦牛中的检出率明显高于6月龄以上成年牦牛。138份腹泻牦牛中存在BVDV、BEV、BRV、BCV、BAstV的单独感染和混合感染,总单感率为53. 62%;共存在10种混感型,总混感率为15. 22%。表明湟中县牦牛存在BVDV、BEV、BRV、BCV和BAstV的感染,且混合感染情况复杂,应引起高度重视。     

河南省规模化奶牛场牛病毒性腹泻流行病学调查

为了解河南省奶牛场牛病毒性腹泻(BVD)的流行情况,本试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法对2019年12月—2020年9月采集的河南省40个规模化奶牛场5 486份血清进行检测。结果显示：河南省奶牛场5 486份血清中,BVDV抗原阳性率为1.77%;泌乳牛、后备牛和犊牛的BVDV抗原阳性率分别为1.73%、2.31%和1.12%;豫东、豫南、豫西、豫北和豫中地区的BVDV抗原阳性率分别为1.16%、3.49%、1.62%、1.59%和1.48%,豫东和豫南地区间BVDV抗原阳性率差异显著(P<0.05);不同年龄间BVDV抗原阳性率差异不显著(P>0.05)。由此可见,河南省奶牛场存在BVDV感染,其中豫南地区的BVDV感染率最高,后备牛的BVDV感染率最高。     

青海西宁牦牛病毒性腹泻疫病病原学调查与分析

为掌握青海省西宁市牦牛群中病毒性腹泻疫病各种致病原的流行情况,本试验采用RT-PCR方法对西宁市74份腹泻牦牛粪便样品进行了BVDV、BRV、BEV、BCV、BAstV的病原学检测与分析,结果显示:西宁市大部分地区均存在BVDV、BRV、BEV、BCV、BAstV的流行,以湟源县的流行最为严重,BVDV、BRV、BEV、BCV、BAstV平均阳性感染率分别为37.84%、27.03%、22.97%、5.41%、2.70%,以BVDV的感染最为严重。共存在BVDV、BRV、BEV、BAstV 4种单感型以及BVDV/BRV、BVDV/BEV、BVDV/BCV、BRV/BEV、BRV/BCV、BVDV/BRV/BEV、BVDV/BRV/BCV 7种混感型,混合感染型较多,混合感染情况较复杂。表明青海省西宁市牦牛病毒性腹泻中存在多种致病原的单独感染以及混合感染,且混合感染现象严重,为西宁市牦牛病毒性腹泻疫病的综合防控积累了资料。     

攀西地区牛肠道病毒遗传变异分析

为了解攀西地区牛肠道病毒(BEV)遗传进化关系,本研究采集新鲜牛粪便,应用RT-PCR方法对样品进行检测,对BEV分离株5’UTR进行克隆、测序,应用生物信息软件进行遗传进化关系分析。结果显示：攀西地区牛场BEV感染率达13.98%,其中E种BEV感染率为4.30%(4/93),F种BEV感染率为9.68%(9/93);同一奶牛场内存在E种和F种BEV感染;攀西地区BEV分离株与国内其他地区BEV毒株具有较高的同源性(73.1%～96.5%);攀西地区BEV分离株间同源性达75.5%～99.8%。本研究为攀西地区BEV流行情况与防控提供理论参考依据。     

广西河池地区牛肠道病毒和牛冠状病毒流行病学调查及遗传变异分析

为了解广西壮族自治区河池地区牛肠道病毒(BEV)和牛冠状病毒(BCoV)的流行情况及毒株序列特征,本试验应用TRIzol法抽提核糖核酸(RNA),采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)对2021—2022年广西河池各地区采集得到的422份粪便样品进行病原检测及遗传变异分析。结果显示,广西河池地区BEV的检出率为3.23%～19.51%,BCoV的检出率为2.44%～4.62%,BEV和BCoV混合感染率为2.44%～4.44%。按照不同品种牛群对BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,西门塔尔杂交牛BEV感染率为13.99%,BCoV感染率为2.07%;本地黄牛BEV感染率为9.00%,BCoV感染率为0.95%;杂交水牛BEV感染率为33.33%,BCoV未发现感染;安格斯牛BEV和BCoV均未发现感染。按照不同年龄对BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,0～180日龄BEV感染率为22.11%,BCoV感染率为4.21%,大于180日龄牛群BEV感染率为7.95%,BCoV感染率为0.61%。按照不同养殖模式对牛群BEV和BCoV检测结果进行分析,结果显示,农户养殖B...     

牛病毒性腹泻病毒、牛冠状病毒和牛肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

根椐GenBank中已发表中病毒性腹泻病毒(BVDV)、中冠状病毒(BCoV)和中肠道病毒(BEV)基因的保守序列,设计合成引物,在建立单一病毒RT-PCR检测方法的基础上,继续优化条件,建立上述3种病毒的多重RT-PCR检测方法,并应用建立的检测方法对临床样本进行检测,计算符合率。结果表明,引物浓度分别为BVDV 0.5μL(20μmol/L),BCoV 0.25μL(20μmol/L),BEV 0.25μL(20μmol/L),退火温度为52℃时,可同时扩增BVDV的289bp,BCoV的458bp和BEV的732bp的特异性片段,对牛流行热病毒(BEFV)、牛轮状病毒(BRV)、牛副流感病毒3型(BPIV3)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)均无扩增。该方法最低能检出6.4pg的BVDV,1.28pg的BCoV和6.4pg的BEV的等量混合质粒模板。对24份临床腹泻病料进行检测,与单项RT-PCR检测的符合率为100.0%。本研究建立的多重RT-PCR检测方法,具有准确、快速、特异的特点,可用于临床混合感染的同时检测。     

2017—2018年山东省奶牛场犊牛腹泻相关病毒病原学检测

为了解山东省奶牛养殖场中引起犊牛腹泻相关病毒的流行情况，2017—2018年，在全省13个地区51家规模化奶牛养殖场，采集624份犊牛腹泻病料样品，进行牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛肠道病毒（BEV）、牛冠状病毒（BCoV）和牛轮状病毒（BRV）PCR检测，并对检测结果采用SPSS 20.0软件进行数据统计以及显著性差异分析（Pearson卡方检验）。结果显示：BVDV、BEV、BCoV、BRV个体检出率分别为34.58%、11.78%、8.84%、17.70%，群体检出率分别为47.83%、38.89%、35.71%、33.33%，BVDV检出率显著高于其他3种病毒（P<0.01），且有流行加重趋势；鲁西北、鲁中、鲁西南、半岛地区4种病毒的检出率有差异，其中鲁中地区的BVDV检出率明显高于其他地区（P<0.01）。结果表明，BVDV、BEV、BCoV、BRV 4种病原在山东省奶牛场中流行广泛，以BVDV流行最为严重，尤其是鲁中地区，且有流行加重趋势，成为导致奶牛场犊牛腹泻的主要病毒性因素，建议有针对性地开展防控与净化。本检测初步摸清了山东省不同地区引起奶牛犊牛腹泻相关病毒的感染情况，可为山东省制定奶牛腹泻病综合防控措施提供数据支撑。     

引起部分奶牛场呼吸道疾病的主要病毒性病原检测

近年来,我国部分地区奶牛场发生了以流黏性鼻液为主要症状的呼吸道疾病,经检测,排除牛支原体、牛巴氏杆菌感染。为探究其主要病毒性病原,从山东等4省(市)5家表现临床症状的奶牛场采集发病牛与无症状牛鼻拭子样品298份,开展牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛副流感病毒3型(BPIV3)PCR检测。结果显示:发病奶牛场IBRV与BVDV阳性率分别为28.9%、7.1%,BPIV3未检出;发病牛与无症状牛IBRV阳性率分别为42.6%、10.9%,BVDV阳性率分别为11.3%、1.6%;IBRV、BVDV混合感染率为5.7%,IBRV、BVDV混合感染占IBRV总感染数的19.8%,占BVDV总感染数的81.0%。结果表明,引起这些奶牛场呼吸道症状的主要病原可能为IBRV、BVDV,且混合感染较严重。本研究为奶牛场呼吸道疾病防控提供了依据。     

江苏规模化奶牛场BVD与IBR流行病学调查

为了解江苏地区规模化奶牛场牛传染性鼻气管炎(IBR)及牛病毒性腹泻病(BVD)流行与分布情况,采用商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对来自江苏省7个市和不同地区的13个大型规模化奶牛养殖场共540份血清中IBRV抗体进行检测,采用商品化ELISA试剂盒对来自江苏省5个市和不同地区的11个大型规模化奶牛养殖场共460份血清中BVDV抗体进行检测,同时从中随机采集100份血清样本,采用巢式逆转录聚合酶链式反应(nRTPCR)进行BVDV抗原检测与基因分型。结果表明:不同牛场的BHV-Ⅰ抗体阳性率为0%~82.1%%,平均阳性率为21.1%(114/540);不同牛场的BVDV抗体阳性率为0%~98%,平均阳性率为51.5%(237/460);不同牛场的BVDV抗原阳性率为0%~100%,平均阳性率为55%(55/100);对相应样本的BVDV抗原与抗体检测结果进行比较表明,抗原~+/抗体~+牛占40%(40/100),抗原~+/抗体~-牛占15%(15/100),抗原~-/抗体~-牛占35%(35/100),抗原~-/抗体~+牛占10%(10/100);基因分型结果显示,BVDV-Ⅰ型占11%(6/55),BVDV-Ⅱ型为78%(43/55),Ⅰ型与Ⅱ型混合感染占11%(6/55),未发现BVDV-Ⅲ型。研究表明,BVDV和BHV-Ⅰ在江苏省主要规模奶牛场普遍流行,但不同地区、不同牛场的阳性率存在明显差异,大部分牛场均能检测出抗原~+/抗体~-的持续感染牛,BVDV含基因Ⅰ、Ⅱ型,但主要以Ⅱ型感染为主。     

河南省牛病毒性腹泻病毒分子流行病学调查与分析

为了解河南地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)的感染情况及主要基因型,用商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒对来自河南省14个市和不同地区的40个规模化奶牛养殖场共5 486份血清中BVDV抗原进行检测,同时对ELISA方法检测的97份抗原阳性样本,用套式逆转录-聚合酶链式反应(nRT-PCR)进行BVDV抗原检测和基因分型。结果表明,A10奶牛场BVDV抗原阳性率最高,为7.8%(11/141),A11、A17奶牛场BVDV抗原阳性率最低,为0.66%(1/151)。不同牛场的BVDV抗原阳性率为0～7.8%,平均阳性率为1.77%;河南地区牛病毒性腹泻病毒的基因型均为BVDV-1型,未发现其他基因型。提示BVDV在河南省规模化奶牛场存在,但不同地区、不同牛场的BVDV阳性率不同,主要以BVDV-1型感染为主。     

新疆南疆地区某规模奶牛场牛病毒性腹泻抗原检测

为了解新疆南疆地区某规模化奶牛场牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrheavirus,BVDV)感染情况,采用血清流行病学调查方法,对该规模化奶牛场2358份牛血清样品、35份新生犊牛耳组织样品进行BVDV抗原ELISA检测。结果显示,该场有9份血清样品为BVDV抗原阳性,阳性率为0.38%;对阳性样品的来源牛间隔21d后采血复检,检出1份阳性血清样品,确认该样品来源牛为持续性感染牛;在新生犊牛耳组织中,未检测出BVDV。本次抗原检测证明,新疆南疆地区规模化奶牛场存在一定的BVDV流行和持续感染,建议督促牛场积极开展BVDV净化工作。     

牛病毒性腹泻病毒、牛肠道病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒四重一步法RT-PCR鉴别检测方法的建立与应用

为了建立一种能够同时、快速鉴别检测牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛肠道病毒（BEV）、牛轮状病毒（BRV）、牛冠状病毒（BCV）的方法,根据BVDV 5’UTR基因、BEV 5’UTR基因、BRV VP6基因、BCV N基因设计引物,建立了能够同时鉴别检测BVDV、BEV、BRV、BCV的四重一步法RT-PCR方法,该方法检测IBRV、BPIV-3、BRSV均为阴性,对BVDV、BEV、BRV、BCV的核酸检测下线分别为3.28、28.2、23.6、25.0 pg,与现有标准或商品化RT-PCR试剂盒的符合率均为100%,批内和批间重复性试验的检测结果均完全一致,检测222份临床样品的BVDV、BEV、BRV、BCV阳性率分别为15.32%、18.02%、6.31%和4.05%。说明四重一步法RT-PCR方法特异性好、灵敏度高、稳定性强,可用于BVDV、BEV、BRV、BCV的临床鉴别诊断、流行病学调查以及疫病防控。     

交叉引物扩增法快速检测牛病毒性腹泻病毒

[目的]牛病毒性腹泻病毒（BVDV）是一种可以引起牛腹泻的病原体,在中国分布广泛,给养牛业造成了巨大损失。快速发现和准确鉴定BVDV对后续管理和流行病学调查至关重要。[方法]本研究以5’UTR基因为靶点,应用交叉引物扩增（CPA）与免疫层析试纸相结合的检测方法对BVDV进行检测。[结果]CPA检测限为每次反应640 fg,温度为62℃,反应时间为60 min。未观察到与牛感染的其他病原体发生交叉反应。此外,使用CPA测定法对100份感染BVDV的现场样本进行准确评估。将CPA与常规PCR检测结果进行比较,结果显示,CPA比常规PCR具有更高的检出率。[结论]CPA检测是一种实用、有效的BVDV诊断工具。     

吉林省部分牛场BVDV、IBRV、BRSV的感染情况调查

为了解吉林省牛病毒性腹泻(BVD)、牛传染性鼻气管炎(IBR)、牛呼吸道合胞体病(BRS)的流行及其病原混合感染情况,在吉林省的9个地区随机采集了325份血清样品,采用ELISA血清抗体检测试剂盒与新型纳米PCR方法检测所采集样品。结果显示,ELISA检测BVDV抗体阳性243份,阳性率为74.77%,IBRV抗体阳性186份,阳性率为57.23%,BRSV抗体阳性90份,阳性率为27.69%,BVDV与IBRV混合感染率为31.69%;BVDV与BRSV混合感染率为9.54%,IBRV与BRSV混合感染率为1.54%,3种病毒混合感染率为17.23%。采用纳米PCR方法检测所有血清显示,BVDV抗原阳性42份,阳性率12.92%,未检出IBRV抗原阳性;BRSV抗原阳性29份,阳性率8.92%。BVDV与BRSV混合感染率为1.85%。     

东北地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻/黏膜病血清学调查

为了解东北地区牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(BVDV)的流行情况,本研究采用间接ELISA试验与套式RT-PCR分型检测方法对东北地区19个规模化奶牛场的1 198份血清进行了BVDV的抗体与核酸检测.结果表明,BVDV在东北地区呈散发性流行,抗体阳性率为23.5％,各奶牛场抗体阳性率在0～40％之间;BVDV核酸阳性的奶牛场均包括在抗体阳性的奶牛场中,并且均为BVDV Ⅰ型.结果提示,东北地区大部分奶牛场中存在BVDV污染,并且可能存在有持续性感染牛,应采取相应的净化措施对该病进行控制.