核酸适体在乳及乳制品检测中的应用

核酸适体技术是新型检测技术，因其特异性、高亲和性、快速、低成本等众多优点被广泛应用于乳及乳制品等动物源食品安全检测领域。本文对核酸适体筛选技术的原理和类别进行介绍，并对其在乳及乳制品中添加剂、激素、抗生素残留、真菌毒素、病原微生物污染检测等方面的应用和研究进展进行综述。     

核酸适体及其在疫病诊断上的应用

核酸适体是指采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体。鉴于适体特有的亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等特点,其被广泛应用于分析化学、基因调控、蛋白质组学和新药研发等领域。在疫病的检测方面,核酸适体逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已初步应用于生物芯片、生物传感器、分子信标等多种检测技术平台,并具有良好的敏感性和特异性,显示出了良好的应用前景。本文就适体技术及其在疫病诊断中的应用进展作一综述。     

检测病菌的一种新方法：—DNA探针技术

DNA 探针(又称基因探针或核酸探针)是指能识别被检核酸中特异性碱基序列的带有标记的一小段单链 DNA(或RNA)分子,即一个可与被检测的核酸序列进行互补的带有标记的单股核酸片     

核酸适体检测赭曲霉毒素A荧光方法的建立

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)普遍存在于谷物等粮食和动物饲料中,是一种可以引起癌症的霉菌毒素。为了快速检测OTA,利用荧光染料PicoGreen识别双链DNA原理,建立了一种基于核酸适体与PicoGreen检测毒素OTA的方法。在10 mmol/L Tris,120 mmol/L Na Cl,5 mmol/L KCl,20 mmol/L CaCl2(pH8.5)缓冲液中,PicoGreen与双链DNA结合后,释放的荧光在3 min内达到峰值(激发波长为480 nm,发射波长为520 nm)。从加样到荧光检测,整个流程可在40 min内完成。检测OTA的灵敏度为1μg/L;检测范围为1μg/L~200μg/L。特异性实验表明:OTA核酸适体-Pico Green方法与黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、桔毒素和玉米赤霉烯酮等霉菌毒素无交叉反应。本方法在检测敏感性和特异性方面与传统抗体ELISA方法相当(Kappa值为:0.857)。由于核酸适体成本比抗体低,因此本方法比抗体ELISA方法更具实用价值。     

现代生物技术在水产养殖中的应用

核酸探针技术通过分析病原生物的遗传结构。根据这段基因结构的序列，就可以设计可与其互补的DNA探针，与病原生物的DNA进行杂交，以此来确定病原携带者和传播者的分子生物学技术。该技术具有灵敏度高、特异性强等优点，近年来在对虾病毒病的检测中倍受青睐。     

应用~(32)P标记核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒的研究初报

本文在我国首次报道应用核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)。经培养、纯化IBRV,抽提IBRV全基因组DNA,用缺口翻译法标记上~(32)P,在硝酸纤维膜上进行打点杂交。试验结果表明,采用~(32)P标记的核酸探针,可检测出10Pg的IBRV—DNA,能明显区别IBRV感染细胞和未感染的正常细胞,具有相当高的灵敏度和特异性,同Dorman报道的结果相似。 应用核酸探针检测病毒核酸的技术,近年来有了突破性的进展,有的国外学者称之为第四代检测技术。其基本原理是利用放射性同位素标记的DNA或RNA(即核酸探针)与固定在硝基纤维素膜上或玻片上的单链核酸进行杂交,经过放射自显影,在X光片或感光乳胶中可看到特定的核酸片段的踪迹。由于这一技术具有灵敏度高,特异性强的优点,在医学临床诊断中已显示出它的优越性,文献报道日趋见多。在动物病毒研究方面已见到了用核酸探针检测蓝舌病,牛传染性鼻气管炎鸡马立克病,猪伪狂犬病、犬瘟热、传染性喉气管炎等病毒感染的报道。 Dorman,M,A在1985年首先报道了利用生物素标记的IBRV—DNA的HindⅢ酶切片段可检测出10pg(10~(-11)g)IBRV—DNA。随后,Dunn,D.C和Pacciarini,L以及Brunner,D也相继作了报道。我们用~(32)P标记的IBRV—DNA全基因组做为核酸探针,进行了一系列的研究,初步结果表明,我们     

核酸适体及其在疫病诊断中的应用

核酸适体是采用指数富集配体的系统进化技术从随机单链寡核苷酸库中筛选出的能与靶物质高特异性、高亲和力结合的配体.因其具有亲和力高、特异性强、精确识别、易体外合成与修饰等优点,逐渐成为抗体的代替或补充试剂,已成功应用于生物芯片、生物传感器、分子信标等多种疫病诊断技术平台,显示出了良好的应用前景,在未来的疫病诊断中将发挥越来...     

RNA干扰的研究进展

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是多种生物体内由双链RNA（double stranded RNA,dsRNA）介导同源mRNA降解的现象。这种现象广泛存在于生物界,是生物体抵御病毒或其它外来核酸入侵以及保持自身遗传稳定的保护性机制,以其高效率、高特异性等特性,较反义核酸、核酶、三链RNA等基因沉默技术显示了独特优势及广泛的应用前景。本文就其发现、分子机制及其应用等方面的研究进行综述。     

RNA干扰的研究进展

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是多种生物体内由双链RNA（double stranded RNA，dsRNA）介导同源mRNA降解的现象。这种现象广泛存在于生物界，是生物体抵御病毒或其它外来核酸入侵以及保持自身遗传稳定的保护性机制，以其高效率、高特异性等特性，较反义核酸、核酶、三链RNA等基因沉默技术显示了独特优势及广泛的应用前景。本文就其发现、分子机制及其应用等方面的研究进行综述。     

动物产品中腹泻性贝类毒素检测方法研究

为探讨小分子核酸适体快速检测动物产品中腹泻性贝类毒素的可行性,研究基于冈田酸(Okadaic acid, OA)核酸适体,构建了特异性适体辅助识别体系平台。结果显示,当体系中靶标OA被释放后,导致可结合标记酶催化产生不同程度的颜色反应,可以用肉眼进行初步判断;通过波长扫描显示在450 nm波长呈现最大吸收峰,测定其吸光度值,可反映出溶液中的靶标浓度。该体系平台方法具有操作步骤简便、对检测硬件要求低等优点,可用于基层养殖现场快速初筛检测中的使用。     

RPA技术及其在动物病原检测中的应用

分子检测技术是进行病原检测、鉴定和疾病诊断的重要手段。重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification，RPA）是一种新型核酸扩增技术，主要在能结合单链核酸（寡核苷酸引物）的重组酶、单链DNA结合蛋白（SSB）和链置换DNA聚合酶3种酶的作用下等温扩增DNA或RNA，具有操作便捷、特异性强、灵敏度高和反应迅速等优点，可实现对疾病的现场诊断。作者简述了RPA技术的反应体系组成、反应原理、引物和探针的设计以及扩增产物的检测方法等，介绍了RPA技术在动物重要病毒性、细菌性及寄生虫病原检测中的应用，分析了该技术的局限性，并对其发展前景进行了展望。     

核酸疫苗的特点及在畜禽疫病防制上的应用前景

核酸疫苗，又称基因疫苗，包括DNA疫苗和RNA疫苗，其中DNA疫苗又称为裸体DNA疫苗或裸DNA疫苗。与传统疫苗相比，核酸疫苗具有很多优点，被誉为是第三次疫苗革命。本文主要就核酸疫苗的特点、免疫机制与在畜禽疫病防制上的应用前景等方面简述如下，供参考。     

分子病毒学相关技术在预防兽医学上的应用

病毒（Virus）是广泛存在于人类、动物、植物及微生物体内的一类细小生物,结构非常简单,外面包以蛋白质组成的衣壳,核心为一种核酸DNA或RNA。这种核酸DNA或RNA储存着病毒生命特性的全部遗传物质——基因组。动物分子病毒学的研究于20世纪80年代末由结构基因组时代发展到功能基因组时代或称为后基因组时代。随着对动物分子病毒学研究的深入,     

DNA疫苗的特点及在不同动物中的应用

1特点 DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒DNA（或RNA）。可经一定途径进入动物体内，被宿主细胞摄取后转录和翻译，表达出抗原蛋白，此抗原蛋白能刺激机体产生非特异性和特异性免疫应答反应，从而起到免疫保护作用。     

小鼠基因组DNA提取方法比较研究

脱氧核糖核酸(DNA)作为大部分有机体和病毒的遗传物质,与生物的遗传与变异息息相关。很多研究都是基于核酸分析的基础开展的,对核酸的纯度要求很高。本研究采用4种常用方法提取小鼠基因组DNA,以探讨不同提取方法对DNA质量的影响。结果表明,酚/氯仿抽提法获得的DNA纯度较好,无RNA污染,但有少许蛋白质未剔除;试剂盒法提取到的DNA纯度高、核酸浓度大且无污染,但片段较小,可进行常规的PCR等核酸水平研究。     

动物预防用DNA疫苗的研究进展

动物预防用DNA疫苗又称核酸疫苗或基因疫苗，是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒DNA(有时也可是RNA)，它可经一定途径进入动物体内，被动物宿主细胞摄取后能转录和翻译表达出抗原蛋白，此抗原蛋白能够刺激机体产生非特异性和特异性两种免疫应答反应，从而起到免疫保护作用。     

核酸疫苗的研究与应用

核酸疫苗(nucleicacidvaccine)是指将含有编码某种抗原蛋白的外源基因(DNA或RNA)序列质粒载体作为疫苗,直接导入到动物细胞内,通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答,以达到预防和治疗疾病的目的。核酸疫苗又称为基因疫苗或裸DNA疫苗,核酸疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗。这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、DNA介导的免疫以及遗传免疫等。核酸疫苗与传统疫苗相比有许多优势。1核酸疫苗的研究历史核酸疫苗是由基因治疗发展而来的,1990年Wolff等发现,在小鼠肌肉组织内直接注射质粒DNA后,质粒及其携带的外…     

基于CRISPR/Cas系统的现场核酸检测技术

核酸检测技术在病原鉴定中发挥了至关重要的作用.传统核酸检测主要依赖聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术,但该技术难以满足便携式现场核酸检测需求.近年来发明的CRISPR/Cas生物传感技术可实现高灵敏度、高特异性、快速准确的现场核酸检测.本文重点探讨了CRISPR/Cas生物...     

鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒的研制

用特定引物通过PCR合成了经地高辛标记的鸡致病性外源性及内源性禽白血病病毒特异性核酸探针,通过交叉斑点分子杂交,这些探针将可用于检测病料样品中致病性外源性禽白血病毒特异性核酸的存在。利用此试剂盒,对从病料组织样品中提取的基因组DNA作交叉斑点分子杂交或对提取的DNA用相应引物扩增后的PCR产物作交叉斑点分子杂交,可在24～36h内完成检测并报告结果。     

NASBA技术及其在畜禽病毒检测中的应用

NASBA即核酸序列依赖扩增技术,主要用于扩增RNA,是由一对特异性的引物介导的、连续均一的、体外核酸序列等温扩增反应过程.该技术具有操作简便,特异性强,敏感性高,快速,高通量等优点,目前已经广泛应用于人类与动物的多种病毒性疾病的检测,具有良好的应用前景.在禽流感病毒、新城疫病毒、猪传染性胃肠炎病毒、口蹄疫病毒等的检测...