分子免疫学诊断技术在兽医学中的应用

免疫学在兽医中侧重于免疫血清学诊断和免疫防治。在疾病的诊治中更是依靠免疫学诊断技术快速、准确地诊断出传染病病原和传播途径,对于传染病的预防控制尤为重要。免疫学检测即是根据抗原、抗体反应的原理,利用已知的抗原检测未知的抗体,或是利用已知的抗体检测未知的抗原。由于外源性和内源性抗原均可通过不同的抗原递呈途径诱导生物机体的免疫应答,在生物体内产生生物T细胞的克隆扩增和效应增强,并分泌特异性的免疫球蛋白-抗体。由于抗原抗体结合具有特异性和专一性的特点,这种检测可以定性、定位、定量地检测某一特异的抗原或抗体。     

浅析影响口蹄疫O型液相阻断ELISA实验的因素

正液相阻断ELISA,是检测口蹄疫病毒抗体的国际标准,敏感性高,特异性强,判定结果客观,主要用于检测抗体,评价FMD疫苗的免疫效力,也就是疫苗免疫动物的抗强毒攻击能力。目前,民乐县动物疫病预防控制中心广泛采用ELISA法检测口蹄疫免疫抗体,评价免疫效果,为全县动物疫情预警提供有效依据。1 ELISA实验基本原理ELISA是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,过程包括抗原(抗体)吸附在固相载体上称为包被,加待测抗体(抗原),再加相应酶标记抗体(抗原),生成抗原(抗体)-     

鸡传染病的快速诊断方法:检测抗原

一提到血清学诊断,人们即会联想到检测抗体,很少想到检测抗原。血清学诊断包括两方面:一是检测抗体,另一是检测抗原。鸡患传染病不死时,2周后体内即产生对该病的抗体,可用已知的抗原检测出其抗体,只要对已知某病的抗原呈阳性,即可诊断为某病。抗体主要存在于痊愈鸡的血清中,鸡患病不死时,2周后血清中即可测出抗体,只要采取痊愈鸡的血清熏就可以检测出任何一传染病的抗体,非常方便熏检测抗原则较复杂,它没有统一的检测器官。因病而异,而且很少有人开展这方面的工作,这就是血清学方法广泛用于检测抗体的原因。1检测抗体与检测抗原的比较检测任…     

免疫组化技术在病原微生物检测中的应用

免疫组织化学技术(immunohistoehemistry technique,IHCT)简称免疫组化技术,又称免疫细胞化学技术,是指在组织细胞原位通过抗原-抗体反应和组织化学的显色反应,借助可见的标记物,对相应抗原或抗体进行定位、定性和定量检测的一种免疫检测方法.20世纪40年代,Coons应用荧光素标记抗体检测肺炎双球菌在肺组织内的分布,从而开创了组织化学的新篇章.     

ELISA和胶体金法在猪瘟病毒检测中的应用

为探讨胶体金检测技术和ELISA在猪瘟病毒检测中的应用,通过对西藏林芝地区某县采集的92个疑似猪瘟样品进行免疫胶体金免疫层析法与ELISA法检测猪瘟抗体和抗原,比较两法检测结果的符合率。结果表明,猪瘟胶体金法抗原和抗体检测阳性符合率为100%,ELISA法检测的阳性符合率为95%以上。猪瘟的胶体金法抗原和抗体检测阳性符合率较高,同时该结果与ELISA的抗原和抗体检测阳性符合率高,说明使用猪瘟疫苗进行免疫在西藏林芝地区某县可以取得95%以上的免疫效果。这两种方法操作方便、快速,适合于临床快速检测和疫病普查中高通量样品的筛查。     

PRRSV N蛋白抗原肽的预测、合成以及针对该抗原肽抗体的制备和应用

基于生物信息学、化学合成技术和免疫学技术,利用预测的抗原肽进行抗体的制备已被广泛地应用。本研究探讨了利用预测的抗原肽制备针对PRRSV N蛋白的特异性抗体。首先,利用生物学软件对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N蛋白进行抗原性预测,获得一个位于蛋白N端16个氨基酸的候选抗原肽。通过BLAST比对,发现该抗原肽在不同北美型毒株中高度保守。其次,采用Fmoc固相法进行抗原肽合成,并将合成的抗原肽通过MBS法偶联到KLH载体蛋白上。随后,将偶联好的抗原肽与弗氏完全佐剂或不完全佐剂混合,免疫新西兰大白兔,制备抗血清,并利用IgG亲和层析的方法纯化抗体。最后,利用ELISA、Western blot和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对抗体的特异性进行检测,结果显示,利用偶联好的抗原肽包被ELISA板,检测抗体的滴度,纯化抗体的滴度超过10~5;Western blot结果显示,该抗体(1∶2000)可以特异地识别PRRSV感染的Marc145细胞中的N蛋白,重要的是该抗体可以与不同毒株反应;IFA检测显示,该纯化的抗体(1∶100)可以检测PRRSV感染的细胞。因此,利用生物信息学软件预测的PRRSV N蛋白的抗原肽,能有效地应用于抗PRRSV N蛋白抗体的制备,制备的抗体不仅为研究PRRSV N蛋白奠定基础,而且为研究PRRSV与细胞相互作用提供了一个有效的工具。     

环病毒2型诊断技术研究进展

综述近年来在环病毒2型诊断技术方面所取得的研究进展以及研究成果。笔者查询与分析近年来有关环病毒2型诊断技术方面对应的学术研究成果以及期刊文献资料并对技术进展进行归纳与总结。当前对环病毒2型的诊断可以通过病毒抗原检测技术或者是病毒抗体检测技术的方式实现,前者技术分支包括间接免疫荧光法、以及聚合酶连反应法在内,后者技术分支包括竞争性酶联免疫吸附试验法、以及间接性酶联免疫吸附试验法在内。在对环病毒2型进行诊断的过程当中,病毒抗原检测以及病毒抗体检测均具有确切诊断效果,相关技术有待通过实验室以及实践分析的方式,验证其可行性与操作优势。     

鸡新城疫血凝抗体监测应注意的问题

在预防传染病时,某种传染病的免疫程序的制定、首免日龄的确定、免疫后机体应答反应的效果如何,及其间隔多长时间进行第二次免疫(重复免疫),都取决于机体内的抗体水平。抗体可存在动物的血清中,同时亦存在于鸡的蛋黄中,可以通过免疫监测的方法检测出来。但是在免疫监测的实际操作中,监测结果受诸多因素的影响。如在检测鸡ND抗体效价时应该注意如下问题。时应该注意如下问题。1.抗原方面免疫监测实质上是一个抗原抗体反应的过程。在此,抗原的效价一定得标定正确,每次监测之前一定先准确测定抗原的效价,应该是同时测2～3遍取其平均值,然后根…     

小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内代谢消长规律的研究

为研究小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内的代谢消长规律,试验通过建立小反刍兽疫N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法、H蛋白阻断ELISA抗体检测方法与血清中和抗体试验方法,分别检测了羊免疫疫苗后体内N蛋白抗体与H蛋白抗体在每个免疫阶段的代谢消长变化。结果表明:羊免疫小反刍兽疫疫苗后,血清内的N蛋白抗体与H蛋白抗体在6~8周时血清抗体效价较高,对应的羊体内中和抗体效价为1∶512,且效价至少可以持续到10周以上,2种抗体具有一定消长代谢规律的相关性。该研究结果也为以N抗原与H抗原为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法、竞争ELISA检测方法、间接ELISA检测方法以及双抗原夹心ELISA检测方法奠定了一定的理论依据。     

血清学检测在猪圆环病毒病中的应用

由于病原微生物（细菌、病毒及其他微生物）均可以刺激机体产生相应的抗体．而且这种抗体与其相应的抗原可发生特异性反应．所以在临床上根据这一原理．可利用已知抗原来鉴定病畜血液中相应的抗体．或特异性诊断血清（已知抗体）来鉴定其相应的病原体（抗原）．生产中用于检测抗体的比较多一些。     

猪血清学检测的意义及注意事项

血清学检测分析作为从猪体取得信息的一个有效途径,正日趋重要和广泛.临床兽医或养殖场主在养猪生产中,对于血清学检测结果进行正确地分析和判断,非常有助于从猪场获取有效的信息并依此作出正确的决策以及改进. 血清学检测,通常是指在体外进行的抗原抗体反应,其基本原理就是利用抗原可与相应抗体产生特异性结合的特性,利用已知的抗原来检查血清中是否含有相应的抗体,或者利用已知的抗体来捕捉相应抗原的血清学方法.     

犬DEA1.1血型抗体间接Dot-ELISA检测方法建立

为了建立一个更为简单和敏感的方法,以作为不使用试剂红细胞检测犬DEA1.1血型抗体的替代方法,从犬DEA1.1阳性红细胞中分离出细胞膜。将携带DEA1.1阳性抗原的膜置于硝酸纤维素膜上,加入初级抗体和辣根过氧化物酶标记的二级抗体,采用TMB显色试剂盒检测。对照试验采用凝聚胺抗球蛋白试验检测DEA1.1抗体。用DEA1.1阳性和阴性血型抗原检测Dot-ELISA的灵敏度、稳定性和特异性。用158只犬的血清样本检测Dot-ELISA的准确性。结果显示,Dot-ELISA方法比凝聚胺抗球蛋白试验灵敏8倍以上。即使细胞膜反复冻融20次,其抗原稳定性也不受影响,并且可在-20℃时长期稳定保存。在对158只犬血清检测的过程中,该方法展现了与凝聚胺抗球蛋白试验较高的相关性。表明本研究成功建立了犬DEA1.1血型抗体Dot-ELISA检测方法,并且方法稳定、灵敏、无需试剂红细胞,可以作为输血前传统抗体检测的一种有效替代方法。     

多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立

建立多房棘球绦虫粪抗原双抗体夹心ELISA检测方法,为犬感染多房棘球绦虫的早期诊断提供技术支撑.以5E10H5杂交瘤细胞株腹腔接种Balb/c鼠制备的腹水作为包被抗体,多房棘球绦虫成虫可溶性抗原免疫新西兰大白兔制备的多克隆抗体血清作为检测抗体,HRP标记的驴抗兔IgG作为二抗,建立双抗体夹心ELISA方法,检测试验犬(...     

禽戊型肝炎病毒人兽共感染的可能性研究

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(Hepatitis E Virus,HEV)引起的急性病毒性肝炎,主要经肠道传播,临床表现与甲型肝炎类似,主要流行于亚洲、非洲和中关洲的发展中国家.急性肝损坏和散发急性肝炎病例中50%以上由戊型肝炎引起.这使戊型肝炎成为一个重要的公共卫生问题.随着猪HEV的发现,禽HEV于2001年由美国的Meng博士领导的研究室发现和鉴定.在过去的几年里,我们与Meng博士研究室合作对禽HEV结构蛋白(ORF2)的B细胞抗原表位做了较系统的研究,鉴定出两个中和抗原表位,证明了禽HEV ORF2基因重组抗原免疫后能够产生中和抗体并可以防止禽HEV的感染.我们同时阐明了在禽HEV ORF2抗原内至少有一个禽HEV特异的抗原表位,一个人、猪和禽HEV三种病毒共有的抗原表位,至少有一个禽、人HEV共有的抗原表位.这些研究结果表明禽HEV ORF2蛋白的抗原表位可以作为有效的免疫诊断抗原,用来鉴别人和禽HEV感染.我们最近对健康人群HEV血清抗体检测结果表明抗禽HEV ORF2抗体阳性率约为1%,其中约4.5%的人群血清中含抗人HEV抗体.在对鸭群的血清学检测证明健康鸭群的抗禽HEV ORF2抗体阳性率约为20%.这些研究结果提示人可能被禽HEV感染.     

胶体金免疫层析技术在动物病毒性传染病诊断中的应用

自胶体金标记技术问世以来,已在妊娠检测、传染病、毒品、食品安全和兽医等领域得到了广泛的应用.就兽医领域而言,已应用在动物寄生虫、细菌、病毒以及兽药残留检测等方面.论文总结了胶体金免疫层析技术的基本原理和常见的检测抗原、抗体的方法,对胶体金免疫层析技术在动物病毒抗原和抗体检测中的应用进行了详细的介绍,并对该技术在动物病毒...     

鸡源杭体制备技术

现在用于研究、诊断以及治疗的抗体主要是来源于哺乳动物的单克隆抗体或多克隆抗体,但多抗和单抗的制备技术技术都有优点及不足.在单抗制备的过程中存在的主要问题是有一些抗原对小鼠是弱免疫原或根本没有免疫原性.在多抗生产和纯化的过程中,多数情况下从哺乳动物血液中制备抗体的产量很低,而且步骤繁琐.另外制备过程中有一些步骤会导致动物产生应激.     

琼脂扩散试验操作方法及注意事项

琼脂扩散试验（简称“琼扩”）是临床中病原诊断和抗体效价测定的主要方法之一。该方法简洁、快速,在临床中应用广泛,特别适用于大量血清样品的检测和流行病学群体的定性诊断。缺点是需要时间过长,灵敏度不高。琼脂扩散试验是根据沉淀试验的原理,利用可溶性抗原和抗体在半固体凝胶中进行的相向扩散反应,当抗原、抗体的分子相遇并达到适当的比例时,就会相互结合,凝集,形成抗原-抗体的结合物,在抗原、抗体比例较适合并有电解质的存在及一定温度的条件下,形成白色可见的沉淀线,此种沉淀反应,称为琼脂免疫扩散试验,本法可用已知抗原测定未知抗体,也可以用已知抗体测定未知抗原。在传染病的实验室诊断中,常用于鸡马立克氏病抗体检测。也曾有用此法检查鸡法氏囊病、小鹅瘟、猪瘟病和炭疽等疾病的报道。现以检测鸡马立克氏病的抗体为例,将其操作方法介绍如下。     

免疫测定技术在药物残留检测中的应用

免疫学检测方法是基于抗原抗体特异性结合的反应原理发展成的一种检测技术。通过免疫动物然后提取出抗体．用一种信号放大系统把抗原抗体结合的现象展现出来的方法。例如将抗体分子用过氧化物酶标记．将抗原固定后用酶底物与标记的酶催化反应显色来判断抗原抗体结合的现象。     

山羊痘病毒快速诊断有新招

检测山羊痘病毒抗原抗体,用对流免疫电泳和反相被动血凝试验等方法检测,过程繁琐,不易操作。而用抗原抗体法诊断山羊痘病病毒的斑点凝集试验已被标准化。试验前需将抗原和     

间接ELISA检测禽多杀性巴氏杆菌抗体中包被抗原的选择

间接ELISA已在抗体检测中广泛应用,而抗原包被作为间接ELISA中必不可少的一步可直接影响试验的准确性.试验分别使用超声波裂解抗原、脂多糖蛋白抗原和全菌抗原作为包被抗原,建立相应的检测方法并进行重复性试验.试验证明全茵抗原建立的禽多杀性巴氏杆菌ELISA检测方法在敏感度、特异性、稳定性方面均优于其他两种抗原.