山楂ISSR分析体系的建立和优化

为在DNA分子水平上对山楂种质资源进行分析奠定基础,对退火温度、循环次数、DNA模板质量、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶的种类和浓度等影响ISSR反应的因素进行研究,建立并优化了山楂的ISSR分析体系。优化的山楂ISSR分析体系为:采用改进的CTAB法或QIAGEN试剂盒法提取总DNA;PCR反应体积为20μL,内含1×PCR反应缓冲液(Promega公司),3.0mmol/L MgCl2,0.2mmol/L dNTP,0.3μmol/L引物,0.5U Taq DNA聚合酶(天根公司),50ng总DNA;扩增程序为94℃ 3min;94℃ 30s,退火温度1min,72℃ 2min,38个循环,72℃ 7min。筛选出了10个适宜山楂遗传分析的ISSR引物。     

菊芋基因组DNA提取方法的比较

采用改良CTAB法、改进的高盐SDS法及两种植物基因组DNA提取试剂盒法等４种方法提取菊芋基因组DNA,并进行电泳分析、质量检测及ISSR引物扩增检测。结果表明,改良CTAB法优于其他3种方法,提取的DNA质量较好、纯度较高,能够满足ISSR-PCR扩增要求。     

杏仁基因组DNA微量提取的改良方法

基于报道的大豆干种子提取方法,对高脂肪的杏仁进行了基因组DNA提取方法的改良研究,并以提取的基因组为模板进行了PCR扩增验证。结果表明:改良的SDS法提取的杏仁基因组DNA具有纯度和浓度高、条带清晰、降解少等优点,并在高倍稀释条件下仍能获得有效扩增。     

李属植物DNA提取及RAPD反应体系的优化

以1号李,6号李和公主红为试材,对李属植物DNA提取方法进行改良并进行RAPD反应体系的优化.结果表明:改良CTAB(3%)法提取的DNA产量高,可满足RAPD扩增的需要.25 μL反应体系中,DNA聚合酶、Mg2 、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:1.0 U、2.0mmol/L、10 pmol/L、20 ng和1.0mmol/L.     

不同方法提取牛心朴子基因组DNA效果的比较研究

以牛心朴子的叶片、茎段、根为试材,采用改良的CTAB法Ⅰ、CTAB法Ⅱ和SDS法对其进行了基因组DNA提取效果的比较分析.结果表明.CTAB法Ⅰ从3个部位都能提出较高浓度的DNA,电泳条带完整清晰;CTAB法Ⅱ从3个部位都能提出DNA,条带明亮,但有明显拖尾现象;SDS法从叶片中能提出较高的DNA,但从茎和根中所提的DNA含量较小,电泳条带暗;3种方法所提的DNA其RAPD扩增效果以CTAB法Ⅰ最好,CTAB法Ⅱ次之,SDS法最差.叶片提取的DNA平均纯度、浓度和得率为最高,RAPD扩增效果最好,茎次之,根最低.说明CTAB法工是牛心朴子DNA的高效提取方法,不同部位以牛心朴子叶子提取的DNA得率高,扩增效果最好.     

不同方法提取青藏高原蕨麻总DNA的比较研究

以改良CTAB法、改良SDS法、试剂盒法提取青藏高原蕨麻总DNA;用紫外分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA浓度和质量;用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法测定提取的青藏高原蕨麻的总DNA质量,以期筛选出青藏高原蕨麻总DNA提取的最佳方法。结果表明:用改良SDS法提取的蛋白质含量最高,OD260/OD2801.61左右,用改良CTAB法提取的DNA的OD260/OD2801.76左右;用试剂盒法提取的DNA的OD260/OD2801.70左右;用改良CTAB法提取DNA的浓度在100μg/mL。     

适于宁夏枸杞RAPD分析的DNA高效提取方法

采用优化的CTAB法提取枸杞叶片基因组DNA.利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度,并进行了RAPD初步扩增分析.DNA浓度在300 μg /mL,可达400 μg/g(叶片鲜重).OD260/OD280比值为1.44～1.6(理想值为1.8).结果表明:优化CTAB法所提取枸杞总DNA的纯度高、完整、量大,能满足RAPD扩增,条带清晰、稳定,并且提取操作的程序快速、简便,试验成本低、效率高.优化的CTAB法高效提取的枸杞基因组DNA不需经氯化铯梯度离心或柱层析纯化,可以直接用于RAPD分析.     

柑桔地方品种鉴定的分子方法初步研究

品种纯度不够是建立高质量果园的重要限制因素.建立在苗期鉴定纯度的分子方法,对选择高纯度幼苗建立高质量果园有重要意义.本试验用改进的CTAB法提取柑桔叶片的总DNA,并利用梯度PCR优化了RAPD反应条件,建立了RAPD-PCR分析的最佳反应体系,显著提高了柑桔RAPD分析的特异性、效率和稳定性.从21条随机引物中扩增贡柑等4个品种的DNA,筛选出一组扩增条带多态性高、稳定性好的RAPD分析引物.结果证明,RAPD分析是品种纯度鉴定研究的简单实用的方法.     

芍药基因组DNA不同提取方法的比较及PCR验证

提取基因组DNA是开展芍药分子生物学研究中一项最为基础的工作。本研究通过常规CTAB法和近几年应用较为普遍的试剂盒法,对芍药基因组DNA进行了提取,并对2种方法所提取的DNA进行了浓度、程度、琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增比较。结果表明,常规CTAB法提取的DNA浓度较高,为128.08-253.63 ng/ul,但纯度较低,而试剂盒法提取的DNA虽平均浓度较低,为3.51ng/ul,但纯度较高;电泳和PCR结果均表明,试剂盒法提取的DNA能扩增出目的片段,是较好的一种提取方法。     

绿绒蒿属植物不同DNA提取方式的比较

以绿绒蒿属(Meconpsis Vig.)3种植物叶片为试材,采用研钵手动研磨和电动匀浆马达研磨器2种研磨方式处理叶片,采用改良的CTAB法、国产天根试剂盒、德国Qiagen试剂盒法3种提取方式从绿绒蒿属植物叶片中提取DNA,研究了不同提取方式对绿绒蒿属植物DNA提取效果的影响,以期为绿绒蒿属植物的分子遗传学研究奠定基础。结果表明:几种不同提取方法均能获得较为完整的DNA,研钵手动研磨的植物叶片提取的DNA无论是从质量、纯度还是得率均好于电动匀浆马达研磨器研磨。3种提取方式提取的DNA均可直接用于下游PCR反应,改良的CTAB法提取的DNA纯度和得率均很高;天根试剂盒法和Qiagen试剂盒法提取的DNA得率不高;Qiagen提取的DNA纯度和质量均比较好,但成本较高。     

山楂（Crataegus pinnatifida Bge.)遗传多样性的RAPD和ISSR标记分析

 利用RAPD和ISSR标记对35份山楂（Crataegus pinnatifida Bge.）资源进行了DNA多态性分析。12个RAPD引物共扩增出110条清晰的谱带,其中89条显示多态性,平均每个引物扩增出7.4条多态性谱带。13个ISSR引物共扩增出110条清晰的谱带,其中94条显示多态性,平均每个引物扩增出7.2条多态性谱带。基于RAPD和ISSR标记,利用UPGMA分别构建了35份山楂资源的聚类树状图。距离系数分别为0～0.62（RAPD）和0～0.64（ISSR）,表明山楂具有较高的遗传多样性。     

一种不经热浴从双孢蘑菇子实体中提取DNA的新方法(英文)

介绍一种不经热浴快速从双孢蘑菇子实体中提取DNA的新方法,并与传统的CTAB和SDS法相比较,结果显示:该方法得到的DNA完整性好,时间短,步骤少,有毒试剂用量少,在提取DNA的质量、得率、时间及完整性等方面都优于传统的CTAB和SDS法,为食药用菌子实体DNA的提取参考。     

RAPD技术在木耳属杂交种及原生质体融合子鉴定分析中的应用

本研究以ＲＡＰＤ（ＲａｎｄｏｍｌｙＡｍｐｌｉｆｉｅｄＰｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ）技术为主，比较分析食用菌木耳属（Ａｕｒｉｃｕｌａｒｉａ）种内杂交种．种间原生质体融合子与其亲本菌株的ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒｓｅＣｈａｉｈＲｅａｃｔｉｏｎ）扩增的ＤＮＡ片段之间差异，并辅以其它手段，如核相及核数目观察，同功酶鉴别，以期建立完整有效的检测技术系列，确证其杂交种融合子的真实性及可靠性。在ＲＡＰＤ分析中，用于测试的１０种随机引物仅有４种引物与供试菌株的ＤＮＡ模板具有较好的结合能力，其中１种引物可用于检测杂交种及其亲本，另外３种引物可用于检测融合子反亲本。检测结果显示：３个供试杂交种中有２个为真杂合子，１个为假杂合子；２个供试融合子均为非稳定杂合子。与常规方法鉴定结果比较基本相符。因此，ＲＡＰＤ技术提供了一种快速、简便、准确的杂交种及融合子的鉴别方法。     

刚竹属( Phyllostachys) 23个观赏竹种间亲缘关系的RAPD分析

 本文采用RAPD技术分析了刚竹属23个种或变种的DNA多态性。从37个随机引物中选出多态性效果好的6个引物, 共获得47个DNA扩增片段, 大小处于0.3～1.05 kb, 扩增表现出明显的多态性,高达93.6%。对RAPD产物进行相似系数统计和聚类分析, 结果同形态分类结果基本吻合, 但其中个别竹种出现了不同结果, 即: 与种和其变种是聚在一类的结论不一致, 因此, 对个别竹种有待进一步研究。     

甜菜干种子DNA提取的不同方法比较

分别采用SDS法、CTAB法及碱裂解法对甜菜干种子基因组DNA进行提取．并利用1％琼脂糖判断DNA的纯度,λDNA判断DNA的含量,结果表明,SDS法和CTAB法提取的甜菜基因组DNA含量较高,提取的DNA总量接近,碱裂解法提取的DNA含量较低。3种方法提取的DNA均能够满足SSR—PCR的要求,并且扩增务带没有差异,由于碱裂解法提取DNA快速和简单,因此适合大群体DNA的提取及对模板要求不高的PCR反应中,而SDS法及CTAB法适合一次性大量提取甜菜基因组DNA以及对于DNA纯度要求较高的PCR反应中。     

枇杷属植物基因组DNA提取方法的改进及其应用

以枇杷属的普通枇杷和多种野生枇杷的叶片为材料,对枇杷的DNA提取进行了研究。针对枇杷富含多酚类 等次生物质的特点对枇杷DNA的提取步骤进行了改良处理:采用CTAB-蛋白酶K法加重复抽提,去除枇杷材料中 的相关次生物质,获得了高质量的DNA。所提取的DNA完全能满足PCR、RAPD、AFLP等一些分子生物学实验要 求。     

硅胶干燥胡杨叶片DNA提取与RAPD反应体系的建立

以塔里木河流域胡杨(Populus euphratica)硅胶干燥叶片为材料,采用改进CTAB法提取胡杨基因组DNA,得到满足RAPD(Random amplif ied polymorphic DNA),随机扩增多态性DNA分析的胡杨基因组DNA。通过单因素优化试验,得到胡杨RAPD分析的最佳反应体系为:40 ng模板DNA,0.8 U rTaqDNA聚合酶,2.5 mmol/L Mg2+,0.3 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L随机引物,1×buffer缓冲液,ddH2O补足至10μL。扩增反应程序为:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,38℃复性30 s,72℃延伸120 s,35个循环,最后72℃延伸7 min。