生长抑素对泌乳大鼠乳腺发育的作用

给泌乳SD大鼠皮下注射生长抑素及其耗竭剂,用RT-PCR法和放射免疫法检测大鼠乳腺中相关基因的表达水平及乳腺和血清生长抑素的水平,探讨生长抑素与相关因子间的关系。结果表明：生长抑素能提高大鼠血清和乳腺生长抑素的含量,下调ERα、PR、GHR、PRLR基因的表达,上调Leptin和LEPR基因的表达;其耗竭剂的作用相反,降低血清和乳腺中生长抑素的含量,上调ERα、PR、GHR、PRLR基因的表达,下调Leptin和LEPR基因的表达。说明生长抑素通过调节乳腺中相关因子的表达对大鼠乳腺发育起作用。     

半胱胺对妊娠大鼠乳腺发育及血液生长抑素生长激素含量的影响

选用１２只Ｗｉｓｔａｒ受孕大鼠进行配对实验,实验鼠每周灌服半胱胺（ＣＳ）－一次,直至分娩。结果表明,实验鼠妊娠末期乳腺绝对和相对湿重明显提高,ＤＮＡ含量升高,ＲＮＡ含量差异不明显。故ＲＮＡ：ＤＮＡ比值明显降低;实验组大鼠血液生长抑素（ＳＳ）和催乳素一比对照鼠明显下降,生长激素（ＧＨ）水平明显提高。结果提示,ＣＳ能促进妊娠大鼠乳腺发育,而降低大鼠ＳＳ含量,提高ＧＨ水平可能与其主要的作用机制。     

生长抑素对大鼠乳腺斯钙素基因表达的影响

将泌乳期大鼠分为对照组、CS组和SS组,利用RT-PCR法对大鼠乳腺组织斯钙素基因进行检测,分析生长抑素对大鼠乳腺斯钙素基因表达的影响。结果表明:乳腺中有STC1表达,无STC2表达。生长抑素对泌乳期大鼠乳腺斯钙素基因表达起下调作用,半胱胺作用相反。以上结果提示生长抑素和半胱胺可能参与乳腺钙代谢的调节,且通过STC1发挥作用。     

不同发育期大鼠乳腺组织中雌激素受体α的表达

为了探讨不同发育时期大鼠乳腺中雌激素受体α(Estrogen receptor,ERα)的表达情况,采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的ERα进行了半定量研究。结果表明,妊娠和泌乳期大鼠乳腺组织中的ERα表达水平均低于处女期,且差异显著(P<0.05);整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;随着泌乳期的进行,ERα的表达水平增高,但差异不显著(P>0.05)。表明ERα可能参与了乳腺细胞的发育和凋亡。     

不同发育期大鼠乳腺组织中孕酮受体的表达研究

为了探讨大鼠乳腺中孕酮受体(PR)的变化规律,试验采用RT-PCR方法对不同发育时期大鼠乳腺组织中的孕酮受体表达进行了半定量研究。结果表明,妊娠18 d的PR表达水平明显低于处女期和妊娠6,12 d (P<0．05),整个妊娠过程中,以妊娠12 d最高;在泌乳6 d时检测不到PR,泌乳12,18 d可检测到PR表达,泌乳 18 d的PR水平低于泌乳12 d,但差异不显著(P>0．05)。表明PR可能参与了乳腺细胞的发育和泌乳。     

不同泌乳期小鼠乳腺乳铁蛋白基因的表达

选取昆明小鼠为研究对象,以看家基因GAPDH为内参,用RT-PCR法对不同泌乳期小鼠乳腺组织乳铁蛋白基因的表达进行了研究。结果显示:不同泌乳期小鼠乳腺均有乳铁蛋白基因的表达,表达水平随泌乳过程的进行呈下降趋势,泌乳早期与中期和晚期差异显著。提示乳铁蛋白在泌乳期对小鼠乳腺免疫具有一定的调节作用。     

生长抑素基因疫苗pES/2SS的构建与表达

为了获得安全性较好的生长抑素(SS)基因疫苗,采用PCR扩增pcS/SS中的SS基因,将其融合到pUSS/S质粒S基因后,构建pUS/2SS质粒;然后将S/2SS融合基因亚克隆到pEGFP-N_1中,得到S/2SS融合表达质粒pES/2SS。酶切和测序鉴定表明:重组质粒pES/2SS构建成功。将pES/2SS转染HeLa细胞,用ELISA检测表达的融合蛋白可与SS抗体特异性结合;将pES/2SS免疫10只大鼠(每只100μg)后,5只大鼠产生抗SS抗体,而对照组未检出SS抗体。结果证明,所构建的质粒pES/2SS可在真核细胞中表达生长抑素,用于免疫可产生抗SS特异性抗体。     

中草药饲料添加剂对大鼠泌乳及乳腺发育的影响

在基础催乳方中分别添加含有异黄酮雌激素的两种中草药葛根和黄芪,测定其对大鼠泌乳、仔鼠增重和乳腺发育的影响。结果表明:葛根 基础方和黄芪 基础方组的仔鼠增重显著高于对照组和基础方组(P<0.05),而葛根和黄芪组仔鼠增重差异不显著(P>0.05),且对照组和基础方组差异也不显著(P>0.05)。剥离泌乳大鼠腹部一侧乳腺,测定大鼠乳腺组织中DNA和RNA的含量,结果表明葛根组和黄芪组的DNA、RNA和RNA/DNA明显高于对照组,与基础方组差异不显著(P<0.05);葛根组和黄芪组的RNA/DNA显著高于对照组,而与基础方组差异不显著。     

半胱胺对大鼠出生重及血浆生长激素,生长抑素含量的影响

选用１２只Ｗｉｓｔａｒ受孕大鼠进行配对实验，从确定受孕开始，实验母鼠每周了半胱胺（ＣＳ）１次，剂量为８０ｍｇ．ｋｇ＾－１ＢＷ，直至分娩，分娩后立即称仔鼠出生重有房，肝，肺，肾湿重，并用ＲＩＡ法测定血浆血浆生长抑素（ＳＳ）和生长激素（ＧＨ）含量，结果ＣＳ能明显提高仔鼠出生重，降低仔鼠血浆ＳＳ含量；并使母鼠血浆ＳＳ含量明显下降，ＧＨ水平显著提高，结果提示，ＣＳ能促进胎儿的宫内发育，而这种作用与ＣＳ耗竭     

黄颡鱼生长抑素基因的克隆及表达谱分析

【目的】克隆黄颡鱼生长抑素(Somatostatin,SS)基因cDNA全长序列,分析其在黄颡鱼胚胎发育、胚后发育阶段及成鱼各个组织中的表达规律。【方法】以黄颡鱼脑组织为材料,根据瓦氏黄颡鱼和斑点叉尾鮰SS基因保守区设计1对引物用于扩增SS基因中间保守区序列,再根据中间保守区序列设计2对引物,分别用于扩增5′端和3′端序列,将扩增得到的中间保守区序列、5′端和3′端序列拼接后得到黄颡鱼SS基因的cDNA全长序列,并对其进行生物信息学分析。用NCBI的Protein Blast对黄颡鱼与其他物种SS基因编码的氨基酸序列同源性进行比较,并构建系统发育树。用实时荧光定量RT-PCR检测SS基因在胚胎发育时期和胚后发育阶段（1～20 d）的表达特征。采用半定量RT-PCR检测SS基因在黄颡鱼脑、心脏、肌肉、胃、肝脏、肾脏、鳃、脾脏、性腺等组织中的表达特征。【结果】黄颡鱼SS基因cDNA全长694 bp,其中5′端非翻译区139 bp,3′端非翻译区211 bp,开放阅读框为345 bp,编码114个氨基酸。黄颡鱼与瓦氏黄颡鱼SS基因编码氨基酸同源性最高,为98%。系统发育树结果显示,黄颡鱼与同属于鲇形目的瓦氏黄颡鱼和斑点叉尾鮰聚为一支。SS基因在黄颡鱼受精卵时期就有表达,并持续至胚胎孵化出膜,且在心跳期和出膜期的表达量显著高于受精卵时期(P＜0.05);在出膜后的1～20 d,SS基因在黄颡鱼中稳定表达;在成鱼的各个组织中,SS基因只在脑组织中特异性表达。【结论】初步探明了SS基因在黄颡鱼胚胎发育、胚后发育阶段及成鱼各组织中的表达规律,推测其可能在黄颡鱼胚胎发育中发挥着重要的生理功能。     

β-酪蛋白基因在不同乳腺上皮细胞中表达的初步分析

应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术对山羊乳腺上皮细胞（GMEC）中β-酪蛋白mRNA进行检测以评价GMEC乳蛋白合成的功能.同时,比较商品化小鼠乳腺癌细胞C127、人乳腺癌细胞系T47D中β-酪蛋白基因的转录表达.结果表明,原代培养山羊乳腺上皮细胞GMEC-1能够检测到β-酪蛋白基因的表达,在激素诱导下,GMEC-3细胞中能检测到β-酪蛋白基因mRNA,但C127和T47D细胞系中均无法检测到.     

泌乳反刍动物乳腺的氨基酸代谢

 乳腺是合成乳汁的主要场所。为了提高反刍动物饲料转化效率、泌乳量和乳蛋白产量，就有必要把乳腺氨基酸代谢作为研究的基础。本文从氨基酸供应、乳腺对氨基酸的摄取、乳腺氨基酸的代谢、能量供应对乳蛋白合成的调节等4方面，对泌乳反刍动物乳腺的氨基酸代谢进行综述，为进一步深入研究乳腺代谢，调控乳产量、乳蛋白含量提供依据。     

荷斯坦奶牛乳腺LAP基因的克隆与序列分析

为了研究奶牛乳腺防御素基因的表达调控机制,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出LAP基因的核心片段序列,并与NCBI数据库序列比对同源性;进一步扩增其DNA序列中间片段;其后运用反向PCR技术并结合半巢式PCR技术扩增其侧翼的序列。结果表明:序列与NCBI数据库中序列同源性为100%,确认为LAP基因;DNA序列扩增得到1 760 bp的中间序列,并预测了其酶切位点;得到5’侧翼序列107 bp,3’侧翼序列87 bp,经预测发现有转录因子GATA。为进一步研究防御素的防御功能、寻找防御素基因体外表达调控机制以及利用基因工程防治奶牛乳腺炎积累了基本资料。     

蚓激酶基因乳腺表达载体构建及在牛乳腺中的瞬时表达

在稀有密码子的改造基础上,人工合成了849 bp的蚓激酶F-Ⅲ-1全长cDNA序列,并以其为目的基因,构建了以山羊β-酪蛋白启动子为上游调控序列的乳腺组织特异性表达载体pBLK和pLN-bCP-LK。2种质粒分别以200,500,1 000,2 000μg的剂量梯度注入泌乳期黑白花奶牛乳腺,以纤维蛋白平板溶圈法(FAPA)检测该基因表达后奶样的纤溶活性。结果表明:注射后3~78 h,奶样有明显纤溶活性,其中6~16 h活性最高。500μg pBLK质粒与其他3个剂量溶圈直径之间差异显著(P<0.05),而其他3个剂量之间差异不显著;pLN-bCP-LK质粒的各剂量溶圈直径之间差异均不显著,且2种质粒的同剂量溶圈直径之间差异也不显著。以上结果表明,改造后的蚓激酶基因可以在泌乳期黑白花奶牛乳腺中实现瞬时表达,以500μg的注射剂量表达效果最佳。     

GnRH在广西摩拉杂交水牛乳腺中的免疫组化定位及其受体基因表达的研究

采用免疫组化及RT-PCR技术检测广西摩拉杂交水牛乳腺组织中的促性腺激素释放激素(GnRH)及其受体.结果表明,15份正常乳腺组织中有13份呈GnRH免疫阳性反应,免疫阳性产物主要集中在腺泡细胞的胞质和胞膜,胞核无特异性染色;同时扩增的目的条带大小为1 008bp,与促性腺激素释放激素受体(GnRHR)基因片段大小一致.     

microRNA在调节乳腺发育和乳腺免疫功能中的作用

miRNAs分子是除了激素之外对乳腺发育以及乳腺免疫功能进行调控的重要分子,综述了miRNAs在乳腺发育以及乳腺免疫中的最新研究进展。     

崂山奶山羊乳腺中孕激素受体基因甲基化与基因表达关系的研究

为了探讨崂山奶山羊乳腺组织中孕激素受体基因(PR)的甲基化与基因表达的关系,本研究通过亚硫酸盐测序法分析了不同时期崂山奶山羊乳腺组织中PR基因的甲基化水平,并利用Real-time PCR技术检测了相应时期PR基因的表达情况。结果显示:在青春期、妊娠早期、妊娠中期、妊娠晚期、泌乳早期、泌乳晚期及退化期崂山奶山羊乳腺中PR基因的甲基化比率分别为13.3%、9.3%、2%、0%、8.7%、10.7%、10.7%;以β-actin为内参基因,相应时期PR基因的表达量分别为1.68、5.96、17.51、54.76、2.28、0.99、1.30。这些结果表明:PR基因的甲基化与基因表达存在负相关关系(γ=-0.87,P=0.01<0.05)。可见,崂山奶山羊乳腺组织中PR基因的甲基化水平对基因表达有一定影响。