细胞核移植在鱼类育种工作中的应用（上）

一、细胞核移植概述 细胞核移植的基本方法是在解剖显微镜下，用简单、精巧的移核装置和熟练、精湛的人工技术，把一种动物细胞的细胞核移置到同种动物或异种动物的去核卵内(前者称供体，后者称受体)，让其继续分裂和发育。以观察这种由不同来源的细胞核和细胞质配合而成的移核卵，在它的个体发育、细胞分化和遗传变异等方面所表现的特性。     

猪细胞核移植研究进展

哺乳动物核移植研究,已取得了突破性进展,但由于猪细胞核核移植的难度较大,有关猪的报道较少。由于猪胚胎卵裂球脂滴太多,Nagashima等眼2演通过离心处理并用显微操作技术去除细胞内脂滴,再进行冷冻,解冻后将胚胎分成单个卵裂球作为核供体,重构胚的囊胚发育率高于正常胚胎细胞核移植。猪细胞核移植中的几个关键问题是:卵母细胞的体外成熟、受精和培养,移核胚重构后核、质相互作用和细胞同期同步化,受体母猪的处理。     

鱼类细胞核移植研究进展及前景展望

细胞核移植技术是目前生物技术领域研究的热点之一,其科学意义和应用价值重大。本文介绍了中国和世界上鱼类细胞核移植的研究成果及其最新进展;综述了鱼类细胞核移植的基本程序、方法和影响因素,包括胞质受体的准备、核供体的制备、核移植和核质杂种的培养。并对鱼类细胞核移植的应用、现存问题及应用前景进行了讨论。     

我国鱼类细胞核移植研究的进展

细胞核移植是指应用显微操作技术 ,将一种动物细胞的细胞核移植到同种或异种动物去核成熟卵细胞内的精细技术。细胞核移植所得到的杂种细胞称作核质杂种[1] 。它是本世纪三十年代发展起来的 ,用来研究胚胎发育过程中细胞核和细胞质功能以及二者之间的相互作用关系 ,探讨有关遗传、发育和细胞分化等方面的一些基本理论问题。随着此项研究的深入 ,细胞核移植技术已在许多领域内得到应用 ,在水产研究中 ,利用该技术进行鱼类杂交种的选育 ,已获得了一定的成功。目前 ,核移植技术在鱼类和两栖类上的应用已经成熟 ,而我国在这一方面居世界领先水平…     

用未去核卵作受体的鱼类细胞核移植研究

用不挑除卵核的移核方法,在鱼类的四种组合中进行了试验,获得了10尾存活了7天以上的幼鱼,其中一尾来去核鲤鲫移核鱼存活两年多。在移核后的胚胎阶段和成鱼阶段进行了染色体和同工酶分析,并与去核移核鱼进行了比较。结果发现:不去核移核和去核移核一样,能获得2倍体的核质杂交鱼;卵子中未挑去的单倍体被排斥了,从而提示,细胞核移植可以省略去核步骤。     

鱼类细胞核移植概况

最近几年，中国科学院北京动物研究所细胞研究室和中国科学院水生生物研究所，长江水产研究所合作，在经济鱼类上进行了细胞核移植，并得到了核质杂交移核鱼。现将这方面工作的情况简单介绍如下。     

测定鲤鱼卵成熟度有新法

德意志民主共和国一所水产学院，最近通过实验，可根据卵细胞核的位置来测定鲤鱼卵的成熟度。方法：取正常发育的鲤鱼卵少许，固定于乙醇、醋和甲醛的混合液里(比例6：3：1)，10分钟后镜检，若卵不成熟，细胞核在卵的中心；若已成熟，细胞核则在卵周至卵中心距离的2／3处。     

雄核发育技术及其在鱼类遗传育种中的潜在应用

获得鱼类雄核发育后代有2种方法。一种是用正常精子使经过遗传失活的卵受精，得到雄核发育单倍体胚胎，然后通过抑制第1次卵裂的发生诱导核内有丝分裂，使单倍体胚胎的染色体加倍发育为纯合二倍体个体；另一种方法是用四倍体个体的精于使遗传失活的卵子受精。直接得到正常发育的二倍体雄核发育后代。介绍了雄核发育技术的基本原理和基本技术手段，探讨了雄核发育技术在鱼类遗传育种研究中的应用现状。     

用电融合结合继代移核方法构建草鱼抗病体细胞工程鱼

选择对草鱼出血病病毒不敏感的草鱼肝细胞进行细胞培养，建立了草鱼肝细胞株，命名为ＧＬＡ。对ＧＬＡ进行攻毒，发现其对ＦＲＶ有抗性。采用电融合结合继代移核的方法，将ＧＬＡ细胞，移植于草鱼未受精卵内，获得开口前的幼鱼８尾和存活仔鱼１尾，说明此方法能提高细胞的发育功能。     

动物细胞克隆技术研究进展及应用

动物克隆即指通过无性繁殖方式由单个动物细胞产生的遗传性状相同的个体。其制作过程主要是利用细胞核移植技术来完成的。本文介绍了动物克隆技术的研究历史和发展现状 ,简要概括了细胞核移植技术的操作程序和此技术目前存在的问题 ,并对其应用前景作一展望。1　动物克隆技术的研究历史首例动物克隆是 1 952年Ｂｒｉｇｇｓ等将青蛙囊胚期的细胞核移入去核卵中经正常卵裂发育成蝌蚪[1] 。这是细胞核移植实验首次获得成功 ,由此开辟了高等动物发育生物学研究的新领域。 1 96 2年Ｇｕｒｄｏｎ进行蛙胚胎移植 ,产生有生殖能力的蛙[2 ] 。 1 981…     

大批量生产大银鱼受精卵及移植实用技术(上)

<正>大银鱼移植分为受精卵移植和成体移植,成体移植风险大,受精卵移植风险小,受精卵质量的优劣是移植能否成功的关键。受精卵移植成功仅两年即可形成一定产量。现总结如下。一、生产大银鱼受精卵技术1.大银鱼产卵期的监测北方水体11月中旬进入大银鱼产卵前期,监测到雌鱼腹部略微膨大,卵粒Ⅲ期,雄鱼性腺不明显,体内有食物。11月底进入大银鱼产卵中期,雌鱼腹部膨大明显,卵粒Ⅲ～Ⅳ期,但没有完全分离,雄鱼性腺白线条明显,同种残杀现象增多,食物消化部分残留。12月初进入大银鱼产卵高峰前期,上网雌鱼30%腹部膨大饱满,     

鱼类培养的体细胞与成熟卵的电融合技术研究

利用极化注射仪—I型,对混有青鱼体外培养细胞的草鱼,鲢鱼成熟未受精卵进行正弦交(?)电场处理,使细胞与卵紧密接触,继而进行两次电脉冲。结果在673粒草鱼实验卵中有45粒发育至囊胚期,12粒发育至血液循环期,孵出鱼苗8尾。在224粒鲢鱼实验卵中,有68粒发育至囊胚期,13粒发育至血液循环期,孵出鱼苗6尾。鱼类体外培养细胞和未受精卵融合后,能继续分裂发育,说明已分化的体细胞核仍具有发育的全能性。     

鱼类生殖细胞移植的研究进展及应用前景

生殖细胞移植是指将供体的生殖细胞移植到同种或异种受体体内,供体生殖细胞嵌合到受体性腺,经过增殖、分化并最终发育为功能性配子的过程。作为辅助生殖技术,它不仅为珍稀濒危动物的繁育和保护提供了新途径,同时也为生殖干细胞的功能研究提供了有效手段。鱼类生殖细胞移植研究首先在模式鱼类斑马鱼中开展,经过十多年的发展,取得了一系列突破性的进展:主要包括先后建立了以胚胎、仔鱼和成鱼为受体的生殖细胞移植体系,精原和卵原干细胞的发现拓宽了供体生殖细胞的选择,受体的选择与制备方法的完善。该技术在缩短鱼类性成熟周期、性控育种、珍稀濒危鱼类保护等方面具有巨大的应用前景,已成功在多种淡水和海水鱼类中开展了研究和应用。本文结合作者的研究实践和经验,系统地梳理和总结了鱼类生殖细胞移植的研究进展,指出了该技术实践应用的关键问题,并探讨了其应用前景。     

栉孔扇贝正常发育和人工雌核发育二倍体早期胚胎核行为的细胞学观察

采用Bouin氏液固定、石蜡切片和苏木精-伊红染色方法，在光镜下对栉孔扇贝正常发育和6-DMAP第二极体抑制型雌核发育二倍体卵在受精和第一、二次卵裂过程中的核相变化进行了详细观察。结果表明，正常发育卵内的雌、雄原核能融合为合子核，而雌核发育卵内的精核、雌核变化相当复杂。精核至少存在两种状态：（1）精核只在刚入卵时发生轻微膨胀，以后保持固缩状态，不膨大形成雄原核；（2）在第二次成熟分裂之后，精核再次去浓缩膨胀，但其体积并未达到正常雄原核的大小。在第一、第二次卵裂过程中，此精核不参与核分裂，以致密的染色质体（DCB）存在于两组分开的母本染色体之间，卵裂结束时滞留于两卵裂球的分裂沟上或进入其一的细胞质中。受精卵经6-DMAP处理，雌核形成第二极体的过程受到有效抑制，导致雌核二倍化。此外，作者对实验中出现的多精入卵和多极分离现象进行了观察和分析。     

池沼公鱼对移植增殖大银鱼的影响

<正> 1 问题的提出 近年发现,我省有些水库大银鱼移植效果不好,可能与池沼公鱼有关。池沼公鱼赵多的水体,大银鱼移植越不成功。97年石家庄市公鱼高产的口头水库和八一水库,平均放卵1900粒/0.067hm~2,秋后未见银鱼;而放卵量略低但未放过公鱼的燕川、下观两水库都捕到     

雄核发育异育银鲫及其初步应用

用鲫（２ｎ＝１００）卵与异育银鲫（３ｎ＝１５６）正常精子进行人工授精,产生了部分的雄核发育异育银鲫（３ｎ＝１５６）。池塘中饲养的雄核发育能银鲫性腺不仅能成熟,而且也能生殖。它与父本异育银鲫回交可以产生回交子一代（Ｂ１）。雄核发育异育银鲫、回交子一代异育银鲫与父本异育银鲫非常相似。它们均具有相同的染色体数目（３ｎ＝１５６）,红细胞核的体积是鲫红细胞核体积的１．６倍。另一方面,用随机拉增多态ＤＮＡ（Ｒ     

许家崖水库移植推广大银鱼技术经验

许家崖水库于１９９２年放卵１０万粒，１９９３年产鱼４．５ｔ，１９９４年重复放卵２０万粒，当年产鱼３０ｔ。移植大银鱼有投卵量少、驯化潜伏期短、形成规模产量快等特点。本文论述了大银鱼在该水库的移植增殖及推广情况，介绍了大银鱼移植技术，包括亲鱼的采集、暂养及人工孵化，受精卵的运输，移植水域的选择及驯化管理     

池沼公鱼移植技术

介绍了池沼公鱼人工采卵、授精、移植的实际操作过程,得出一些受精卵在移植过程中的技术结论,以达到人工增殖池沼公鱼的目的。     

波尔山羊卵泡卵母细胞的体外培养和输卵管配子移植

从4头同期发情与超数排卵的因重复采胚不孕的供体波尔山羊卵巢采得24枚卵泡卵母细胞(18枚卵丘卵母细胞,6枚裸卵),其中9枚卵丘卵母细胞直接与获能后的精子实施配子移植,4头受体均未受孕;其余15枚进行26h成熟培养,经培养后其中9枚卵丘卵母细胞中有6枚卵丘扩散,3枚未扩散;6枚裸卵均因退化而弃去。9枚卵丘卵母细胞移植至4头受体后有2头妊娠并如期产羔各1头。