三种梭子蟹血清凝集素的细胞凝集活性比较

利用凝集试验及糖抑制试验测定三种梭子蟹的血清对红细胞、藻类细胞、微生物细胞或孢子的凝集活性，同时进行糖抑制、热稳定性、pH及Ca^2 影响试验。结果显示：三种梭子蟹中远洋梭子蟹对红细胞最敏感，而三疣梭子蟹对单细胞藻类和微生物细胞或孢子最敏感；红星梭子蟹血清对鹌鹑红细胞的凝集可被供试的7种糖所抑制，而供试的7种糖均不能抑制远洋梭子蟹血清对鹌鹑红细胞的凝集；远洋梭子蟹血清具有广泛的pH适应性，在pH为4．0～10．0范围内对鹌鹑红细胞都具有凝集活性，且具有较强的热稳定性，经60℃保温10min后仍具凝集活性；三种梭子蟹的凝集活性均依赖于Ca^2 。     

大黄鱼C型凝集素受体Clec4e的分子鉴定及凝集特性

C型凝集素受体（C-type lectin receptor，CTLR）是可以特异性结合糖类病原体相关分子模式（pathogen-associated molecular patterns，PAMPs）的模式识别受体（pattern recognition receptors，PPRs），在先天性免疫中发挥着重要作用。为了揭示硬骨鱼CTLR的生物学功能，本研究以从大黄鱼（Larimichthys crocea）转录组数据库中筛选出的一个CTLR基因—C型凝集素结构域家族4成员E基因（C-type lectin domain family 4 member E gene，Clec4e）为研究对象，研究其分子特征、表达分布和凝集特性。结果显示，LcClec4e cDNA全长1546 bp，开放阅读框（open reading frame，ORF）771 bp，编码254个氨基酸。LcClec4e的N端有一个跨膜区，无信号肽，C端含有一个糖识别结构域（carbohydrate recognition domain，CRD），其中含有糖结合位点EPN和WFD以及6个可形成二硫键的保守半胱氨酸。系统发育分析表明，LcClec4e与多种鲈形目鱼类Clec4e具有较近的亲缘关系。荧光定量PCR结果显示，LcClec4e在所检测的10种组织中呈组成型分布，且在肝脏中表达量最高；LcClec4e在来源于大黄鱼头肾组织的原代巨噬细胞、淋巴细胞和粒细胞中均有表达，且在巨噬细胞中表达量最高；经灭活溶藻弧菌刺激后，LcClec4e在3种免疫细胞中的表达均极显著上调。原核表达的重组LcClec4e胞外段（recombinant LcClec4e-extracellular domain，rLcClec4e-ex）具有Ca2+依赖性的凝集活性，可凝集小鼠、家兔的红细胞，以及嗜水气单胞菌、变形假单胞菌、溶藻弧菌和坎氏弧菌等4种水产常见的革兰氏阴性菌。D-葡萄糖、D-果糖、D-甘露糖、D-麦芽糖、α-乳糖和脂多糖均可抑制rLcClec4e-ex对大黄鱼重要病原菌变形假单胞菌的凝集作用，说明LcClec4e可能与变形假单胞菌表面的糖类物质结合。这些研究结果提示，LcClec4e可能作为一种PPR，通过结合病原菌表面的糖类PAMPs来识别病原，参与大黄鱼抗细菌感染的免疫防御。     

罗氏沼虾血清凝集素的凝集作用及糖的影响

目前水产动物疾病的免疫防治正作为一个水产养殖研究的热点。针对罗氏沼虾,有必要先了解其自身免疫活性物质的特性。而血清中的凝集素是参与识别、凝集、调理、促吞噬等免疫防御作用的体液免疫因子。其对细胞的凝集作用通过对细胞表面糖结构的识别及可逆结合等途径来达到。本文对罗氏沼虾血清中凝集素的凝集特性及糖的体内外作用进行了分析,以期为进一步探讨罗氏沼虾免疫防御机理打下理论基础。一、材料与方法１－罗氏沼虾血清的制备实验用虾为我院水产基地养殖的罗氏沼虾。心脏穿刺抽取血液,经３０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ,除去沉淀…     

中华绒螯蟹血清中外源凝集素的凝集作用及影响因素

中华绒螯蟹血清中的凝集素可凝集人、兔、豚鼠、小白鼠、鹌鹑、鸡、蟾蜍、鳝鱼等动物血细胞,但不凝集鲫鱼血细胞;此外,该凝集素亦可凝集双球菌、蕈状芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、枯草杆菌等细菌。该凝集素凝集活性可被L-山梨糖、D-果糖、D-半乳糖轻微抑制,并表现出对pH和温度的广泛适应性,在pH为2－12,温度为8℃－64℃范围内均具凝集活性。中华绒螯蟹血清中的凝集素对上述几种动物血细胞的凝集效价高于罗氏沼虾和克螯虾。     

南美白对虾血清凝集素的凝集活性及部分性质研究

利用血凝试验及糖抑制试验测定南美白对虾的血清的凝血活性及糖抑制专一性,同时进行热稳定性、pH及Ca2 影响试验。结果显示:南美白对虾血清只能凝集4种红细胞、4种单细胞藻类、4种微生物细胞或孢子。血清对家兔红细胞的凝集可被乳糖、D-甘露糖、D-果糖、D-半乳糖和D-葡萄糖5种糖所抑制,其凝集活性均依赖于Ca2 ,在pH为4 0～8 0范围内较稳定,经50℃保温10min后活性完全消失。     

中国对虾血淋巴凝集素的血凝活性与促噬活性

1999年8月，运用血凝活性测定法分别检测中国对虾血淋巴弹簧集素，血淋巴液、血细胞、肌肉、肠、肝胰腺和甲壳的血凝活力，并运用吖啶橙血细胞吞噬测定法检测血细胞的吞噬活力，同时测定了经注射中国对虾副粘病毒提纯液后血淋巴凝集素血凝活力及血淋巴液抗菌活力、酚氧化酶活力、溶菌活力，结果表明，血淋巴凝集素主要分布在血淋巴液和血细胞中；该凝集素对人（A、B、O型），鸡和兔红细胞及其醛化红细胞的凝集具有一定专一性；对血细胞吞噬异物具有促进功能；注射副粘病毒提纯液后，血淋巴凝集素凝集活力变化和血淋巴液抗菌活力，酚氧化酶活力、溶菌活力变化相一致。     

团头鲂血清抗病毒半乳糖凝集素样蛋白的分离与鉴定

将草鱼出血病病毒(GCHV)的结构蛋白与Sepherose-4B偶联制备亲和柱，经亲和层析从团头鲂血清中分离到一种蛋白，能凝集兔红细胞，其血凝性依赖于β巯基乙醇的存在。红细胞凝集抑制实验证实该蛋白与D半乳糖有最高的亲和力，其次为甘露糖。梯度PAGE测得其分子量约为240000，SDS梯度PAGE证实该蛋白由分子量为15000的单个亚基组成，亚基之间没有共价连接。以上特性与半乳糖凝集素相符，故称其为团头鲂抗病毒半乳糖凝集素样蛋白。抗体阻断试验证实，此种凝集素样蛋白是团头鲂血清抗病毒及红细胞凝集活性的主要成分。N末段的氨基酸序列为Lys-Val-Asn-Leu-Asp-Glu-Lys-Cys-Pro-Phe，检索GenBank，未发现与这一段序列同源的蛋白质。     

日本对虾血清凝集素的基本物理化学性质

日本对虾（Penaeus japonicus)亲虾体长19-24.5cm，取其血清。7种动物血液取自大白鼠、小白鼠、豚鼠、兔、鸡、羊、人。结果表明：（1）虾血清分别在28、37、56℃时热处理30min，其凝集活性不变，在70℃和80℃热处理30min后凝集活性完全丧失。（2）血清在pH和5-7.5的TBS缓冲液中凝集活性稳定，在pH为8-9之间凝集活性迅速下降。（3）凝集抑制实验表明半乳糖、甘露糖、L-阿拉伯糖、D-葡萄糖胺、N-乙酰-D-葡萄糖胺等5种糖对血清凝集素都有较强的抑制作用，尤其D-葡萄糖胺和N-乙酰-D-葡萄糖胺的抑制作用更强。（4）交叉吸附实验结果显示日本对虾血清对大白鼠、小白鼠的红细胞有较强的亲和性。     

Comparative study on general properties of alginate lyases from some marine gastropod mollusks

Alginate lyase (EC 4.2.2.3) is an enzyme that splits glycosyl linkages of alginate chain via β-elimination, producing unsaturated oligoalginates. This enzyme is widely distributed in herbivorous marine mollusks, brown algae, and marine and soil bacteria. In the present study, we determined the general properties and partial amino acid sequences of alginate lyases from three Archeogastropoda, i.e., Haliotis discus hannai, H. iris, and Omphalius rusticus, and one Mesogastropoda, i.e., Littorina brevicula, in order to enrich the information about functional and structural diversity in gastropod alginate lyases. The alginate lyases were extracted from hepatopancreas of these animals and purified by ammonium sulfate fractionation followed by conventional column chromatography. Single alginate lyases with molecular masses of approximately 28, 34, and 34 kDa were isolated from H. discus, H. iris, and O. rusticus, respectively. While three alginate lyases with molecular masses of 35, 32, and 28 kDa were isolated from L. brevicula. These enzymes were identified as poly(M) lyase (EC 4.2.2.3) since they preferably degraded poly(M)-rich substrate. Western blot analysis using an antiserum raised against H. discus enzyme suggested that H. iris, and O. rusticus enzymes shared similar primary/higher-order structure with H. discus enzyme, but the L. brevicula enzymes did not. H. discus, H. iris, and O. rusticus enzymes were classified to polysaccharide-lyase family-14 by the analysis of partial amino acid sequences, while the L. brevicula enzymes were not.     

日粮不同粗纤维水平对幼兔生长发育的影响研究

以120只40日龄的新西兰兔为试验材料,随机分为A、B、C和D共4组。在其它营养水平相同的情况下,研究粗纤维水平分别为10%、11%、12%和13%的4种日粮对幼兔日增重、料肉比、腹泻率、经济效益等指标的影响。结果表明,试验期平均日增重以A组最高(27.78±3.85)g,且随着粗纤维水平的增加而逐渐减少(P<0.05);A组和D组分别具有最低(3.81)和最高料肉比(4.26),差异达到显著水平(P<0.05);随着粗纤维水平的逐渐增加,腹泻率呈显著下降趋势,粗纤维水平为10%时腹泻率达到26.67%;经济效益分析发现,C组的产出投入比最高。     

鼠尾藻多酚分级组分的抑菌活性研究

采用平板生长抑制法对鼠尾藻Sargassum thunbergiikuntze多酚化合物各分级组分进行抑菌活性研究。结果表明,在一定浓度范围内各分级组分对副溶血弧菌、哈维氏弧菌、沙蚕弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鳗弧菌、溶藻弧菌和四联微球菌等受试菌株均有抑菌活性。其中,分级组分I(Mr5.0×103)的抑菌效果优于其他组分,对副溶血弧菌、哈维氏弧菌和沙蚕弧菌的最低抑菌浓度(MIC)值为900μg/ml,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、鳗弧菌和溶藻弧菌的MIC值为1 800μg/ml,对四联微球菌的MIC值为3 600μg/ml。另外,组分I(Mr5.0×103)显示出较好的热稳定性,在pH 3~4时对受试菌的抑菌活性最强。     

Enhancement of the expression of ice-nucleation activity of Pseudomonas fluorescens MACK-4 isolated from mackerel

ABSTRACT:    The growth of Pseudomonas fluorescens MACK-4 isolated from mackerel in dextrin and starch broths was faster than that grown in other broths. The highest ice-nucleating activity (INA) was observed on those grown in media with sorbitol, mannose or starch using peptone as a nitrogen source. According to OD₆₀₀, the cells seemed to be difficult to grow in media with inorganic substances, malt extract or gelatine nitrogen sources. However, rapid growth was observed on the media with peptone, yeast extract, tryptone or skim milk. The concentrations of carbon or nitrogen sources did not significantly affect the INA. The INA was greatly induced when the growth temperature was shifted from 30 to 5°C. However, it was not affected by transferring the cells into media with a deficiency of nutrients. According to the chemical agents and metal effects on INA, the active site on the proteins of INA components might contain an SH group.     

褐藻多酚的生物活性及提取技术研究进展

本文对不同褐藻中的褐藻多酚存在的形式进行了分析,综述了褐藻多酚抗菌、抗氧化、抗凝血、抗肿瘤以及化学防御等生物活性的研究进展,并比较了有机溶剂浸提、超声波辅助提取、微波辅助提取以及有机溶剂萃取纯化等方法的提取效果,旨在为褐藻多酚的进一步研究和利用提供参考依据.     

5种中草药的不同溶剂提取物对嗜水气单胞菌抑菌活性的研究

为探讨不同有机溶剂对常用中草药的提取效果及其提取物对水产常见病原菌的抑菌活性,以50%乙醇、无水乙醇、氯仿、甲醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚为提取溶剂,根据水浴旋转蒸发器回流提取工作原理,分别对五倍子、乌梅、诃子、大黄和五味子等5种中草药进行固液萃取,并用其提取物对水产高致病性病原菌嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）进行体外抑杀菌试验。结果表明：50%乙醇、无水乙醇、甲醇对5种中草药的提取效果优于其他4种溶剂,尤以甲醇的提取效果最佳,其提取率分别为五倍子46.09%、乌梅27.58%、诃子29.55%、大黄50.34%、五味子30.88%;提取效果最差的是石油醚,其提取率分别为五倍子1.98%、乌梅1.73%、诃子2.21%、大黄0.89%、五味子3.40%。体外抑菌试验结果显示,嗜水气单胞菌对五倍子的3种醇提物均表现为极度敏感,对大黄的甲醇提取物表现为高度敏感,对五倍子、大黄和五味子的氯仿提取物以及对乌梅、大黄和五味子的石油醚提取物呈低度敏感,对五倍子的丙酮提取物等共25种提取物表现为中度敏感;五倍子、大黄的醇提物对供试菌的抑杀菌效果明显优于其他3种中草药的任何一种...     

免疫增强剂对河鲫鱼白细胞吞噬和溶菌酶活性的影响

在饵料中添加不同含量的免疫增强剂(0.2%,0.5%,0.8%)连续投喂21d。在0,1,4,7,14,21d检测河鲫鱼(Carassius auratus)血液白细胞的吞噬活性、血清和体表粘液的溶菌酶活性。结果表明,该免疫增强剂可使河鲫鱼血液中白细胞吞噬活性、血清和体表粘液的溶菌酶活性都有明显提高。在停止投喂后7d,血清溶菌酶的活性逐渐降低与对照组无显著差异(P>0.05),但白细胞吞噬活性依然显著差异于对照组(P<0.05)。     

外来种伊乐藻光合能力对三种生态因子的响应研究

为了解外来种伊乐藻的生态适应性,通过测定其光合产氧量的方法,研究了其光合能力对温度、光照强度和pH3种生态因子的响应。结果表明:在温度和光照范围分别为10～35℃和1×103～5.3×103lx的条件下,伊乐藻光合净产氧量和总产氧量都与温度和光照呈正相关,随温度和光照强度的增加,光合净产氧量和总产氧量呈增加趋势,对不同的温度和光照组合均有很强的适应性;在5300lx条件下,30℃时总产氧量最高,为1.814mg/(L.h.g),净产氧量也最高,为1.47mg/(L.h.g);在30℃时,5300lx光照强度下其总产氧量和净产氧量均最高,光合能力强,但未达光饱和点;最低光强度条件下未达光补偿点。在pH5～9的5种梯度内,适宜pH范围为5～7,pH为6时生长最佳。伊乐藻光合能力对3种生态因子响应的基本生理生态学特征为:对光照强度和温度的适应性较强,在较强的光照、较高的温度和中性略偏酸的水环境中生长较好。     

蜈蚣藻多糖降血糖及降血脂活性的研究

本文通过建立四氧嘧啶高血糖小鼠模型和高脂饲料高血脂小鼠模型,进行摄入不同剂量的蜈蚣藻多糖的动物实验,以测定的小鼠空腹血糖值、大鼠血脂水平[胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL—C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）]以及肝脏的生化指标值,探讨蜈蚣藻多糖的降血糖、降血脂活性效果。结果表明蜈蚣藻多糖能显著降低高血糖小鼠的空腹血糖值及高血脂小鼠的TC,TG,LDL—C含量,提高HDL—C含量。蜈蚣藻多糖具有降血糖、降血脂等功效。     

南极磷虾粗酶液中蛋白酶的基础酶学性质研究及抑制剂的开发

本研究探讨了反应温度、pH、金属离子(Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)、Al~(3+)和Ca~(2+))对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的影响,研究了苯甲基磺酰氟(PMSF)、EDTA·2Na、碘乙酰胺(IAM)和甲苯磺酰–苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK)对蛋白酶活性的抑制效果。结果显示,南极磷虾粗酶液中蛋白酶的最适反应温度为40℃;最适反应pH值为8.0;当金属离子浓度为0.5 mmol/L时,Zn~(2+)、Mg~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)和Al~(3+)金属离子对蛋白酶酶活的抑制率分别为55.02%、55.02%、35.39%、20.67%和41.12%,而Ca~(2+)离子对蛋白酶活有明显的促进作用;PMSF和EDTA·2Na对蛋白酶酶活具有较为显著的抑制作用,PMSF的浓度为8.0 mmol/L时,抑制率为60%;EDTA·2Na浓度为0.6 mmol/L时,抑制率为86.67%;IAM在低浓度时有一定的抑制作用;TPCK低浓度时抑制效果不明显,浓度升高时有一定的抑制作用。在5~30℃的温度范围内,随着温度升高,EDTA·2Na对蛋白酶酶活的抑制效果逐渐增加。本研究阐明了影响南极磷虾粗酶液蛋白酶酶活的因素,开发了针对南极磷虾粗酶液中蛋白酶活性的抑制剂,为南极磷虾在食品领域的开发利用提供了基础理论数据。