鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株适应在鸭胚成纤维细胞上生长的研究

对分离自鸭体的鸭病毒性肠炎病毒CH强毒株(DEV-CHv)进行了适应在鸭胚成纤维细胞(DEF)上生长的研究。结果表明,DEV-CHv病死鸭肝脏悬液以绒毛尿囊腔途径经10日龄鸭胚连续传代2次,取尿囊液接种细胞的方法可获得适应DEF生长的DEV-CHv,而肝组织内病毒直接接种在DEF上则不生长。DEV-CHv刚适应DEF时以细胞变圆、折光度增强为病变特征,而适应DEF后以细胞脱落和形成圆形蚀斑为特征。适应DEF的DEV-CHv通常30h左右使细胞脱落,36h左右在细胞单层上形成蚀斑,48h时细胞病变可达80%以上。     

鸭肿头出血症病毒在鸭胚原代成纤维细胞中增殖特性的研究

将鸭肿头出血症病毒（DSHDV）强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚，传3代，取第3代尿囊液接种鸭胚成纤维细胞（DEF），传代培养至有细胞病变出现，并对接毒细胞进行TCID50动态检测和透射电镜观察。结果显示，第1代接毒细胞培养至120h出现变圆、脱落，并形成少量蚀斑，第2代培养至96～120h，DEF形成大量圆形或椭圆形的典型蚀斑，第3代培养至72～96h，DEF出现典型蚀斑；此后可稳定适应于DEF，典型细胞病变出现于72～96h。DSHDV在DEF上的TCID50值随传代次数的增加而增高，由第1代的10^2.72增加到第10代的10^6.82，最高毒价出现于96h，该点是收获病毒的最佳时间。经透射电镜观察，可见DSHDV粒子呈球形或椭圆形，大小为60～75nm，无囊膜，具有双层衣壳。结果证实，DSHDV强毒株已经适应了DEF，传代后可获得较高的病毒效价。     

雏鹅新型病毒性肠炎病毒对鸭胚成纤维细胞的适应性及增殖特性

为了获得适宜雏鹅新型病毒性肠炎病毒（NGVEV）体外培养的细胞系，开展了NGVEV强毒株在鸭胚成纤维细胞（DEF）适应性和增殖特性的研究。结果表明，NGVEV强毒株经尿囊腔接种10日龄鸭胚传4代，取尿囊液接种DEF，第1代无明显细胞病变；第2代培养至72～96hDEF出现颗粒状缺失、脱落，但无典型蚀斑出现；第3代培养至96～120h，DEF形成大小不等、圆形或椭圆形的典型蚀斑；第5代以后的NGVEV可稳定适应于DEF，典型细胞病变出现于48～72h。取适应DEF的NGVEV感染DEF细胞后制作超薄切片经电镜观察，可见典型的腺病毒粒子，大小为70～90nm。NGVEV在DEF上的TCID5。值随着传代次数增加而增高，由第1代的10^1.23增加到第8代的10^8.02，最高毒价出现于96～144h，96～120h是收获病毒的最佳时间。     

鸭黄病毒SDbz株的分离与初步鉴定

鸭黄病毒病为近年来新发的鸭病,给养鸭业带来了极大的经济损失。为了深入研究本病的防制,本试验对鸭黄病毒(duck flavivirus,DFV)进行了分离鉴定。取疑似感染DFV的病鸭病料,经细菌分离初步排除细菌感染后,应用RT-PCR检测呈现DFV阳性,处理后将其接种到鸭胚成纤维细胞(DEF)和健康鸭胚上进行病毒分离传代。结果显示,在DEF细胞上第1代48 h就开始出现CPE,随着时间的延长CPE更加明显,通常在72~96 h产生典型CPE;接种鸭胚每一代均出现死亡,且死亡时间多集中于接种后60~72 h,死亡鸭胚胚体水肿、出血、发育不良、胚肝严重出血、肿胀或斑驳样坏死等病变。将病毒DEF细胞和鸭胚分离物应用血凝试验、毒价测定、病毒中和试验、RT-PCR及人工感染试验进行检测鉴定,证明所分离到的病毒为DFV,并将其命名为DFV SDbz株。     

复方中药“禽康散”对鸭瘟病毒感染鸭胚及成纤维细胞的保护效应

将不同浓度复方中药“禽康散”和鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)分别以不同方式接种到鸭胚尿囊膜后观察其对DPV感染的鸭胚保护率;用MTT法测定“禽康散”对鸭胚成纤维细胞(DEF)的安全质量浓度和增殖的影响,及安全质量浓度范围内的“禽康散”对DPV感染鸭胚成纤维细胞(DEF)能力的影响.结果显示,“禽康散”在10日龄鸭胚内对DPV具有显著的杀灭和阻断感染的作用.“禽康散”对DEF的最大安全质量浓度为2-4 g/mL,在2-4～2-8 g/mL质量浓度范围内对DEF有显著的增殖和抑制DPV感染DEF的能力,且与加药方式和药物质量浓度有一定关系.结果表明,一定质量浓度的“禽康散”对DEF具有增殖作用,并对DPV在鸭胚内和细胞水平上均有较好的杀灭和拮抗作用.     

河北省鸭肝炎病毒的分离鉴定和病毒的细胞培养

从某鸭场疑似鸭病毒性肝炎的发病雏鸭及病死雏鸭肝脏中分离到1株病毒，经鉴定为鸭肝炎病毒。利用鸭胚肝细胞培养病毒，呈现典型CPE，向细胞维持液中加入1％的鸭胚尿囊液，CPE的维持时间可延长至60小时。将病毒的细胞培养物回归鸭胚和雏鸭．其致病力不见明显减弱。     

一种从鸭新分离的黄病毒研究初报

从以产蛋下降为主的樱桃谷种鸭以及出现神经症状的雏鸭各分离出1株病毒,分别命名为BZ株和LC株.该2株病毒对SPF鸡胚和健康鸭胚均能产生相同的病变,分离病毒不能凝集鸡、鸭、鹅、鸽等的红细胞,在鸭胚成纤维细胞(DEF)能够产生典型的细胞病变(CPE),电镜下观察到约50 nm的病毒粒子.病理组织学研究表明,二者在临床上均可导致脑组织危害,表现为脑膜水肿、血管充血和皮质层神经胶质细胞增生等.血清学检测表明,分离病毒与禽流感病毒(AIV)、鸭瘟病毒(DEV)、新城疫病毒(NDV)等病原无交叉.生物学特性鉴定该病原为有囊膜单股RNA病毒.利用不同禽病的特异性引物分别进行PCR或RT-PCR,均未扩增出特异条带.设计随机引物进行RT-PCR,扩增出基因片段,利用GenBank进行Blast同源比较,结果发现,分离病毒与以色列火鸡脑膜脑炎病毒(Israelturkey meningo-encephlitis virus,TMEV)和在马来西亚发现的Tembumu病毒至少在2段基因上具有较高的同源性,属于黄病毒属.测序表明,分离病毒与Tembumu病毒的非结构蛋白(NS5基因)和囊膜蛋白(E基因)的核苷酸同源性为86.7%～90.2%和87.0%～91.8%,与TMEV的NS5基因和E基因的同源性为72.4%～73.2%和72.7%～72.8%.2分离株之间E基因和NS5基因的核苷酸同源性均为99.5%.血清中和试验表明,BZ株阳性血清可以中和LC病毒,因此证实二者可能是同一种病毒.综合以上研究,建议将该病命名为"鸭病毒性脑炎"(Duck viral encephalitis disease).     

鸡源REV对HBK-SPF雏鸭的感染试验

为研究鸡源网状内皮组织增殖病病毒(REV)对HBK无特定病原体(SPF)鸭的致病性,利用鸡源REV现地分离株REV-HN,分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF)、鸭胚(尿囊腔和卵黄囊腔接种)和雏鸭(口腔接种),试验设空白对照组,雏鸭还设有同居感染组.接种REV后不同时间收获DEF和胚体,及雏鸭的外周血淋巴细胞(PBL)和免疫器官,提取基因组DNA,通过RT-PCR和PCR方法检测REV前病毒env基因.结果在DEF中未检测到特异性的env基因片段,而在卵黄囊接种后72 h鸭胚胚体和试验感染的雏鸭PBL中检测到.接种后30 d,在1羽感染REV的雏鸭肾、胸腺和法氏囊中检测到REV前病毒.本研究为利用SPF鸭研究REV提供了依据.     

鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒（DPV34）经12日龄鸭胚连续传2代，收获的尿囊液DPV34F2作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞，连续传代5次。结果，从第2代开始，接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变，随首代次的增加，细胞病变愈加明显。经电镜观察，第5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子；将第5代培养物接种鸭胚，出现典型鸭瘟病变；用PCR方法检测培养物，也出现DPV的特征DNA带。     

鸭瘟灭活疫苗种毒筛选及生产用种毒种子批的建立

本研究通过鸭胚(DE)传代,建立了鸭瘟病毒(DPV)AV1221株的鸭胚适应毒.通过与其他2株DPV(AV1222株鸡胚毒和AV18株鸭胚毒)免疫原性、毒力等特性的比较,选择AV1221株DE2代鸭胚毒作为制苗用种毒,NJ株D5代鸭肝组织毒作为检验用强毒.使用鸭胚对AV1221株DE2毒进行了连续6次传代.对DE2代～DE7代冻干种毒的鉴定结果表明:未发现细菌、霉菌、支原体和外源病毒污染;病毒含量为每0.2 mL含104.38～105.25ELD50;能够被DPV抗血清中和;制成灭活疫苗,免疫成鸭后均能够产生完全保护.依据试验结果建立了能够满足疫苗生产所需的生产用种毒的种子批.     

北京鸭与樱桃谷鸭的分子遗传关系分析

为了分析北京鸭和樱桃谷鸭的遗传关系,采集包括北京鸭、在英国培育而成的肉鸭品种樱桃谷鸭及其它5个中国地方鸭品种共248个个体,利用11个微卫星标记对这7个鸭品种进行遗传关系分析.FST分析结果表明北京鸭与樱桃谷鸭的遗传分化程度最低,只有0.0795;遗传距离(Ds)分析发现北京鸭与樱桃谷鸭的遗传距离最近,为0.1079;群体分化时间分析表明二者的分化时间为98年,北京鸭与其它地方鸭品种的分化时间在282至694年之间;聚类结果显示北京鸭、樱桃谷鸭和建昌鸭聚为一类;巢湖鸭、高邮鸭、绍兴鸭和金定鸭聚为另一类.这些结果表明了北京鸭与引进品种樱桃谷鸭有非常密切的遗传关系,为樱桃谷鸭培育自北京鸭这一说法提供了分子遗传学的证据,同时本研究还发现北京鸭与樱桃谷鸭在遗传背景上已经发生了一定程度的分化.     

鸭病毒性肝炎研究：强毒在雏鸭和成年鸭体内的分布和排泄

１日龄雏鸭肌肉接种强毒株鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）后，经Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测，在显现临床症状和死亡鸭的肝脏及直肠粪便中可测到ＤＨＶ，无症状或未死雏鸭体内测到ＤＨＶ的顺序为：心→肾→肺→胸肌→脑；ＤＨＶ强毒进入成年鸭体内后４４ｈ可在直肠粪便中测到ＤＨＶ，其体内测到ＤＨＶ的顺序为：心→肾→肺→肝→肠，而胸肌和脑均未测到ＤＨＶ；同居感染成年鸭体内测到ＤＨＶ的顺序是：肺→脾→肝→心→肾→肠。此外，还讨论了鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）的发病机理。     

缙云麻鸭与绍兴鸭各品系的遗传距离分析

采用20对微卫星标记对缙云麻鸭与绍兴鸭3个品系的遗传结构进行了分析.结果表明缙云麻鸭与绍兴鸭群体的平均杂合度为0.5946～0.6918,试验共检测到178个等位基因.在DA基础上的UPGMA法聚类图将4个品系聚类为2个类群,聚类结果与各品种的生态地域分布和经济类型有着一定的关系.研究结果为缙云麻鸭种质特性研究提供了基...     

缙云麻鸭笼养行为观察

缙云麻鸭为典型的蛋用型鸭种，具有体型小、胆子小、神经敏感等特点。为更好地发挥笼养蛋鸭的生产潜力、制定科学的笼养蛋鸭饲养管理措施，在笼养蛋鸭试验期间，特对笼养蛋鸭的行为进行了观察。     

川麻杂交鸭与樱桃谷鸭、天府肉鸭屠宰性能和肌肉品质的比较

四川麻鸭由于体形较小、皮下脂肪较薄、肌肉水分含量低、肌纤维细小、肌间脂肪分布均匀、鸭味浓郁、风味佳、产品安全无污染而独具特色,深受市场欢迎.但四川麻鸭的生长速度较慢,出栏时间较长,影响养殖的利润.     

种鸭场鸭瘟的PCR快速诊断

鸭瘟是由疱疹病毒属的鸭瘟病毒引起的鸭、鹅等水禽的一种急性、接触传染性疾病.其特征是侵害血管,组织出血,消化道粘膜糜烂,淋巴器官出现病变,实质器官有退行性的病变.1923年Baudet首次报道荷兰的家鸭暴发鸭瘟,现在各养鸭国家和地区均有发生和流行,是危害养鸭业的最为严重的传染病之一.鸭瘟主要引起鸭的死亡、淘汰和产蛋下降,给养鸭业造成了较大经济损失.     

北京鸭／番鸭杂交体系肝脏组织基因表达差异的研究

以番鸭、北京鸭及其杂交后代半番鸭为研究对象,利用mRNA差异显示技术得到肝脏组织基因表达差异图谱.mRNA差异显示表明,肝脏组织的基因表达在纯种群和杂种群之间存在着显著的质和量的差异;5对引物组合显示出41条差异带;分属于7类10种基因表达模式,其中量的差异有3类4种,质的差异有4类6种.这些基因差异表达模式说明了杂种的基因表达调控方式发生了变化,可能是mRNA水平上杂种优势形成的分子遗传基础.     

凤头白鸭与连城白鸭的群体遗传多样性分析

为系统地评价、保护凤头白鸭资源的遗传多样性,进一步对其开发利用,本研究利用12个微卫星位点(STR分型技术)对凤头白鸭与连城白鸭(各60只)2个群体的遗传多样性参数进行检测和计算。结果表明:除位点AJ272578以外,凤头白鸭群体在APL2、AJ272577、AJ272579、AJ515884、APH01、AY493256、AY4932898、CMO11等8个STR位点上的等位基因多于连城白鸭,在AJ515887、AJ515893、AY493313等3个位点上与连城白鸭相等;凤头白鸭群体的有效等位基因数(Ne)、期望杂合度(He)、观察杂合度(Ho)、多态信息含量(PIC)均大于连城白鸭;2个群体的群体内近交系数(Fis)分别为-0.02、0.09,凤头白鸭群体表现为杂合子过剩。综上,凤头白鸭群体的遗传多样性较连城白鸭更为丰富。     

北京鸭/番鸭杂交体系肝脏组织基因表达差异的研究

以番鸭、北京鸭及其杂交后代半番鸭为研究对象,利用mRNA差异显示技术得到肝脏组织基因表达差异图谱。mRNA差异显示表明,肝脏组织的基因表达在纯种群和杂种群之间存在着显著的质和量的差异;5对引物组合显示出41条差异带;分属于7类10种基因表达模式,其中量的差异有3类4种,质的差异有4类6种。这些基因差异表达模式说明了杂种的基因表达调控方式发生了变化,可能是mRNA水平上杂种优势形成的分子遗传基础。