短命植物抱茎独行菜的生殖对策分析

对十字花科短命植物抱茎独行菜的生长节律、开花结实特性进行观测，并计算其生殖配置。抱茎独行菜的整个生活史为60d左右，生殖时问早，持续时间相对较长，占整个生活史的3／4。生殖配置为50．36％，高于一次结实的草本植物的生殖投入。高的生殖投入与荒漠环境及短的生长周期有关。     

室外人工种植抱茎独行菜种子破除休眠的初步研究

[目的]初步探索室外种植的抱茎独行菜(Lepidium perfoliatum L.)种子破除休眠的方法,为深入研究其种子粘液质特性和农业栽培、开发抱茎独行菜这种优质牧草提供丰富的物质基础.[方法]以室内种植的抱茎独行菜种子为材料,采用不同化学和物理方法处理其种子,测定其种子的萌发率.[结果](1)4℃、CA<,3>、H<,2>O<,2>单独处理以及GA<,3>与H<,2>O<,2>组合处理均可打破抱茎独行菜种子的休眠;(2)GA<,3>与H<,2>O<,2>共同处理效果最好,其中以500 mg/LGA<,3>处理3 d后15;H<,2>O<,2>处理20 min的种子萌发率最高,可高达94.44;.[结论]推测造成室内种植的抱茎独行菜种子休眠的可能原因是种胚的活力不够,从而使得其种子在萌发过程中不能有效挣脱种皮的机械束缚从而导致休眠.     

独行菜属植物种子总蛋白4种提取方法的比较

【目的】研究适用于抱茎独行菜和独行菜种子SDS-PAGE电泳和双向电泳的蛋白样品提取方法,为研究两种独行菜种子蛋白组学奠定基础。【方法】采用4种蛋白质提取方法提取种子总蛋白,测定和分析蛋白产量和SDS-PAGE电泳图谱。【结果】TCA/丙酮提取法获得蛋白量较多,杂质少,电泳条带多且清晰;裂解液提取法蛋白的产量最高,有拖尾且杂质多;Tris-HCl提取法和苯酚提取法的蛋白产量低,杂质少;裂解液提取法和苯酚提取法获得的蛋白在SDS-PAGE电泳时易产生高丰度蛋白的干扰。对比TCA/丙酮提取法和苯酚提取法获得的两种独行菜种子总蛋白SDS-PAGE图谱,发现有6条蛋白差异条带。【结论】TCA/丙酮提取法提取两种独行菜种子总蛋白效率高,纯度高且杂质少,可用于SDS-PAGE电泳和双向电泳分析;两种独行菜种子蛋白SDS-PAGE电泳的差异谱带可为甄别两种独行菜种子提供参考依据。     

抱茎苦荬菜中腺苷超声提取工艺研究

[目的]优选抱茎苦荬菜中腺苷的超声水提工艺。[方法]在单因素试验基础上,以料液比、提取温度、提取时间3个因素进行正交试验。[结果]3个因素对抱茎苦荬菜腺苷得率影响程度为：提取时间〉提取温度〉料液比。抱茎苦荬菜中腺苷的水提最佳工艺条件为：料液比1：60,提取温度20℃,提取时间20min,腺苷得率高达0.169mg/g。[结论]该研究为充分开发利用抱茎苦荬菜资源和提高腺苷得率提供了理论依据。     

短命植物穿叶独行菜形态学的研究——Ⅱ.繁殖器官的解剖构造

本研究经过对穿叶独行菜繁殖器官的解剖,观察到:萼片、花瓣、药隔和果皮都有较大和大型的贮水细胞;药壁4层,中层1层,退化较早;绒毡层腺质型,消失较晚;1列孢原细胞,2～5列小孢子母细胞;一朵花的花药间减数分裂不完全同步;四分孢子四面体形,孢质分裂同时型;成熟小孢子为3沟3核花粉粒;倒生胚珠,薄珠心型;双珠被,有明显的珠被绒毡层;四分孢子直立式,反足细胞消失早,属蓼型胚囊;胚胎发育十字花型(柳叶菜型);胚乳核为无丝分裂,分裂不同步。     

人工栽培抱茎獐牙菜矿物质元素含量的研究

采集种子采收前和采收后的抱茎獐牙菜全植株,分别分析测试其钾、钠、钙、镁等矿物质元素的含量。结果表明:青海西宁廿里铺种植抱茎獐牙菜矿物质元素主要分布于植株的茎杆部位,矿物质元素含量在成熟种子采收前后具有动态性变化的特征。     

抱茎獐牙菜中当药黄素的HPLC测定研究

[目的]采用反相高效液相色谱法对抱茎獐牙菜中当药黄素的含量进行测定。[方法]色谱柱为Kromasil C18(250mm×4.60mm,5μm),流动相为甲醇-浓度0.02%磷酸水溶液,梯度洗脱,流速为1ml/min,检测波长为260nm。[结果]当药黄素在0.92-4.60μg范围内线性关系良好,r=0.9995。平均加样回收率为98.73%,RSD为0.31%。[结论]抱茎獐牙菜中当药黄素在花的部位含量最高。该测定方法适应性广,可用于测定抱茎獐牙菜中的当药黄素。     

转ZmHAK1拟南芥的表型及吸钾量

测定了不同浓度低钾处理条件下的拟南芥吸钾量和根伸长量以及一些性状指标如千粒重、株高、角果长、开花时间等。结果表明:转基因拟南芥开花时间早于突变体;子粒千粒重大于突变体;在介质中钾浓度一定范围内,介质的钾含量越低,转基因拟南芥的根伸长量越显著大于突变体的,说明转基因拟南芥对低钾胁迫有更好的适应性。与拟南芥突变体相比,转基因拟南芥的吸钾量较大,说明转基因拟南芥在低钾胁迫下有较强的吸钾能力。     

拟南芥WRI1基因的克隆及其植物反义载体的构建

应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了拟南芥WRI1基因,并将其克隆到pMD18-Tvector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了该基因全序列.结果表明,该基因全长为1 287 bp.将拟南芥WRI1基因反向克隆到植物表达载体pCambia1300的35S启动子下游,构建了该基因的植物反义表达载体.     

拟南芥AAP1基因的克隆及植物表达载体的构建

拟南芥氨基酸透性酶1(AAP1,也叫NAT1)是植物中第一个被分离的氨基酸转运蛋白,在拟南芥主根、侧根、根毛及根表皮细胞中均有增加氨基酸含量的作用。本研究利用RT-PCR的方法,从拟南芥中克隆了该基因,测序结果与GenBank(NM-104616.4)中已发表的拟南芥AAP1(AtAAP1)基因的同源性高达99.93%;并将AtAAP1基因与pCAMBIA3300构建p3300-AAP1植物表达载体,为过表达AtAAP1基因,提高作物氨基酸含量,从而改善作物氮素利用效率提供参考。     

拟南芥POT基因密码子使用特性分析

运用CodonW程序对拟南芥(Arabidopsis thaliana)POT基因密码子组成、同义密码子使用频率和全长编码区密码子进行分析.结果表明,拟南芥POT基因密码子适应指数(CAI)与同义密码子第三位碱基含量(C3s)、密码子偏爱指数(CBI)均呈显著正相关(P＜0.05),与最优密码子使用频率(FOP)呈极显著正相关(P＜0.01).有效密码子数(ENC)与同义密码子第三位碱基含量(C3s)呈显著正相关(P＜0.05),与GC3s呈极显著正相关(P＜0.01),与同义密码子第三位碱基含量(T3s)呈极显著负相关(P＜0.01).拟南芥POT基因密码子使用相对概率(RSCU)＞1的密码子多以碱基A或T结尾.     

短命植物穿叶独行菜形态学的研究 Ⅰ.营养器官的解剖构造

本研究用石蜡切片法,观察到穿叶独行菜有适应特殊环境的结构特点;根系分布在土壤表层;根的次生木质部导管大;根、茎、叶中有大型贮水细胞;茎、叶表皮有较厚的角质层;叶肉的栅栏组织发达,叶绿体小而多;叶主脉和叶柄的基本组织与茎的皮层细胞都有叶绿体,它属四碳(C_4)植物型;根的皮层细胞从初生构造到次生构造只是体积长大,无数量增加;根以皮层木栓化和后期稍有发生的木栓层起保护作用;根、茎、叶中无贮藏的营养物质。     

不同生态型拟南芥FLC基因的序列分析

[目的]对拟南芥春化作用相关基因FLC的序列分析。[方法]先期经过对拟南芥自然群体的春化反应的QTL分析,发现拟南芥5号染色体上有一个与开花有关的QTL,本实验就是运用序列分析确定它与FLC基因是否具有同源性。[结果]意大利拟南芥与瑞典拟南芥在第27位、第461位、第501位、第638位、第738位、第884位碱基上不同。虽然这些碱基有所不同,但是密码子编码出来的第9个氨基酸、第167个氨基酸、第246个氨基酸,由于密码子的简并性,编码的蛋白质均相同。[结论]拟南芥具有丰富的遗传多样性,其FLC基因序列长度高度保守、碱基变异位点丰富密码子的简并性它们均编码同一种氨基酸对拟南芥生长没有影响。这表明拟南芥的基因序列会受到环境的影响。     

拟南芥AGL15基因的克隆及其植物超表达载体的构建

为了研究AGL15基因在种子发育过程中的作用,应用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增了拟南芥AGL15基因,并将其克隆到pMD20-T vector载体上,对重组子进行PCR检测和限制性内切酶分析,并测定了该基因全序列。结果表明,该基因全长为807bp。将拟南芥AGL15基因定向克隆到植物表达载体pCambia1301的35S启动子下游,双酶切鉴定结果表明,AGL15基因在双元表达载体中的插入位置和方向都正确,即成功构建了该基因的植物超表达载体。     

不同生态型拟南芥FLC基因的序列分析

[目的]研究拟南芥春化作用相关基因FLC的序列。[方法]对拟南芥自然群体的春化反应进行QTL分析,发现拟南芥5号染色体上有一个与开花有关的QTL,再运用序列分析确定它与FLC基因的同源性。[结果]意大利拟南芥与瑞典拟南芥在第27、461、501、638、738、884位碱基上不同。但密码子编码的第9、167、246个氨基酸由于密码子的简并性,编码的蛋白质均相同。[结论]拟南芥具有丰富的遗传多样性,由于FLC基因序列长度高度保守、碱基变异位点丰富密码子的简并性,它们均编码同一种氨基酸,对拟南芥生长没有影响。     

采用农杆菌花序浸染法获得转crtB基因拟南芥

利用农杆菌花序浸染法将构建的植物表达载体pBI121-tp-crtB转入拟南芥(Arab idopsis thaliana)野生型Columbia中,共获得了14株转基因系,并进行了转基因拟南芥种子萌发实验.结果表明tp-crtB基因已经成功转入拟南芥中,其不影响拟南芥种子的正常萌发.     

枯草芽孢杆菌突变株proBA基因植物表达载体的构建及转基因拟南芥的耐盐性能初探

从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)抗脯氨酸结构类似物突变株中克隆得到脯氨酸合成途径中的关键酶基因proB(编码γ-谷氨酰胺激酶)和proA(编码谷氨酰胺-γ-半醛脱氢酶),同时设计引物从拟南芥基因组中扩增得到吡咯啉-5-羧酸合成酶B基因(p5csB)的第一个内含子序列,将其分别与proB和proA基因通过PCR拼接后,酶切连接构建得到植物双元表达载体pBI121pro.以LBA4404为介导,采用真空抽滤的方法转化得到转proBA基因拟南芥;第三代的纯合子(T3)通过半巢式PCR的方法验证外源基因已整合到拟南芥基因组中,GUS活性分析表明外源基因在叶片中表达最强,茎部其次,根部最弱;对600 mmol·L-1致死浓度NaCl耐受能力的分析表明,转基因拟南芥的平均存活时间(37.8 min)明显高于野生型拟南芥(26 min).     

拟南芥转录因子CBF1基因的克隆与原核表达

CBF1转录激活因子与植物的抗逆密切相关,根据GenBank中拟南芥（Arabidopsis thaliana）CBF1（C-repeat/dre binding factor 1）基因的编码区设计1对特异引物,通过RT-PCR扩增出拟南芥CBF1基因,随后亚克隆到pMD18-T载体,测序、序列分析表明与拟南芥CBF1对应区域相似性为100%。将该片段亚克隆到原核表达载体pET22b（＋）中构建原核表达质粒,转化大肠杆菌ER2566,在IPTG诱导下产生CBF1蛋白,SDS-PAGE结果表明表达的蛋白约24ku,与预期一致。