猪圆环病毒2型和猪细小病毒混合感染的PCR检测

2012年9月河南省新乡市某养猪场发生一例以初产母猪流产、死产,断奶仔猪精神沉郁、呼吸困难、食欲不振、轻微腹泻、渐进性消瘦为特征的疾病。采用PCR技术进行检测,结果表明猪圆环病毒2型和猪细小病毒均为阳性,结合发病情况、临床症状及剖检变化,初步确定为PCV2和PPV混合感染。     

PCR方法检测猪园环病毒2型感染

参考GenBank已发表的PCV-2基因序列,根据PCV-2(AFff27217)和PCV-1(U49186)全基因序列设计合成-对引物,进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳,呈现一条大小约1 154 bp的特异条带,经条件优化,建立了猪病料中PCV-2感染的PCR检测方法.采用建立的PCR方法对江西各地猪场133份猪的病料进行PCV-2检测,结果表明,受检猪的组织及血清样品中PCV-2的总检出率为53.38%,证实江西各地猪场存在PCV-2感染.     

河南省猪圆环病毒2型感染的病原流行病学研究

采用PCR方法,从来自河南省不同地区的822份猪肺脏等病料组织中共检出514份猪圆环病毒2型(PCV2)阳性样品,总检出率为62.6%。2011年3-12月,PCV2在河南省的检出率介于41.6%～85.3%。其中,9-12月的检出率显著高于3-8月(P<0.05)。在河南省不同地区的猪群中,PCV2的检出率介于44.6%～87.9%;其中,驻马店市、漯河市、信阳市3个地区PCV2的检出率显著高于全省其他地区(P<0.05)。PCR检测过程中还发现,PCV2的检出率与猪群类别(日龄)有一定关系,其检出率随猪年龄的增长而升高(P<0.05)。在211份PCV2阳性样品中,有144份(占69.2%)能分离出不同的共感染菌。最常见的共感染菌是链球菌(52.1%,75/144)、副猪嗜血杆菌(42.4%,61/144)、大肠杆菌(39.6%,57/144)和多杀性巴氏杆菌(20.1%,29/144)。研究表明,PCV2在河南省10多个地区的猪群中广泛存在,且与病原菌的共感染情况非常严重。     

检测猪圆环病毒2型PCR方法的建立

[目的]为快速诊断猪圆环病毒病提供参考。[方法]根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)的核苷酸序列设计并合成1对特异性引物,建立诊断PCV-2地方分离株的PCR方法。[结果]各物质在PCR反应中最佳浓度分别为:dNTP 220 pmol/ml,Taq酶0.1 U/μl,引物20 pmol/μl。从PCV-2阳性病料中提取DNA,在优化条件下进行PCR扩增,获得预期的494 bp特异性条带。用该PCR方法对PCV-2、PRRSV、HCVS、IV、PPV进行检测,PCV-2为阳性,而PRRSV、HCV、SIV、PPV检测均为阴性,未出现交叉反应,说明该PCR方法对PCV-2具有良好的特异性。该PCR方法可检出1.25 ng模板DNA,具备较高的敏感性。[结论]使用该PCR方法检测PCV-2是切实可行的。     

猪圆环病毒2型和3型双重荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的方法,参照GenBank上已登录的PCV2 Cap基因和PCV3 Cap基因的保守序列,设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了同时检测PCV2和PCV3的双重荧光定量PCR检测方法,并对其进行特异性、灵敏性、可重复性检验.特异...     

陕西省PCV2感染的血清学调查

2004-01~2005-06,从陕西榆林、宝鸡、西安、渭南、汉中、商洛、安康等7个地区的猪场采集不同日龄猪血清样品237份,用间接EL ISA方法进行猪圆环病毒2型(PCV 2)感染的血清抗体检测,并用阻断EL ISA方法对部分血清样品进行了猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因蛋白的抗体检测。结果表明,未断奶仔猪PCV 2血清抗体阳性率为0%(0/40),断奶仔猪为28.6%(2/7),肥育猪为43.7%(31/71),种公猪为7.7%(1/13),后备母猪为15.6%(7/45),经产母猪为60.4%(29/48),临床上有多系统衰竭综合征(PMW S)疑似症状的13头断奶仔猪的阳性率为61.5%(8/13),237份血清的总阳性率为32.9%(78/237);PCV 2与PRV混合感染率为21.7%(5/23)。     

猪细环病毒和猪圆环病毒2型混合感染的检测

为诊断中牟某猪场送检病料的感染类型,调查了其流行病学、临床症状和病理剖检特征,并采用PCR检测技术对其进行检测。结果表明,该猪场存在猪细环病毒与猪圆环病毒2型的混合感染。     

PCV2套式PCR检测方法的建立及应用

根据猪圆环病毒2型GD株及已发表的PCV2的全基因组序列,设计1对PCV2型特异性引物,对可疑病料进行PCR扩增。将扩增产物连接到pMD 18-T载体上并克隆到大肠杆菌DH5α中,提取质粒进行套式PCR、酶切、测序鉴定,结果扩增出了PCV2的目的片段。将测序结果与GenBank收录的PCV2序列进行比较,发现同源性均在90%以上。用该PCR方法对287个猪场的1 560份样品进行了检测,其中983份为PCV2阳性,阳性率为63%。     

猪圆环病毒2型和3型双重PCR方法的建立及在藏猪猪圆环病毒检测中的应用

为同时并快速检测和鉴别猪圆环病毒2型(PCV-2)与猪圆环病毒3型(PCV-3),并调查西藏林芝地区猪圆环病毒的感染情况,根据笔者所在实验室PCV-2和PCV-3单重PCR方法,建立检测PCV-2和PCV-2双重PCR的方法,构建标准质粒并经优化反应条件和反应体系后进行特异性和灵敏性的测定,并对西藏林芝周边地区藏猪粪便...     

PCV2感染猪血管内皮细胞相关免疫调节分子的表达变化

将猪圆环病毒2型(PCV2)接种猪血管内皮细胞(VEC),于接种后不同时间收集细胞及上清,利用实时荧光定量PCR和ELISA技术分析VEC相关免疫调节分子表达变化。与对照组相比,PCV2感染后血管内皮生长因子(VEGF)、IL-6与巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的mRNA水平变化趋势基本一致,VEGF和M-CSF在感染后12h显著上调,IL-6与M-CSF在48h显著下调;MCP-1和IL-8在感染后4h和48h均显著上调,且IL-8在24h时上调显著,72h下调显著。蛋白水平上,VEGF在4h显著下降,24h显著增高;IL-8在4h和24h显著上升。以上结果表明,PCV2体外感染导致VEC免疫调节功能分子表达异常,其炎性趋化、黏附能力以及对树突状细胞(DC)的分化、成熟等免疫调节功能可能受到影响。     

豫北地区猪圆环病毒2型感染的血清学调查

[目的]明确河南省豫北地区PCV2感染的流行情况,以便控制PCV2感染的流行。[方法]从河南省豫北地区安阳、鹤壁、新乡、濮阳4市的猪场采集不同日龄猪群血清样品338份,用间接ELISA方法进行猪圆环病毒2型(PCV2)感染的血清抗体检测。[结果]结果表明:PCV2血清抗体阳性率:哺乳仔猪为16.0%(8/50);断奶仔猪为49.5%(53/117);生长肥育猪为51.4%(36/70);种公猪为18.1%(4/22);后备母猪为20.6%(7/34);经产母猪为54.5%(29/55);阳性率为70.4%(19/27),338份血清总阳性率为40.6%(137/338)。[结论]河南省豫北地区养猪业已受到猪圆环病毒2型的感染,应引起高度重视。     

安徽省部分猪场猪圆环病毒2型和3型感染情况调查

[目的]调查安徽省猪圆环病毒的感染情况。[方法]2018年,采用荧光定量PCR方法对来自安徽省3个地区12个猪场健康猪群的239份扁桃体样品进行了PCV2和PCV3检测。[结果] PCV2个体阳性率为67.4%(161/239)、群体阳性率为91.7%(11/12),PCV3个体阳性率为14.6%(35/239)、群体阳性率为58.3%(7/12),PCV2/PCV3混合感染个体阳性率为5.0%(12/239)、群体率阳性为41.7%(5/12)。不同生长阶段、不同地区和不同规模的生猪PCV2、PCV3及PCV2/PCV3混合感染存在差异。育肥猪PCV2感染率最高(84.3%),能繁母猪PCV3感染率(51.9%)及PC2/PCV3混合感染率(14.8%)最高;C地区PCV2感染率最高(89.9%),B地区PCV3感染率(36.2%)及PC2/PCV3混合感染率最高(8.8%);中型猪场PCV2感染率最高(82.2%),大型猪场PCV3感染率(38.3%)及PC2/PCV3混合感染率最高(10.0%)。[结论]安徽省猪群中存在PCV2和PCV3流行,需引起足够重视。     

亚临床症状猪群中PRRSV和PCV2的感染情况

[目的]了解亚临床症状猪群中PRRSV和PCV2的感染情况。[方法]选择7个有PRRSV和PCV2感染史且有亚临床症状的猪群,通过ELISA和PCR的相结合方法检测其PRRSV和PCV2的感染情况。[结果]ELISA检测结果表明,所有猪场12周龄仔猪PRRSV和PCV2抗体能观察到血清抗体转化。PCR结果表明约3/7的猪场8周龄仔猪PRRSV呈阳性,12和20周龄仔猪PRRSV呈阴性;8~20周龄有不同比例仔猪PCV2呈阳性。[结论]在亚临床症状猪群中PRRSV的感染主要在8~12周龄,而PCV2在8~20周龄都有感染。     

2014年江苏省部分中小规模猪场PCV-2的流行病学调查

应用韩国JBT公司的PCV-2抗体检测试剂盒,对2014年江苏省农业科学院兽医研究所动物疫病诊断检测中心临床门诊收集的。来自宿迁、连云港、南通、盐城和徐州5市未进行PCV-2疫苗免疫接种的32个中小规模猪场的990份血清进行PCV-2的抗体检测,并对其中50份阳性血清进行PCV-2的PCR检测,以诊断和分析PCV-2在江苏的感染情况。抗体检测结果表明,990份血清样品平均抗体阳性率为83.8%。PCR检测结果显示:50份阳性血清的PCV-2检出率为32.0%。表明,PCV-2感染在江苏省中小规模猪场普遍存在。     

河南省猪肺炎支原体感染的流行情况调查

为了对河南省猪肺炎支原体的流行情况进行调查,试验从发生呼吸道疾病的肺中分离鉴定猪肺炎支原体,对疑似猪肺炎支原体的肺组织样品通过液体培养传代、固体培养基培养、吉姆萨染色镜检,PCR扩增,并进行测序比对。结果表明,2017年1—12月从河南省猪场发生呼吸困难的猪的实变的肺脏共采集148份,共分离25株猪肺炎支原体,分离率达16.89%。结果说明猪肺炎支原体在河南省发生呼吸道疾病的猪场中感染率较高。     

山东省规模化猪场猪粪及配合饲料中重金属含量研究

对山东省21家规模化猪场夏、冬两季共126个猪粪样品及18个配合饲料样品中多种重金属(Cr、Cu、Zn、As、Cd和Pb)的含量进行了检测.结果表明,猪粪中Cr、Cu、Zn、As、Cd、Pb的平均检出值分别为12.3、472.8、1 908.6、36.5、0.9、2.9 mg·kg-1.不同猪群粪便中重金属含量存在一定差异,小猪猪粪中Cu、Zn、Cd含量最高,而Cr、As分别在种猪猪粪及育肥猪猪粪中的含量最高.除Cr外,其他5种重金属在冬季样品中的含量均高于夏季样品.猪配合饲料中As、Cu、Zn的最大检出值分别为34.1、211.9、2 883.1mg·kg-1,超过国家标准规定最高添加量的17～35倍,是猪粪中重金属的主要来源.参考相关腐熟堆肥中重金属的限量标准,所调查的猪粪样品若用于堆肥,将导致堆肥产品重金属含量严重超标.因此,必须严格控制猪配合饲料中重金属的添加,以减少猪粪中的重金属含量,降低使用猪粪作为肥料带来的生态环境危害及农产品安全风险.     

贵州规模养猪场主要疫病的流行状况

为给贵州省规模养猪场疫病的预防与控制提供参考,对2008—2010年贵州省动物疫病研究室检测与诊断的规模养猪场疾病发生情况进行了整理分析。结果表明:在免疫猪群中,仍有猪瘟、猪蓝耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒病和猪圆环病毒病的发生,其检出率分别为16.4%、17.8%、16.8%、12.8%和17.1%,在未免疫猪群中的检出率为43.7%、46.3%、26.5%、26.8%和45.6%,且多为混合感染。猪蓝耳病和猪瘟仍是危害规模养猪场的2种重要疫病,且猪圆环病毒病存在严重的隐性感染,多种病原体混合感染趋势加重。     

河南省规模化猪场致病性大肠杆菌血清型鉴定

从河南省29个猪场118份病料中分离出87株细菌,经分离培养、鉴别培养、生化试验鉴定为猪大肠杆菌。对87株大肠杆菌进行血清型鉴定,共定型51株菌,有26株未能定型,定型菌株包括了14种血清型。为中药筛选治疗大肠杆菌提供研究基础。     

四川某规模化猪场仔猪腹泻病的诊疗体会

采用RT PCR方法,从四川某规模化猪场仔猪腹泻死亡病例病料中检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒,并分离细菌,最终鉴定为猪传染性胃肠炎继发大肠杆菌感染。药敏试验结果显示,分离的致病性大肠杆菌对林可霉素和氧氟沙星高度敏感。根据结果制定相应防治措施,经治疗处理后,病情得到有效控制。