微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型血清的研制

为进一步完善中国大肠杆菌菌体微量凝集试验定型血清库,改良微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清的制备工艺,本试验选取大肠杆菌O50、O60、O117、O131血清型进行定型血清制备方法的探究。首先用大肠杆菌不同血清型的参考菌株制备灭活抗原,而后多次免疫家兔以采血获得粗血清,用微量凝集试验的方法确定不同粗血清的交叉凝集素及凝集效价,再通过交叉凝集素吸收法结合血清稀释法消除非特异性凝集,最终研制出特异性良好的微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清。本研究确定了大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型粗血清的主要交叉凝集素,最终成功研制出特异性良好的微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60、O117、O131定型血清共4种,凝集效价在1∶256至1∶2 048之间,其中微量凝集试验用大肠杆菌O50、O60定型血清无交叉凝集素,为单因子定型血清,微量凝集试验用大肠杆菌O117、O131定型血清存在1～2种非特异性的交叉凝集素O14和O107。本研究作为大肠杆菌O抗原定型血清制备工艺摸索过程中的重要部分,为完善中国大肠杆菌菌体微量凝集试验定型血清库,进一步改良微量凝集试验用大肠杆菌O抗原定型血清的制备方法提供了重要理论依据。     

大肠杆菌微量凝集试验的研究

选用与制苗菌株一致的、免疫原性好的、与其它血清型交叉凝集程度大的大肠杆菌培养物（如 Ｏ１, Ｏ２ ）,经离心洗涤,３ｍ Ｌ／ Ｌ 甲醛灭活后制成抗原,与免疫血清在９６ 孔“ Ｕ”型板上进行微量凝集试验,经３７ ℃作用４ ｈ 或室温５～６ ｈ,凝集图形清晰,即可判定。制定的抗原可在４ ℃冰箱中存放６ 个月,临用前稀释至 ２０～４０ 亿／ｍ Ｌ,在抗原中加入少许（１ ｇ／ Ｌ）结晶紫易于观察,不影响结果。用本法监测３ 个群的鸡,免前滴度均在２～４（ｌｏｇ２）,免后２０ ｄ可上升至５～８（ｌｏｇ２）;四群育成母鸡,免前抗体５～８（ｌｏｇ２）,免后２０ ｄ 可上升至７～１１（ｌｏｇ２）;而未免的对照鸡抗体变化不大。鸡群的保护率与攻毒株的凝集滴度呈正相关,８（ｌｏｇ２）以上时可完全抵抗攻击。与试管法相比,本法可使用微量稀释皿,简便快速,可作为大肠杆菌苗免疫监测的方法在生产中推广。     

微量凝集试验对鸡大肠杆菌O抗原血清型鉴定的研究及初步应用

为改进大肠杆菌血清型鉴定方法,用５株标准菌株在９６孔Ｕ型板上进行微量凝集试验,优选了反应及观察条件：每孔中加５０μＬ菌体抗原（浓度为１．５×１０９－２．０×１０９个菌／ｍＬ）和５０μＬＯ抗原单因子血清（稀释度从１／１０－１／８０）混合,于３７℃反应１．５－２ｈ,阳性结果可在黑色背景上清晰观察到片状凝集。试验各株均与原血清型一致。用此法对１７株来自山东某地的鸡大肠杆菌进行了血清型鉴定,结果Ｏ７８为５株,Ｏ３６５株,Ｏ１３１４株,Ｏ７０３株,与以前用常规方法对该地区菌型鉴定结果相符。     

微量凝集试验检测猪水肿病大肠杆菌抗体研究

作者建立了微量凝集试验检测猪水肿病大肠杆菌抗体方法，对试验反应条件进行选择和优化，抗原最适反应浓度为：染色菌泥与生理盐水之比为1：70～80，最佳反应温度为37℃，最佳反应时间为2～3h。本方法快速、简便、经济、灵敏度高且特异性强。为猪水肿病的流行病学检查、疫苗研究及免疫猪群抗体监测提供可靠实用的检测技术。     

鸡大肠杆菌改良微量凝集试验抗原的制备及试验条件优化

本研究对微量凝集试验进行了改良,改进了抗原的制备方法,优选了检测鸡血清中大肠杆菌抗体的微量凝集试验的条件,经方阵试验,抗原最适浓度为70亿/ml,反应最适温度为37℃,最适反应时间为4～5h.结果表明改良后的微量凝集试验具有良好的敏感性和特异性,阳性结果和凝集图案清晰,易于观察.本试验具有敏感、特异、快速、简便、定性又定量的特点,便于推广应用.     

微量凝集试验检测鸡大肠杆菌抗体方法的建立及应用

建立了检测鸡大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）抗 的微量凝集试验法，所用抗原由苗株制得。经方阵试验，抗原最适浓度为４０亿菌／ｍｌ，反应最佳时间为４小时。攻毒试验表明凝集抗体介在１：１６时免疫鸡保护率要达５０％以上，且凝集抗体水平与保护力呈明显正相关。经Ｅ．ｃｏｌｉ多价油乳剂灭活苗免疫的青年鸡在免疫后４２琦平均抗这７．２５ｌｏｇ２本法敏感性高、特异性强、染色抗原使结果判定更加客观和明显。为鸡大肠杆菌病的流行病     

应用微量凝集试验检测鸡抗猪大肠杆菌抗体方法的探索

本试验建立了用微量凝集试验检测鸡抗猪大肠杆菌抗体的方法。经方阵试验，抗原最适浓度为40亿菌/ml，最佳反应温度为37℃，3～4小时观察结果为宜。本方法具有较高的敏感性和特异性，可用于监测免疫猪大肠杆菌疫苗鸡群的抗体水平。     

5种大肠杆菌O抗原定型血清的制备

本研究以大肠杆菌参考菌株CVCC1369(O26)、CVCC3800(O153)、CVCC1489(O157)、CVCC3739(O159)、CVCC3807(O163)为菌种制备免疫抗原并免疫家兔,获得5种大肠杆菌O抗原定型原血清,而后制备多种吸收抗原以消除5种原血清的非特异性凝集素。通过微量凝集试验的方法,确定各血清的凝集价。最终确定了5种大肠杆菌O抗原定型血清的制备方法,为进一步改进大肠杆菌O抗原定型血清的制备工艺提供了思路和依据。     

牛、羊布鲁氏菌病试管凝集试验与微量凝集试验检测方法的比较

血清学检测方法因其快速、安全、高效等特点被广泛应用于布鲁氏菌病的检测和诊断。本文通过对保存的226份牛、羊血清样品同时使用试管凝集法与微量凝集试验进行检测并比较分析其在诊断中的意义。结果显示,微量法与试管法两者的符合率为97.79%,两种检测方法无统计学差异。但微量法的阳性检出率要高于试管法,同时由于微量法具有操作简便、快捷及结果判定更为直观、简单等优点,因此,微量凝集试验更适宜在我国基层布鲁氏菌病大量样本监测、诊断中推广应用。     

大肠杆菌O抗原定型血清标定用抗原的制备

为研制用于标定大肠杆菌菌体抗原(O抗原)单因子定型血清效价的抗原,以大肠杆菌参考菌株CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1414(O74)为菌种,经条件优化确定了抗原制备的工艺。检测结果表明,当菌液调整至OD_(600 nm)值为0.147±0.026时,各型抗原的浓度为1×10~9CFU/m L,将其热处理后制备成反应抗原。按此吸光值各自制备3批抗原,3批抗原与血清的凝集价均分别一致,分别达到2~(11)(O2)、2~(12)(O7)及2~9(O74)。用180种大肠杆菌O抗原单因子定型血清对制备的抗原进行检测,制备的抗原仅与其对应型的血清发生特异性反应,与其余179种血清均不发生反应。研究结果显示,制备的抗原具有较好的稳定性及特异性,可以用于大肠杆菌菌体单因子定型血清效价的标定。     

大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清的制备

为研制大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清,以大肠杆菌参考菌株CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1414(O74)为菌种制备抗原免疫家兔,获得了定型原血清,并通过比较不同免疫程序及剂量优化了定型原血清的制备工艺。进而按照优化后的定型原血清制备工艺,以大肠杆菌参考菌株CVCC1343(O1)、CVCC1345(O2)、CVCC1350(O7)、CVCC1405(O64)、CVCC1414(O74)、CVCC1439(O100)、CVCC1442(O103)、CVCC1455(O116)、CVCC1466(O128)、CVCC3801(O154)为菌种制备抗原免疫家兔,获得了10种O抗原型定型原血清。将定型原血清分别与180种微量凝集试验抗原逐一反应,明确各原血清与非特异性抗原的交叉凝集价,通过用吸收抗原对原血清进行吸收及稀释的方法消除非特异性凝集,最终制备成大肠杆菌菌体O抗原单因子定型血清。血清质量评价结果表明,新制备的单因子定型血清性状为无色、淡黄色或黄色澄明液体,个别有少量絮状物;无菌生长;特异性良好;凝集效价为1︰2。研究结果显示,制备的大肠杆菌O抗原单因子定型血清具有较好的特异性,可以用于对临床分离大肠杆菌进行O抗原血清型鉴定。     

宁夏部分地区腹泻羔羊源大肠埃希菌的分离鉴定与药敏试验

为掌握宁夏地区羔羊腹泻源大肠埃希菌的耐药性,采集腹泻羔羊肛拭子90份,开展大肠埃希菌的分离鉴定及药敏试验。结果分离到78株大肠埃希菌,对头孢类、氨基糖苷类、喹诺酮类、氟苯尼考、青霉素类、四环素等抗菌药物有较高的敏感性,对万古霉素、复方新诺明、克林霉素耐药(耐药率78.21%~94.87%)。结果表明,宁夏地区羔羊腹泻源大肠埃希菌对抗菌药物保持较高的敏感率,耐药现象并不严重。     

用大肠杆菌K99和F41菌毛抗原检测牛血清抗体的琼脂扩散试验的研究

用含２ｍｏｌ／Ｌ尿素的磷酸盐缓冲液以热处理方法提取的Ｋ９９和Ｆ４１菌毛作为抗原,对琼脂扩散试验方法进行研究。结果表明本试验方法简便,特异性强,敏感性高,可用于血清抗体检测;所制备的抗原稳定、重复性好。     

鸡大肠杆菌O78对喹诺酮类药物高耐药株的分子鉴定

就临床分离的鸡大肠杆菌O78对喹诺酮类药物的最低抑菌浓度（MIC）进行了测定，得到对喹诺酮类药物有不同耐药水平的细菌23株。根据GenBank已公布的QRDRs序列，设计了分剐扩增gyrA、gyrB、parC和parE基因的4对引物，以筛选的23株耐药菌DNA为模板，进行了PCR扩增。序列分析及AcrA的Western blotting检测结果表明，临床分离的鸡大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药水平与GyrA和ParC的突变密切相关，而AcrAB外输泵的表达水平无显著变化。提示临床分离的鸡大肠杆菌O78的耐药水平与喹诺酮类药物的选择性压力有关，它诱导了DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的基因突变，可能不能激活AcrAB外输泵。     

仓鼠致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为探讨长春地区某仓鼠饲养场中仓鼠急性死亡的原因及应对该突发性疾病,对死亡仓鼠进行实验室检查并分离得到1株细菌,通过对该分离株进行形态学观察、培养特性观察、生化试验、小鼠致病性试验、PCR鉴定和23SrRNA基因同源性分析,判定该分离菌为1株高致病性大肠杆菌。该菌可致仓鼠突发急性致死性大肠杆菌病,死亡率达到100%,死亡小鼠出现胃肠道极度膨胀的典型症状。药敏试验结果表明,该大肠杆菌对多种抗生素敏感,但对四环素类抗生素及复方新诺明(SXT)有很强的耐药性,可用庆大霉素进行治疗。研究结果为探讨急性大肠杆菌病的发病机制及其防治提供了理论基础。     

长治鸡群大肠杆菌耐药状况的研究

研究长治鸡群大肠杆菌耐药状况、交叉耐药状况、多重耐药状况及是否出现超级大肠杆菌,同时为临床用药提供参考,减少用药成本,控制大肠杆菌的危害,增加养殖户的收入.剖解病死鸡,采集可疑病料进行细菌分离培养鉴定,通过药敏试验确定其耐药情况.试验结果:长治鸡群大肠杆菌对氨苄青霉素耐药程度83%;对红霉素耐药程度67%;对复方新诺明耐药程度50%;先锋V耐药程度50%;对诺氟沙星耐药程度50%;对万古霉素耐药程度50%;对氯霉素耐药程度33%;对庆大霉素耐药程度33%;对阿米卡星耐药程度17%;对环丙沙星耐药程度17%;对利福平耐药程度17%;对复达欣耐药程度17%;对新生霉素耐药程度为0.结论:长治鸡群分离出的6株大肠杆菌中的5株为多重耐药性大肠杆菌,目前未出现超级大肠杆菌.对常用抗菌药物中的青霉素类、大环内酯类、头孢类、喹诺酮类耐药程度达到50%以上,分别为83%、67%、50%、50%;对新药万古霉素的耐药程度也达到了50%.     

12味中药对鸡血清型O_(78)大肠杆菌的抗菌活性观察

本研究旨在观察乌梅、芦荟等12味中药的水煎液对鸡致病性大肠杆菌O78的抗菌活性。选取乌梅、芦荟等12味中药加水煎煮以获得中药水提取物,测定其对鸡致病性大肠杆菌O78的最低抑菌浓度(MIC)与最小杀菌浓度(MBC),并对体外抑菌效果较好的单味中药进行体内试验。乌梅、芦荟、白头翁抗菌活性较好,桔梗、连翘、大黄、白芍、白术几乎无抗菌活性,其中乌梅、白头翁与芦荟水提取物对鸡致病性大肠杆菌O78的MIC分别为2.57、2.06和2.31mg/mL。乌梅、芦荟、白头翁具有一定的抗鸡致病性大肠杆菌O78的作用,将为开发新的抗鸡致病性大肠杆菌的药物奠定理论基础。     

Risk factors associated with faecal shedding of verocytotoxin-producing Escherichia coli O157 in eight known-infected Danish dairy herds

A risk-factor study was performed in eight dairy herds found to excrete verocytotoxin-producing Escherichia coli (VTEC) O157 in a former prevalence study. Associations between excretion of VTEC O157 and management factors such as housing and feeding were analysed in a generalised linear mixed model. The animals were stratified in three age groups and sampled four times during 1 year. The risk of excreting VTEC O157 was higher among weaned calves than non-weaned calves. Among the calves aged 1–4 months, the risk was reduced if the calf had suckled colostrum from the mother or if the calf had stayed >2 days with the mother after calving. Calves aged 5–24 months that had been moved within the last 2 weeks had a higher risk, but risk was reduced if fed barley silage. Cows fed grain or molasses had a higher risk of excreting VTEC O157.     

禽致病性大肠杆菌的分离、O血清群鉴定及药物敏感试验

对2005年5月~2016年3月自河北、山东、河南、江苏、陕西、辽宁等省发病鸡场疑似大肠杆菌病的病死鸡病变部位分离的194株禽致病性大肠杆菌进行了生化特性测定、O抗原血清群鉴定及药敏试验。试验用5种大肠杆菌单因子（O1、O2、O57、O65、O78）阳性血清进行O血清群鉴定,确定了124株O血清群,占鉴定菌株数的63.9%（124/194）,其中O1 3株、O2 26株、O57 15株、O65 47株和O78 33株,O65和O78为优势菌株,而O2和O57血清群菌株次之,O1血清群菌株最少。8种药物（氨苄西林、新霉素、多西环素、磺胺间甲氧嘧啶、替米考星、环丙沙星、头孢噻呋和氟苯尼考）的药敏试验结果表明,受试的5株大肠杆菌分离株均对环丙沙星和新霉素敏感,而对其他药物均有不同程度的耐受。本研究结果表明O65、O78、O2和O57血清群高度流行,为进一步研发多价菌苗奠定了基础。     

Isolation,O Serogrouping and Drug Sensitivity Test of Avian Pathogenic Escherichia coli

One hundred and ninety four avian pathogenic Escherichia.coli (APEC) isolated from different pathotypes of chickens in Hebei province,Shandong province,Henan province,Jiangsu province,Shanxi province and Liaoning province in China between May 2005 and March 2016 were investigated by determination of biochemical characters,O serogroup identification and drug sensitivity test.Out of 194 isolates, 124 strains(63.9%) could be grouped to serogroups O1(3),O2(26),O57(15),O65(47) and O78(33).The drug sensitivity test used eight antibiotics (ampicillin, neomycin, doxycycline, sulfamonomethoxine,tilmicosin,ciprofloxacin ceftiofur and florfenicol) by one strain of O1,O2,O57,O65,O78 serogroup,respectively.The results showed that all strains were sensitive to ciprofloxacin and neomycin, and resistance to other drugs at varying degrees.This study demonstrated that the high prevalence of O65,O78,O2 and O57 isolates existed and provided the basis for the development of multivalent bacterin in future.