基于微卫星多重PCR技术的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定

本研究旨在建立一套适用于特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子关系的鉴定体系。试验选取11个微卫星标记位点进行组合扩增,通过优化微卫星标记位点组合的引物浓度、退火温度及反应体系等条件,建立了4组多重PCR体系,对多重PCR扩增产物采用毛细管电泳进行基因型分型,经PROSize3.0软件读取基因型分型结果,Cervus 3.0软件分析群体的遗传多样性,鉴定特克塞尔×哈萨克级进F2代(特哈级进F2)和横交F2代(特哈横交F2)的亲子关系。结果表明,特哈级进F2和特哈横交F2的等位基因数为180和140、平均等位基因数为16.364和12.727、平均观测杂合度(Ho)为0.533和0.544、平均期望杂合度(He)为0.807和0.831、平均多态信息含量(PIC)为0.783和0.803。对特哈级进F2和特哈横交F2两个品种70只候选亲本和64只候选子代的11个微卫星标记位点进行亲子关系鉴定,结果表明:当双亲基因型未知时的累积排除概率(CE-1P)为0.9995和0.9997;当单亲基因型已知时的累积排除概率(CE-2P)均达到1.0000;双亲基因型已知的累计排除概率(CEPP)均达到1.0000。说明选择的11个微卫星标记位点具有高度的多态性和较高的排除概率,适用于遗传分析和个体的亲子鉴定。利用微卫星标记建立的特克塞尔×哈萨克杂交羊亲子鉴定体系为分析绵羊群体遗传多样性和辅助育种工作提供了理论依据。     

特克塞尔与哈萨克羊杂交F2代胴体性状的多元分析

实验旨在研究特克塞尔×哈萨克羊杂交F2代的尾部脂肪大小对胴体性状的影响。选用体况良好的520只8月龄羔羊,运用SPSS与R语言对羔羊的表型数据进行主成分与聚类分析,研究尾部脂肪的分化情况,并对杂交F2代各类型尾脂羊屠宰前体重、胴体重、断奶重及脂肪沉积性状进行差异比较分析。结果发现,主成分分析中41个表型值提取到9个主成分,累计贡献率达到87.694%,屠宰前体重、胴体重、断奶重与5个脂肪表型性状的特征值较高;聚类分析结果可将杂交F2代分为A型、B型、C型和D型4个类型;D型的屠宰前体重、断奶重与A型屠宰前体重、断奶重差异不显著,C型背膘厚极显著高于A型,B型的屠宰前体重、胴体重、断奶重极显著高于A型、C型和D型。B型、C型和D型间背膘厚差异不显著。综上,杂交F2代的尾部脂肪发生性状分离,屠宰前体重随着尾部脂肪的增加而下降,结合特克塞尔与哈萨克羊的体型外貌特征,C型和D型更趋近于哈萨克羊,B型则更趋近于特克塞尔羊。     

基于微卫星标记的南白犀亲子鉴定

为了保证人工繁育的南白犀（Ceratotherium simum simum）种群能够健康长远发展,需要有详细准确的谱系记录,但是往往会存在子代亲生父亲不详的情况。通过亲子鉴定可以帮助确定子代亲生父本,从而获得准确的谱系记录。本研究在110只人工半散放南白犀群体中使用13个微卫星标记,对13个微卫星标记的多态性进行分析,计算非父排除概率和累积非父排除概率,结果显示：双亲已知时,13个位点的累积非父排除概率可达0.99以上,三联体父权分配时置信度可达到严格置信,选用的微卫星标记组合可用于南白犀子代生物学父亲的确认。亲子关系的确定可以在一定程度上避免近亲交配,保证群体内遗传基因的多样性。     

特克塞尔羊与小尾寒羊杂交一代生产性能的研究

试验结果表明,特寒F1的初生重不如小尾寒羊。在相同的饲养管理条件下,3月龄断奶体重和5月龄体重、体长、胸宽、胸深和管围显著高于小尾寒羊(P<0·01);5月龄特寒F1的宰前活重、胴体重和净肉重分别为45·5、22·7和17·5kg,均显著高于小尾寒羊(P<0·01)。特寒F1的屠宰率为50%,比小尾寒羊提高了4·2个百分点,净肉率和小尾寒羊接近。眼肌面积为18·03cm2,GR值为2·00cm,肉骨比为3·64∶1·0,说明特寒F1的产肉性能明显优于小尾寒羊,每只5月龄特寒F1羊比小尾寒羊增收92·4元。     

沙二×伦109交桑种高产生产技术

本文阐述了建立沙二×伦109杂交桑制种园、制种园的管理以及桑籽的采收和处理技术.     

特克赛尔羊和哈萨克羊不同杂交后代羔羊生长性能的比较分析

为研究地方品种哈萨克羊和引进品种特克赛尔羊的杂交效果,统计了哈萨克纯繁群和4种杂交组合(杂交F₁代、杂交F₂代、杂交F₃代和横交1代)共计798只羔羊的初生重和2月龄体重/体尺以及哈萨克纯繁和3种杂交组合(杂交F₁代、杂交F₂代和横交1代)共计934只羔羊的4月龄体重/体尺,利用线性混合模型进行统计分析。杂交F₂代和杂交F₁代的羔羊初生重极显著高于纯繁,分别提高0.55 kg和0.46 kg;2月龄分析结果发现,杂交F₂代羔羊的管围极显著高于纯繁、杂交F₁代、杂交F₃代和横交1代,胸宽显著高于纯繁,其中,杂交F₂代羔羊的管围和胸宽比纯繁提高9.34%和9.87%;杂交F₁代羔羊的管围显著高于纯繁;横交1代的管围显著高于纯繁和杂交F₃代。4月龄分析结果发现,杂交F₁代羔羊的体重、管围和...     

哈萨克羊杂交肉羊生产性能和血液生理生化指标的分析研究

本文试验探究特克赛尔羊、哈萨克羊、特哈杂交F₁,特哈杂交F₂、级近F₂、回交F₂、横交F₂等不同杂交模式下生产的公羔和母羔的生产性能分析和血液生理生化分析。研究结果表明,不同杂交代次绵羊群体血液生化指标存在差异,引入品种和杂交改良群体对本地适应性、抗病力和自身免疫力也存在差异。不同杂交方式产出的羔羊生产性能也有差异,杂交F₁代具有最明显的杂种优势,是最经济的杂交方式。为哈萨克羊的肉羊杂交育种提供理论依据。     

关于杂交桑“沙2×伦109”繁种规范化和加强栽培管理的意见

杂交(实生桑)良种桑。沙2×伦109”是南宁地区蚕区当前主要推广品种．1979年起从广东省引进试种至今已有10多年了，其种植面积逐年扩大，到1992年．全地区12个县市均已普及，已种植3440．7公顷(51658亩)。比1989年增加6．48倍，1992年秋蚕开始，由于蚕茧降价，挖去了一部份，但仍有2866．6公顷。     

绵羊痘病毒、山羊痘病毒及羊口疮病毒多重PCR检测方法的建立和应用

为了建立鉴别绵羊痘病毒(SPPV)、山羊痘病毒(GTPV)和羊口疮病毒(ORFV)的多重PCR检测方法,针对GenBank中3种病毒的基因组序列,合成了3对引物,通过优化多重PCR反应条件,建立了鉴别检测3种病毒的多重PCR方法。特异性试验表明,应用该方法可分别扩增出3种病毒对应的目的片段,对大肠埃希菌、沙门菌、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪细小病毒(PPV)、Vero细胞、正常羊组织的DNA和灭菌双蒸水均无扩增;敏感性试验表明,该方法最低检测量分别为30.46pg/μL的绵羊痘病毒、28.9pg/μL的山羊痘病毒和26.94pg/μL的羊口疮病毒基因组DNA;应用本方法对85份临床病料进行检测,结果与其他已建立的单项PCR检测方法结果一致,说明该方法可以用于临床上SPPV、GTPV和ORFV的鉴别诊断。     

基于SNP标记的滩羊亲子鉴定研究

旨在筛选可用于滩羊亲子鉴定的部分SNP标记,对羊群的保种和繁衍具有重要意义。本试验以宁夏盐池地区的159只滩羊为研究对象,利用600K基因芯片进行SNP测定,通过主成分分析了解样本的遗传背景,依据系统进化树划分家系,最后进行亲子鉴定研究。结果显示,大多数滩羊之间遗传背景相近,系统进化树将其划分为5大家系;亲子鉴定筛选到了211个高质量SNPs,单亲累积排除概率超过99.99%,具有很高的准确性和可靠性;父权鉴定结果表明,在95%置信水平下,观测鉴定率为79%,80%置信度下,观测鉴定率达到87%。在有结果的子代中,大部分真实亲本在疑似父本中找到,即非系谱记录的父本,说明场内应加强系谱管理,尽量避免错误的发生。     

Identification of Hu Sheep Family Based on Microsatellite Markers

The purpose of this study was to explore identification and division methods of Hu sheep family based on simple sequence repeats(SSR) polymorphism.Nine SSR loci of BM3051,HH64,TGLA137,MAF33,FCB48,VH72,INRA023,ETH152 and MCM527 were selected,which were distributed in several autosomes,with high polymorphism and high heterozygosity.DNA was extracted from the blood samples of 30 Hu breeding rams by blood DNA extraction kit.SSR primers were synthesized and labeled with the fluorescent group.The products were amplified by touch-down PCR.After genotyping,CERVUS3.0.7 was used for genotyping analysis.POPGENE1.32 was used to construct a dendrogram based on Nei's genetic distance to divide Hu sheep families.The results showed that the cumulative exclusion probability of single parent was 99.2094% when the genotypes of both parents were unknown,99.9688% when a single parent genotypes were known,99.9999% when both parents' genotypes were unknown.Exclusion probability could meet the requirements of paternity identification and pedigree analysis in genetic breeding.UPGMA clustering map was constructed according to Nei's genetic distance,and 30 breeding rams were divided into six families,which provided a reference for sheep breeding.The method could run the family identification and division of Hu sheep,which had application value for the breeding of Hu sheep.     

基于微卫星标记鉴定湖羊家系

试验旨在基于微卫星（simple sequence repeats,SSR）多态性探索一种鉴定与划分湖羊家系的方法,通过查阅文献筛选出9个分布于多个常染色体、具有高多态性信息、高杂合度的湖羊微卫星位点BM3051、HH64、TGLA137、MAF33、FCB48、VH72、INRA023、ETH152和MCM527。采集30只湖羊种公羊血液,使用试剂盒提取血液基因组DNA,合成筛选出的9个微卫星引物并使用荧光基团标记,利用降落式PCR进行扩增,扩增产物在基因分型后使用CERVUS3.0.7进行基因型分析,使用POPGENE1.32基于Nei氏遗传距离构建树状聚类图,根据图示的亲缘关系远近划分湖羊家系。结果显示,当双亲基因型未知时,9个微卫星位点的单亲累积排除概率为99.2094%;当单亲基因型已知时,9个微卫星位点的累积排除概率为99.9688%;当双亲基因型未知时9个微卫星位点的双亲累积排除概率为99.9999%,排除概率能够满足遗传育种中亲子鉴定和系谱分析的要求。根据Nei氏遗传距离构建UPGMA聚类图,将30只种公羊划分为6个家系,为育种工作提供了一定参考。本方法能够进行湖羊家系的鉴定与划分,对湖羊育种工作具有一定的应用价值。     

微卫星DNA在牦牛亲权鉴定中的应用研究

为了探讨微卫星DNA在牦牛亲权鉴定应用的可行性,选用FAO推荐的17个微卫星座位,检测其在天祝白牦牛群体中的多态性水平,计算这17个微卫星座位用于亲权鉴定的累积排除率。结果表明,17个微卫星座位平均等位基因数为6.235;多态信息含量介于0.191~0.824之间,平均为0.608,为高度多态;一个候选亲本的累积排除概率为0.997,2个候选亲本的累积排除概率为0.999 999 97,各个微卫星座位零等位基因频率均在0.05以下,微卫星DNA可以应用于牦牛的亲权鉴定。     

内蒙古地区西门塔尔牛亲子鉴定微卫星标记筛选

研究旨在筛选适合于我国肉牛亲子鉴定的微卫星标记,以内蒙古乌拉盖地区368头西门塔尔牛为实验材料,利用荧光引物PCR和ABI3730测序仪对12个微卫星标记进行基因型检测,应用Cervus3.0软件统计12个微卫星标记的遗传多态性。结果表明:其中4个微卫星标记扩增效率较低,被剔除;其他8个微卫星的多态性丰富,平均等位基因数为11.38,平均期望杂合度为0.6686,平均多态信息含量为0.6354,适合于我国肉牛亲子鉴定。     

绵羊(ATAG)n四碱基微卫星位点的筛选及其在亲子鉴定中的应用

本试验旨在筛选绵羊高度多态性四碱基微卫星遗传标记,建立适用于绵羊亲子关系鉴定的实验体系。试验以小尾寒羊为主要研究对象,从已有的绵羊参考基因组序列出发,基于全基因组序列筛选法共筛选出53个（ATAG）_n四碱基重复微卫星位点,然后通过基因分型数据共筛选出30个扩增效果好、多态信息含量（PIC）丰富的四碱基重复微卫星位点;30个位点的基因分型结果表明,共扩增出253个等位基因,平均等位基因数为8.433,等位基因数均>5,多态信息含量在0.566~0.898,观测杂合度（Ho）范围在0.548~0.903,期望杂合度（He）范围在0.631~0.921,平均期望杂合度为0.776;哈代-温伯格平衡检验30个位点均处于遗传平衡状态。随后根据PCR的扩增效率从获得的30个多态性位点中筛选出22个微卫星位点用于亲权排除概率的计算,根据多态信息含量的大小由高到低依次增加位点数进行组合。结果表明,在两个亲本的基因型均未知的情况下,标记位点数为15个时,累积排除概率可达到99.99%,其中单个位点的第一非亲排除率（non-exclusion probability of the first parent,NE-1P）介于0.321~0.663之间。利用建立的亲子鉴定体系对16只具有系谱记录的小尾寒羊样本进行检测,结果共鉴定出4个具有高置信度的绵羊家系,鉴定结果与系谱记录完全一致。本试验为绵羊分子系谱的构建、亲子鉴定以及保障绵羊育种工作的正常开展奠定重要基础。     

哈萨克羊INHβA基因克隆及生物信息学分析

试验旨在克隆哈萨克羊抑制素βA （inhibin beta A,INHβA）基因序列,并探究其序列特征及编码蛋白的结构和功能。根据GenBank中绵羊INHβA基因序列（登录号：NM_001009458.1）设计1对特异性引物,通过RT-PCR方法对哈萨克羊INHβA基因进行扩增,将获得的INHβA基因片段插入到pMD19-T载体中进行克隆测序,并结合生物信息学方法预测和分析其核苷酸序列、氨基酸序列、蛋白跨膜、蛋白修饰位点及二级结构、三级结构模型等。结果显示,哈萨克羊INHβA基因长1 278 bp,编码425个氨基酸。哈萨克羊INHβA基因与绵羊、牛、野猪、小鼠、人、大鼠、猫、兔、马的同源性分别为98.6%、97.7%、90.4%、87.9%、91.1%、88.2%、91.8%、89.8%和91.8%,表明INHβA基因在不同物种之间具有较高的保守性。INHβA蛋白分子式为C₂₀₇₂H₃₃₂₅N₆₀₃O₆₂₈S₂₆,分子质量为47.57 ku,理论等电点（pI）为7.87,不稳定系数为66.16,脂溶指数为78.47,亲水值为-0.507。INHβA是一种碱性不稳定的亲水性脂溶性蛋白,没有跨膜结构,含有信号肽。二级结构预测显示,INHβA蛋白α-螺旋、β-转角、无规则卷曲、延伸链分别占22.59%、4.47%、54.12%和18.82%。三级结构预测显示,INHβA蛋白以α-螺旋为主,是含有8种蛋白修饰位点的β-桶状蛋白。本试验结果为深入研究哈萨克羊INHβA蛋白功能及探讨INHβA基因对提高哈萨克羊繁殖力的影响提供参考数据。     

应用微卫星DNA标记分析荷斯坦母牛系谱可靠性及影响因素

为了评估当前中国荷斯坦牛群体的系谱准确性,本研究选择15头种公牛及来自21个牛场的2 220头女儿牛,借助牛3号染色体(BTA3)上17个微卫星标记,对女儿-公牛标记基因型是否错配进行分析。结果,按照错配标记数大于等于3个为系谱错误的标准,本研究所涉及的母牛群中系谱错误率为16.62%。经对影响系谱错误的因素分析表明,场效应是主要的影响因素,不同场间系谱错误比例差异较大;由于公牛女儿在各牛场中分布不均匀,导致公牛效应也达到显著。研究结果提示在中国荷斯坦牛群体进行亲子鉴定是亟需和必要的。     

利用单碱基编辑系统定点编辑哈萨克羊MSTN基因的研究

肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）可负调控骨骼肌的发育。本研究利用胞嘧啶碱基编辑器（cytidine base editor,CBE）在哈萨克羊MSTN基因编码区提前引入终止密码子,以期达到敲除MSTN基因的目的。共设计2条靶向哈萨克羊MSTN基因不同外显子的sgRNAs,分别连接至pGL3-U6-sgRNA-PGK-puromycin质粒,并与pCMV-AncBE4 max-P2A-GFP质粒共转染哈萨克羊胎儿成纤维细胞,经Cruiser^TM酶酶切检测、Sanger测序和TA克隆分析。结果显示,成功筛选出可以在哈萨克羊MSTN基因外显子提前引入终止密码子的2条sgRNAs,其中STOPsg-1靶位点编辑效率为26.7%,STOPsg-2靶位点的编辑效率为6.7%。本研究成功运用CBE（AncBE4 max）技术在哈萨克羊胎儿成纤维细胞MSTN基因编码区实现定点编辑,为培育精确编辑MSTN基因的哈萨克羊奠定基础。     

利用微卫星和SNP标记信息进行奶牛亲子鉴定的模拟研究

本研究旨在比较微卫星标记和单核苷酸多态(SNP)标记进行奶牛亲子鉴定的效率。研究中随机模拟了10 000对含微卫星或SNP标记信息的非亲子关系的个体,用排除法进行亲子鉴定,该过程重复100次。结果表明,标记的多态性对于排除概率的影响最大。达到同样的排除概率,所需低多态标记数量远高于高多态标记。当真实母亲基因型已知时,个体父亲的推断效率较高。达到同样的排除概率,无论标记多态性高或低,3种鉴定类型所需SNP标记数量均大于微卫星标记。当SNP和微卫星标记的平均杂合度为0.484和0.875时,需要的SNP标记数是微卫星标记的5~6倍;当SNP和微卫星标记的平均杂合度为0.363和0.566时,需要的SNP标记数约是微卫星标记的2倍。在2种标记中,达到同样排除概率(大于0.99),采用至少2个矛盾推断原则推断所需标记数为单个矛盾推断原则的1.45倍。结果表明,由于SNP标记具有误判率低、重复性高和易于高通量自动化检测等特点,随着检测成本降低,SNP标记将来完全有可能取代微卫星标记用于奶牛群体的亲子鉴定。