陕西市售婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌流行状况及相关特性研究

对陕西省62个品牌的366份市售婴幼儿配方乳粉和米粉及其他食品中阪崎克罗诺杆菌的污染状况进行调查,并对分离株的相关特性进行分析,旨在阐明陕西市售婴幼儿食品的食用安全性。结果表明,87份样品检出阪崎克罗诺杆菌阳性,平均检出率为23.8%。乳粉阳性样品检出率为18.3%,米粉为27.3%,其他婴幼儿配方食品检出率20.0%。共检出169株阪崎克罗诺菌,其中168(99.4%)株对利福平产生抗性,对其他抗生素耐药的菌株比例依次为阿莫西林20.12%、链霉素18.93%、四环素17.16%、氨苄西林12.43%、庆大霉素11.24%和头孢曲松0.59%等。135株(79.88%)分离株携带ompX基因,120株(71.01%)携带cpa基因、111株(65.68%)携带sip基因、93株(55.03%)携带hly基因。按照95%的相似性,169株分离株脉冲场凝胶电泳(Pulse field gel electrophoresis,PFGE)分型后可被分为4个大簇、8个小簇和1个单基因型,部分源于不同品牌或批次食品的菌株基因型相似性较高,表明陕西省市售婴幼儿配方粉及婴幼儿食品中阪崎克罗诺杆菌染问题不容忽视,存在严重的食品安全危胁。     

阪崎克罗诺杆菌单克隆抗体的制备及特性分析

本研究以灭活阪崎克罗诺杆菌（CS）为免疫原免疫BALB/c小鼠,5次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合。利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,制备抗CS特异性单克隆抗体。对单克隆抗体进行效价及特异性测定,确定其抗体亚型及单克隆抗体之间的抗原竞争性。结果表明：经4次亚克隆后得到2株稳定产生抗体的细胞株,分别命名为9D10、2H2,9D10抗体和2H2抗体效价较高,分别为2×106、6×106;9D10抗体和2H2抗体与单增李斯特菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌等均不发生交叉反应,特异性良好;2株抗体重链均为IgG2a,轻链均为Kappa;2株抗体之间无抗原竞争性。抗CS单克隆抗体的制备可为其快速检测方法的建立提供基础。     

食品中克罗诺杆菌(原阪崎肠杆菌)双重PCR检测方法研究

根据克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)16S rRNA基因以及局部大分子合成(MMS)操纵子特异序列设计2对引物,经反应体系和条件优化,建立了双重PCR检测方法。特异性检测结果显示,Cronobacter spp.菌株PCR扩增均可见2条特异性条带,而其他菌株PCR扩增均为阴性。纯菌检测双重PCR的灵敏度为6.3×103 CFU.mL-1,而相对应单重PCR的灵敏度分别为6.3×101 CFU.mL-1和6.3×103 CFU.mL-1;人工污染的食品样品(奶粉、牛奶、鸡肉)在经过24 h增菌后,检测限均可达100 CFU.mL-1或100 CFU.g-1。在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)存在的条件下,双重PCR的检测限没有受到影响。表明本试验建立的双重PCR检测方法具有很好的特异性和灵敏度,能克服食品样品基质及杂菌的干扰,可应用于食品中Cronobacter spp.的检测。     

阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数实时定量PCR检测方法的建立

[目的]建立检测阪崎克罗诺杆菌中转座子拷贝数的实时定量PCR方法。[方法]以单拷贝持家基因atpD作为内参基因,建立同时含有单拷贝持家基因atpD和EZ-TN5转座子的重组质粒;建立atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测的标准曲线,并利用所建立的标准曲线,对3株阪崎肠杆菌突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子的拷贝数进行检测,并计算其比值。[结果]atpD基因与EZ-TN5转座子实时定量检测标准曲线的相关系数分别为0.999和0.998;3株突变株中atpD基因和EZ-TN5转座子拷贝数比值分别为0.98、1.17与0.91,证明突变株中转座子为单拷贝。[结论]该研究所建立的实时定量PCR方法实用性强,可替代Southern杂交用于不同细菌中EZ-TN5转座子拷贝数的检测。     

克罗诺杆菌检测方法研究进展

克罗诺杆菌(Cronobacter spp.)是一类重要的食源性致病菌,其引起的奶粉安全事件和新生儿致病问题受到了社会的高度重视。随着对该菌研究的深入和现代分类技术的不断发展,克罗诺杆菌的分类经历了从种到属的变化。但是截至目前,克罗诺杆菌的污染源和致病机制仍不清楚,为了防止易感人群的大规模疾病暴发,对于该菌的检测和预防尤为重要。本文对克罗诺杆菌的生化检测和分子检测的发展历程及存在问题进行综述,以期为该菌的研究提供参考。     

液态奶中阪崎肠杆菌污染状况的调查

[目的]了解某地区液态奶中阪崎肠杆菌的污染情况,为政府加强对液态奶的管理提科学依据。[方法]采用改进方法和PCR法检测液态奶。PCR适宜反应体系为：6μl 10×PCR buffer,4μl dNTPs混合物,2．5Mg^2＋ μl（25mM）,2μl 10μmol正向引物,2山10μmol反向引物,0．25μl（5U／μl）Taq,23．25μl水,总反应体系为50μl;其适宜的PCR扩增程序为：PCR反应采用冷启动,95℃预变性5min;变性95℃ 1min,退火61℃0．5min进行35个循环。PCR反应产物在2％的琼脂糖凝胶中进行电泳,凝胶成像系统观察结果,检出率为2．4％,同时对阪崎肠杆菌的毒力进行了研究,所筛出的4株阪崎肠杆菌均导致受试昆明小鼠死亡。[结果]从167份液态奶样品中检出4株阪崎肠杆菌。     

辣椒制品中阪崎肠杆菌的检测与鉴定

阪崎肠杆菌是肠杆菌科的一种,在一定条件下可引起人和动物致病。为了加强对食品中有害细菌的监管力度,在对1份辣椒制品实施大肠杆菌常规项目检验的过程中分离出可疑菌株,经分离培养、革兰氏染色、API 20E和全自动VITKE 2生化反应鉴定及实时荧光PCR检测,确定该可疑菌株为阪崎肠杆菌。表明,辣椒制品存在阪崎肠杆菌的污染风险。     

海藻糖对阪崎肠杆菌温度耐受性的影响研究

[目的]研究在磷酸缓冲液中添加不同浓度海藻糖的条件下阪崎肠杆菌对高温、低温的耐受性,为食品加工过程中控制阪崎肠杆菌污染提供参考。[方法]通过试验观察阪崎肠杆菌在不同温度条件下存活状况来反映其对温度的耐受性。[结果]阪崎肠杆菌在一定的高温条件下,其存活率与海藻糖的浓度成正比。[结论]海藻糖对阪崎肠杆菌有保护作用,随着海藻糖浓度的升高,其保护作用越明显。     

婴幼儿配方乳粉中阪崎肠杆菌检测方法探讨

通过对婴幼儿乳粉中阪崎肠杆菌的菌落形态、生化特性等方面的试验,确定采用灭菌蒸馏水(DW)前增菌、肠道菌增菌肉汤(EE)增菌、显色培养基(X--αGlcA)分离培养、再以API20E生化系统鉴定的方法为检出该菌的理想方法。     

北美冬青的园林特性及其应用

北美冬青是冬青科冬青属多年生落叶灌木,是秋冬切枝、环境美化和盆栽的优良观赏树种,近年来引种到我国的多个品种表现出较强的抗性和适应性,具有很大的推广应用价值和市场潜力。本文系统阐述了北美冬青的园林特性、观赏特性以及栽培管理和病虫害防治措施,提出了北美冬青在我国园林绿化中的主要应用途径,并对其在园林应用过程中可能遇到的问题进行了综合分析。     

乳源蜡样芽胞杆菌耐药性、毒力因子检测及分子特征研究

为了解乳品来源蜡样芽胞杆菌携带的毒力因子、分子特征及耐药性,对2016—2019年分离自乳品的122株蜡样芽胞杆菌,采用纸片扩散法（K-B纸片法）测定了分离株对氯霉素、庆大霉素等9种抗生素的耐药性,使用聚合酶链式反应法检测了菌株携带的毒力因子,同时采用脉冲场凝胶电泳（pulsed field gel electrophoresis,PFGE）检测分离株的分子特征。结果表明,122株蜡样芽胞杆菌均对氯霉素、庆大霉素、阿米卡星敏感;对红霉素、克林霉素和环丙沙星的中介率分别为5.74%、4.92%和0.82%, 9.84%的菌株对复方新诺明具有耐药性,8.20%的菌株对四环素具有耐药性,4.10%的菌株对利福平具有耐药性。122株蜡样芽孢杆菌都检出了蜡样芽孢杆菌的非溶血型肠毒素基因nheA、nheB及肠毒素FM基因entFM;nheC、bceT、cytK、hblA、hblC、hblD、ces和EM1基因的检出率分别为99.18%、37.70%、31.15%、29.51%、24.59%、8.20%、、6.56%和6.56%。122株蜡样芽胞杆菌被分成15簇,未见明显的优势带型。由此可见,2016—2019年收集的蜡样芽胞杆菌乳品分离株携带多种毒力基因,约10%的菌株对复方新诺明、四环素、利福平等具有耐药性,PFGE呈现多种带型,为蜡样芽孢杆菌引起的食源性疾病的预警、预防和治疗提供参考。     

动物源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力与分子分型关系研究

[目的]调查产生生物被膜的金黄色葡萄球菌流行病学特征,探究生物被膜形成能力与分子型之间的相关性,为治疗动物金黄色葡萄球菌感染提供理论依据.[方法]以广东省兽药研制与安全评价重点实验室保存的98株金黄色葡萄球菌为研究对象,用结晶紫半定量法测定所有菌株生物被膜形成能力,将产膜菌株进行22种常见抗菌药的最小抑菌浓度测定,通过...     

Molecular Typing of Aeromonas hydrophila Isolated from Common Carp in Northeast China

A total of 59 isolates of Aeromonas hydrophila were collected from common carp suffering from freshwater fish hemorrhage disease in 13 fishing grounds in the northeast China, and their phenotypic and genetic characteristics were investigated. All of the isolates were identified as A. hydrophila by traditional biochemical method and yielded a 686-bp DNA fragment of the 16S rDNA gene in the PCR experiments. Collected strains were also evaluated for their susceptibility to 17 different antibiotics. The isolates showed an even trend of the resistance and sensitivity to drugs, highly sensitive to antibiotics, such as Levofloxacin, PolymyxinB, Ofloxacin and resistant to antibiotics, such as Bristopen, Lincomycin, Ampicillin, Teicoplanin. Evaluation of genetic diversity was performed on all isolates by molecular typing with enterobacterial repetitive intergenic consensus (ERIC-PCR) method. The results showed that three different types, i.e. type Ⅰ, Ⅱ, and type Ⅲ, were found in 59 isolates and type III accounted for a large proportion of 54.84%. There was no dominant difference between the tendency of the isolates of Heilongjiang Province and Jilin Province in these three types, which showed Ⅲ>Ⅰ>Ⅱ, while the isolates of Liaoning Province showed Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ. The percentage of different types in different provinces varied in each other; however, they didn’t show any obvious regional or cluster-specific branches. In conclusion, the ability to distinguish Aeromonas hydrophila strains from diseased common carp with ERIC-PCR would be useful for epidemiological investigation and population genetic analysis of this pathogen in China.     

南美白对虾养殖水体中霍乱弧菌的毒力、耐药及重金属抗性研究

旨在分析南美白对虾养殖水体中霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的毒力、抗菌素耐药性以及重金属抗性特性,为致病性霍乱弧菌流行预警的研究提供数据支撑。利用聚合酶链反应技术检测了84株霍乱弧菌分离菌株的毒力以及整合接合元件(ICEs)相关基因;采用美国临床与实验室标准研究所(CLSI)标准Kirby-Bauer纸片扩散法以及最小抑菌浓度法测定了受试菌株的抗菌素和重金属抗性;运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术对部分受试菌株进行了分子分型。结果显示:受试霍乱弧菌菌株均不携带致病性肠毒素基因ctxA B以及毒素相关基因sto、tcpA、ace、zot;含有毒素表达调控蛋白基因toxR,其中19.05%菌株还含有RTX家族毒素基因rtxA;携带SXT-R391家族ICEs保守功能模块部分相关基因(int、traI、traC、setR、attR)。受试霍乱弧菌菌株对六大类十种抗菌素的耐药性存在显著差异,其中对氨苄西林的耐药率最高为13.10%,其次是庆大霉素(2.38%);利福平、链霉素、氨苄西林、卡那霉素、壮观霉素的中介耐药率为25.00%~1.19%;对四环素、氯霉素、甲氧胺苄嘧啶、复方新诺明均敏感。此外,30%的受试霍乱弧菌菌株对重金属铅、锌具有高度抗性,而对铬、镉、铜、镍、汞、钡敏感;PFGE分子分型可分为5种Not I-PFGE型13种亚型,相似性值为56%~100%。本研究结果为进一步探讨致病性霍乱弧菌的进化起源奠定了基础。     

鳗鲡病原性气单胞菌AFLP分型研究

以32株从养殖鳗鲡分离的病原性气单胞菌为试验材料,采用Biolog自动菌鉴系统对其进行生理生化鉴定,结果表明,有20株被鉴定为嗜水气单胞菌,7株被鉴定为威隆气单胞菌,1株为豚鼠气单胞菌,其余4株未能鉴定到种.为进一步确定20株嗜水气单胞菌和7株威隆气单胞菌的基因型,筛选了2对引物（E-C/M-C,E-C/M-A）分别对这两个菌种进行了AFLP分析.结果表明：20株嗜水气单胞菌中共检测到88个位点,均为多态性位点;7株威隆气单胞菌中共检测到61个位点,其中60个为多态性位点.经UPGMA聚类分析表明：20株嗜水气单胞菌可初步分为3种类型,每种类型之间平均遗传距离为0.449,同一类型内不同菌株的平均遗传距离为0.127;7株威隆气单胞菌可初步分为4种类型,每种类型之间平均遗传距离为0.467,变异范围为0.415～0.525.该结果为鱼类病原菌的DNA分型研究提供了参考.     

复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种分子分类与药敏的研究

目的探讨临床分离酵母菌分子分类方法和药物敏感性特征.方法临床收集复发性外阴阴道假丝酵母菌病的93株酵母菌,应用法国生物梅里埃酵母菌药敏试剂盒ATBTMFUNGUS3进行体外药物敏感性试验,以核糖体基因26S rDNA D1/D2区的序列分析为依据研究其菌种的分子分类方法.结果 93株酵母菌分为光滑假丝酵母菌（38/93）、白色假丝酵母菌（23/93）、近平滑假丝酵母菌（16/93）、似平滑假丝酵母菌（9/93）等9个种11个基因型.其中有18株为敏感株,3株完全耐药.5种常用抗真菌药物的敏感性是5FC 83.87%,AMB 93.55%,FCA 27.96%,ITR 21.51%,VRC 43.01%.结论基于核糖体基因的分子分类法可以准确鉴定酵母菌临床分离株,复发性外阴阴道假丝酵母菌病菌种呈现以光滑假丝酵母菌为主的非白色假丝酵母菌占75.27%的分布特征.93株酵母菌对AMB,5FC的敏感性高于三唑类药物,三唑类药物中ITR耐药率高于VRC,FCA.药物敏感性与菌种有关.     

河南省副猪嗜血杆菌分离鉴定与药敏试验

为发病猪场合理用药控制和治疗副猪嗜血杆菌病,从河南省7家猪场12份疑似副猪嗜血杆菌病病料中分离到2株革兰氏阴性细小杆菌,进行了细菌培养特性试验和培养菌PCR鉴定.结果表明:分离的菌株为副猪嗜血杆菌,2株分离菌对土霉素、氟本尼考、苯唑西林钠、头孢噻呋、诺氟沙星、阿米卡星和硫酸链霉素等敏感,对氨苄青霉素、磺胺嘧啶、硫酸卡那霉素具有耐药性.     

鸡球虫的药敏试验

试验检测了采自海南省文昌鸡主要养殖地区的7种艾美耳球虫对5种常用抗球虫药的敏感性。根据最适抗球虫活性百分率(POAA)、病变记分减少率(RLS)、相对卵囊产量(ROP)和抗球虫指数(ACI)4项指标进行综合判定。结果表明,海南省文昌鸡主要养殖地区的鸡球虫对血球净、球虫净及高效球虫药呈现完全抗药性,而其对百球清和拉沙利药物没有产生抗药性,提示目前在海南省文昌鸡主要养殖地区应交替使用百球清和拉沙利药物,慎用或停用血球净、球虫净及高效球虫药。