清水江鲤性腺的早期发育及Foxl2基因功能初步分析

为清水江鲤的人工选育提供理论基础,通过组织学切片观察不同时期清水江鲤性腺,并通过RACE及RT-PCR克隆清水江鲤Foxl2基因,初步分析Foxl2的功能,以了解清水江鲤早期性腺发育及性腺发育过程中相关基因的表达。结果表明:清水江鲤性腺发育至孵化后90d的组织学切片仍不能明显分辨性别,孵化后120d的性腺出现初级精母细胞,孵化后150d的性腺出现初级卵母细胞,孵化后240d出现精细胞;清水江鲤存在2个同源基因(Foxl2a与Foxl2b)。Foxl2a和Foxl2b在清水江鲤雌性性腺的发育中具有重要作用。     

清水江鲤的杂交改良试验

为贵州改良和推广鲤鱼优良品种提供科学依据,进行了清水江鲤杂交改良养殖试验。结果表明:经过148d的饲养,杂交鲤鱼子一代(清水江鲤为母本与兴国红鲤为父本)平均尾重从6g增加至387.5g,增重2.58g/(尾.d);净产量769.6kg/667m2,比对照(黔东南州水产实验场自繁自育的本地鲤)鱼种增产257.1kg,提高50.16%;平均成活率为92.75%,比对照高6.25百分点;纯收入4 589.37元/667m2,投入产出比达1∶1.48,比对照池(1∶1.17)高。     

清水江鲤生物学特性及人工驯养技术研究

为保护清水江鲤这一珍贵的土著鱼类种质资源,对其进行了生物学特性观察及人工驯养技术研究。结果表明:清水江鲤适应温度范围0~38℃,最适摄食生长温度20~28℃;在池养条件下,溶氧量为3㎎/L以上,pH值范围为6.5~8.5,投喂人工配合饲料能够正常摄食生长,其生长速度较快。在水温20~27.5℃的条件下,尾日增重为3.28g/(尾·d)。清水江野鲤,可经过人工驯化成为淡水名优养殖鱼类。     

清水江鲤的含肉率及肌肉营养成分测定

为丰富地方特色鲤鱼营养学资料及其饲料研制提供参考,对清水江鲤的含肉率及肌肉营养成分进行测定。结果表明:清水江鲤的含肉率为69.63%,肌肉中常规营养粗蛋白、粗脂肪、灰分含量分别为18.53%、1.18%和1.23%。肌肉中17种常见氨基酸总含量为16.63%(占肌肉鲜样),其中,必需氨基酸含量为7.36%,占氨基酸总量的44.26%;必需氨基酸与非必需氨基酸含量的比值为79.40,鲜味氨基酸含量为6.47%,占氨基酸总量的38.91%;必需氨基酸指数为92.81。清水江鲤具有高蛋白低脂肪的特点,氨基酸达到优质蛋白质标准,其肌肉是一种优质蛋白源。     

转基因鲤性腺结构及繁殖性能的研究

采用解剖及显微观察对大麻哈鱼生长激素基因鲤(以下简称转基因鲤)的性腺发育和繁殖性能进行了研究.结果表明:转基因鲤精巢组织结构属壶腹型,其壁由2层膜组成,外为腹膜,内为白膜,精小叶不规则排列,小叶由许多精小囊组成,精小囊是精子发生增殖、生长、成熟的地方,精子成熟后由精小囊进入小叶腔内.卵巢1对,位于腹腔两侧,外为腹膜,内为被膜,卵子成熟后由输卵管从泄殖孔排出体外.精卵生殖细胞发育程序相似,可分为6个时期.其中雌性个体成熟年龄为1周年;雄性个体成熟比雌性个体成熟早.成熟卵巢的成熟系数为0.49 ～0.84,成熟精巢的成熟系数为1.47 ～4.87.繁殖期性腺发育观察:7月时精巢中精原细胞和精母细胞所占比例较高,卵巢中初级卵母细胞所占比例较高;8月时精巢中精原细胞数量开始减少,精母细胞开始增加,并有少量精子细胞和精子出现,卵巢中卵母细胞数量有所增加,并出现一些小的液泡和卵黄物质;9月时精巢中大多都为精子细胞和精子,卵巢中大部分卵母细胞进入卵黄充塞期.通过对繁殖期3个月雌、雄个体性腺发育与普通鲤作t检验,雌、雄个体性腺发育程度有所不同但差异不显著(P＞0.05).该研究证明转基因鲤的性腺发育是正常的,雌、雄个体性个体都能达到性成熟.     

青海湖裸鲤foxk1基因克隆和初步功能分析

为青海湖裸鲤人工扩繁和分子遗传育种研究提供理论基础,采用RACE和RT-PCR克隆青海湖裸鲤foxk1全长cDNA序列,对其进行生物信息分析和功能分析。结果表明：青海湖裸鲤foxk1全长cDNA序列为2251 bp,包含1944-bp开放阅读框,编码647个氨基酸;克隆的foxk1与其它脊椎动物的氨基酸序列同源性为68.2%～94.4%,亲缘性相近;foxk1与其邻近基因gnal2、sdk1、mmd2的共线性在整个脊椎动物中高度保守;青海湖裸鲤foxk1高表达于垂体和性腺,中量表达于脑,微量表达于鳃和心脏;青海湖裸鲤foxk1在3月和6月卵巢中低表达,在9月及后期卵巢中持续高表达。     

湘西呆鲤线粒体全基因组测序及结构特征分析

为了揭示湘西呆鲤的进化地位,通过二代基因测序技术获得湘西呆鲤(Cyprinus carpio var.Xiangxi)线粒体基因组全序列,对线粒体基因进行了注释,对其序列结构进行了分析,并分别以线粒体全长基因组序列和D-loop区序列对湘西呆鲤在内的16种鲤鱼的同源性进行了分析,采用NJ(Neighbor-joinin...     

半饥饿对转基因鲤生长和性腺发育的影响

为研究转大麻哈鱼(Oncorhynchus keta)生长激素基因鲤(转基因鲤)在不同食物含量条件下的生长竞争(主要是生长、生殖),设定正常投饲组和半饥饿试验组,每组饲养池大小相同、混养的转基因鲤和对照鲤初始总体质量相等。连续3个月定期采样后,从形态学和组织学研究转基因鲤和对照鲤(Cyprinus carpio)的生长状况、饲料占有情况和性腺发育状况。结果表明:正常投饲组的转基因鲤和对照鲤体质量相对增长率分别为127.9%和70.6%,而半饥饿试验组的转基因鲤、对照鲤的体质量相对增长率分别是72.3%和52.2%,表明无论在饱食还是在半饥饿情况下,转基因鲤均显示出快速生长的优势;2组试验鱼的性腺发育进程无明显差异(P>0.05),但在部分月份转基因鲤和对照雌、雄鲤的相对性腺质量差异显著(P<0.05),无论在饱食还是在半饥饿情况下,转基因鲤的性腺发育情况略好于对照鲤。     

珠江肇庆江段鲤早期发育形态及其补充群体状况

于2006年2—7月在珠江肇庆江段进行鱼苗采样,监测该江段鲤早期资源状况,同时对人工鱼巢中鲤的胚胎进行培育、观察。结果表明:鲤鱼苗出膜时,发育期已达眼黑素期,胚胎发育时序较一般鱼类提前,具有良好的生态适应性;鳔一室期,鱼苗体长为7.5 mm,胸鳍基部无色素,身体肌节数为36对左右;孵出后第25 d,鳍条完全形成,出现少量鳞片,基本具备成鱼的特征。2006年肇庆江段鲤产卵期主要在2月初至4月下旬,有多批次的产卵,鲤总鱼苗径流量初步估计为2.39×106尾。同时,对珠江肇庆江段鲤的繁殖生态进行了讨论,并提出了一些对策及其保护措施。     

黄河鲤金属硫蛋白基因的克隆及表达分析

采用RT-PCR方法克隆获得黄河鲤(Cyprinus carpio)金属硫蛋白基因的编码区(CDS)序列,该序列长183bp,编码60个氨基酸,不含芳香族氨基酸,其中20个半胱氨酸(Cys)集中分布在肽链的N端和C端,具有MT典型的Cys-X(1~3个)-Cys结构,预测分子量为6013 D,理论等电点为8.38。经多序列比对,黄河鲤与高身鲫(Carassius cuvieri)的同源性最高,达94%。采用RT-q PCR进行黄河鲤MT的组织表达分析,结果表明:黄河鲤MT基因的表达存在组织性差异,其相对表达量表现为肝脏肾脏腮脑肌肉。     

黄河鲤金属硫蛋白基因的克隆及表达分析

采用RT-PCR方法克隆获得黄河鲤(Cyprinus carpio)金属硫蛋白基因的编码区(CDS)序列,该序列长183bp,编码60个氨基酸,不含芳香族氨基酸,其中20个半胱氨酸(Cys)集中分布在肽链的N端和C端,具有MT典型的Cys-X(1³个)-Cys结构,预测分子量为6013 D,理论等电点为8.38。经多序列比对,黄河鲤与高身鲫(Carassius cuvieri)的同源性最高,达94%。采用RT-q PCR进行黄河鲤MT的组织表达分析,结果表明:黄河鲤MT基因的表达存在组织性差异,其相对表达量表现为肝脏>肾脏>腮>脑>肌肉。     

鲤鱼HSP70基因组织表达差异研究

1材料与方法 1．1材料 供试鲤鱼购自成都市洗面桥市场。主要试剂：TR—Iaol总RNA提取试剂盒购自Invitrogen公司,反转录试剂盒、pMD-18T载体、D12000DNA和如DNA聚合酶购自大连宝生物工程有限公司;琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自Axygen公司;DEPC原液（Sigma分装）、JM-109感受态细胞购自大连宝生物工程有限公司,其他试剂均为国产分析纯。     

鲤鱼HSP70基因组织表达差异研究

[目的]研究HSP70是否可作为鲤鱼养殖中的应激监测指标。[方法]根据鲤鱼HSP70序列（AY120894）设计并合成1对引物,提取鲤鱼肝脏组织总RNA,通过RT-PCR方法克隆得到鲤鱼HSP70部分cDNA片段,然后检测其在鲤鱼心脏、肠、粘液、性腺、鳔、鳃、鳍等不同组织中的表达差异。[结果]RT-PCR扩增获得鲤鱼HSP70基因cDNA部分序列为480 bp。将测序后推测的氨基酸序列与其他种类的鱼进行同源性比较,结果发现与鲤鱼、斑马鱼、虹鳟、牙鲆、剑尾鱼、鲋鱼的同源性依次为96%、98%、98%、96%、96%、96%。HSP70在鲤鱼8个组织中均检测到表达,其中在心脏中表达最高,其次是鳔、鳍,二者之间无显著差异（P〉0.05）,在肠、粘液与脂肪3个组织中的表达无显著差异（P〉0.05）,但显著高于在性腺与鳃中的表达水平（P〈0.05）。[结论]HSP70作为鲤鱼养殖中应激程度、应激能力、健康状况检测的分子标记物是可行的。     

鲤鱼卵中丝氨酸蛋白酶抑制剂活性的初步研究

利用凝胶层析法从鲤鱼(Cyprinus carpio)卵中分离纯化得到一种丝氨酸蛋白酶抑制剂。选择胰蛋白酶、弹性蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、凝血酶及其特异底物,建立比色法检测,对初步分离的丝氨酸蛋白酶抑制剂活性进行了分析。结果表明,丝氨酸蛋白酶抑制除对胰凝乳蛋白酶无抑制作用外,对其他的蛋白酶均有抑制效果;当温度超过70℃时,丝氨酸蛋白酶抑制剂失活,但在pH 2~11均保持活性,具有较强的酸碱稳定性。     

广西鲤鱼选育F2代家系育种效果分析

【目的】分析评估广西鲤鱼选育F2代家系选育效果,为培育适合广西本地养殖的鲤鱼新品种打下基础。【方法】采用最佳线性无偏差预测法(BLUP)对60个F1代家系的育种值进行评估,构建获得71个F2代选育系(A1~A71)和20个对照系(B1~B20),经被动整合应答标记法(PIT)标记后同塘混养320 d,然后进行F2代家系生长性状测定,并对其体质量遗传增益效果及各性状现实遗传力进行初步估算。【结果】F2代选育系和对照系的平均体质量分别为1008.5和911.9 g,平均日增重3.1和2.8 g,瞬时增重率分别是1.18和1.15%/d,选育系的生长速度比对照系遗传增益10.6%,二者差异显著(P<0.05,下同);其全长、体长和体高也有显著提高。F2代选育系的体质量、全长、体长、体高、体宽现实遗传力分别为0.25、0.33、0.22、0.27和0.15,属于中等遗传力。从获得的71个F2代选育系中选出成活率在60.0%以上、平均体质量超过1100.0 g的7个F2代家系进行生长性状参数分析,结果发现A54和A35两个F2代家系是所有家系中生长性状较优良的家系。【结论】广西鲤鱼选育F2代家系育种效果明显,其中A54和A35两个家系不但生长速度快,而且体型较长、生长整齐,具有较大的选育潜力,可作为下一代选育的后备亲本,为繁育场提供优良的鲤鱼种苗。     

瓯江彩鲤胚胎发育研究

经人工催产、人工授精获得受精卵,对瓯江彩鲤(Cyprinus carpio var.color)的胚胎发育过程和各发育时期外部形态特征进行系统观察,并研究了不同温度条件下其胚胎发育的特点。结果表明,瓯江彩鲤受精卵圆球形、淡黄色、沉性卵、强黏性;卵径为1.72 mm,吸水后卵径达2.67 mm;受精后开始形成卵间隙,且植物极的大于动物极的;卵间隙形成的过程中出现卵黄的收缩,略变小。瓯江彩鲤胚胎发育过程可分为8个大的时期,水温18℃时需98 h48 min出膜,水温23℃和26℃时分别需要62 h20 min、48 h45 min出膜。不同温度条件下,瓯江彩鲤胚胎发育早期(胚盘-原肠胚)在18℃恒定水温条件下存活率最高,发育后期阶段(神经胚-出膜)在23℃恒定水温条件下存活率最高。     

呋喃唑酮及其代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮在鲤鱼体内的残留规律

采用高效液相色谱法(HPLC法)研究呋喃唑酮[3-(5-硝基糠醛缩氨基)-2-恶唑烷酮](FZ)在鲤鱼体内的残留规律.结果表明,采用单剂量口灌90 mg.kg-1的FZ,鲤鱼肌肉中FZ含量在停药1 h后达到最高值,为(201.9±7.6)μg.kg-1,在停药后的36 h检测不到FZ,其消除半衰期为4.9 h,平均消除速率为8.5μg.kg-1.h-1.同时还采用高效液相色谱—串联质谱检测方法(HPLC-MS/MS法)进行FZ的主要代谢物3-氨基-2-恶唑烷酮(AOZ)的残留规律研究.结果表明,FZ在鲤鱼体内代谢较快,而AOZ却很难消除.鲤鱼肌肉中AOZ含量在停药6 h后达到最高值,为(227.3±9.6)μg.kg-1,停药24 d后残留量为0.6μg.kg-1,其消除半衰期为91.2 h,平均消除速率为0.4μg.kg-1.h-1.     

瓯江彩鲤鱼鳞的生化成分分析

为了解瓯江彩鲤鳞片的生化组成特征,采用常规营养分析方法及生化方法测定了瓯江彩鲤鱼鳞中营养及生化成分。结果表明:瓯江彩鲤鱼鳞中水分含量为(51.12±0.54)%,干物质中,总蛋白含量为(75.72±2.73)%,总脂含量为(2.00±0.08)%,矿质元素含量为(20.23±0.89)%;所测鱼鳞中的17种氨基酸总量占干重的(60.80±6.33)%,其中,必需氨基酸占(13.02±0.76)%,非必需氨基酸占(47.78±5.57)%;必需氨基酸中赖氨酸(Lys)含量最高,为(2.77±0.23)%,非必需氨基酸中甘氨酸(Gly)含量最高,为(16.63±1.99%);鱼鳞中检测到19种脂肪酸,其中,饱和脂肪酸占(23.69±0.18)%,单不饱和脂肪酸占(43.76±1.20)%,多不饱和脂肪酸占(32.55±1.02)%,脂肪酸中含量最高的为C18:1n-9c(油酸),其次为C18:2n-6c(亚油酸),另外还检测到C20:5n-3(EPA)与C22:6n-3(DHA);矿质元素中钙、磷、镁、锌含量较高,分别为(62.80±11.30)g/kg、(32.90±7.90)g/kg、(3.54±0.38)g/kg和(95.60±18.20)mg/kg。瓯江彩鲤鱼鳞中总蛋白、矿质元素含量较高,富含不饱和脂肪酸,具有较高的食用及加工利用价值。