一株丁酸梭菌的分离鉴定及其益生特性研究

本研究探索了丁酸梭菌分离株的益生特性,旨在为其在仔猪日粮中的应用提供理论依据。利用常规方法分离丁酸梭菌并进行纯培养,经生化检测和16S rRNA基因测序,对分离菌株进行鉴定;采用活菌计数法和牛津杯法研究分离株培养上清对3种致病菌的抑制作用、分离株黏附猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的特性及其对致病菌黏附细胞的抑制作用;采用细胞计数法研究分离株对IPEC-J2生长的影响;采用ELISA检测分离株处理细胞后培养上清液中细胞因子水平。结果表明,本研究成功分离到一株丁酸梭菌。与对照组相比,丁酸梭菌培养上清对3种致病菌生长抑制效果均显著(P0.05);丁酸梭菌可黏附于IPEC-J2,并且黏附效果最佳的感染复数(MOI)为50,最适处理时长为3 h;丁酸梭菌对3种致病菌黏附IPEC-J2均具有显著抑制作用(P0.05);丁酸梭菌MOI为1、10和50时细胞生长正常、形态完好,MOI为100时IPEC-J2生长受到显著抑制,同时出现部分细胞死亡;MOI为1时细胞因子水平无差异,MOI为10、50和100时细胞因子水平均显著增高(P0.05)。综上所述,本研究分离的一株丁酸梭菌具有较好的益生特性,为其在生产中的应用提供了理论依据。     

三株乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性研究

本研究通过分离鉴定猪肠道内乳酸杆菌并对其益生特性进行比较分析,旨在为乳酸杆菌在仔猪饲粮中的应用提供科学依据。试验选取健康猪粪便,利用选择性培养基进行厌氧培养和单克隆纯化,共获得三株乳酸杆菌,通过生化鉴定、16Sr RNA基因序列测定和同源性分析,确定分离菌株分别为植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌;采用牛津杯法、活菌计数法和细胞试验等研究三株乳酸杆菌体外抑菌活性、黏附性及竞争性黏附猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的益生特性。结果表明:与对照组相比,三株乳酸杆菌培养上清液的抑菌圈直径(P0.01)和抑菌效果(P0.01)差异均极显著,并且以植物乳杆菌培养上清液的抗菌效果为最佳;三株乳酸杆菌均可黏附于IPEC-J2细胞,并且以植物乳杆菌黏附IPEC-J2的菌数为最多;与对照组相比,三株乳酸杆菌对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞均具有抑制作用(P0.01),并且以植物乳杆菌抑制黏附的效果最好。     

超氧化物歧化酶模拟物对氧化应激IPEC-J2细胞抗氧化性能的影响

试验旨在探究在H₂O₂诱导的氧化应激状态下，超氧化物歧化酶模拟物（SODm）对仔猪空肠上皮细胞系（IPEC-J2）的保护作用。利用MTT法筛选出构建氧化应激模型H₂O₂的适宜浓度；将IPEC-J2细胞分别用0、0.05、0.5、5、50、500、2 000 U/mL SODm进行培养，利用MTT法分别在2、4、8、12 h时测定各组细胞存活率，筛选出SODm作用的适宜浓度和时间；根据构建的氧化应激模型和SODm适宜浓度和时间，将IPEC-J2细胞随机分为空白组、模型组、SODm处理组（SODm_0.5、SODm₅、SODm₅₀）和超氧化物歧化酶（SOD）处理组（SOD_0.5、SOD₅、SOD₅₀），分别测定各组细胞存活率、活性氧（ROS）含量及细胞内SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及丙二醛（MDA）含量和总抗氧化能力（T-AOC）。结果表明：①H₂O₂构建细胞氧化应激模型的适宜浓度是1.0 mmol/mL。②当不同浓度SODm分别作用4、8、12 h时，0.5~50 U/mL SODm组细胞存活率显著高于空白组（P<0.05）；且8 h时存活率最高，在12 h时处于下降趋势。③除空白组外，SODm₅和SOD₅预处理的IPEC-J2存活率显著高于其他组（P<0.05）；且SODm和SOD组中细胞ROS含量显著低于模型组（P<0.05）；模型组与空白组相比，均显著降低了SOD、GSH-Px活性和T-AOC水平，提高了MDA含量（P<0.05）；与模型组相比，所有SODm和SOD处理组均显著提高了SOD、GSH-Px活性和T-AOC水平，降低了MDA含量（P<0.05），同时SODm₅₀组T-AOC水平显著低于SOD₅₀组（P<0.05）。综上，SODm对H₂O₂诱导氧化损伤状态下IPEC-J2具有保护作用。     

沙门菌通过NF-κB/β-catenin信号通路引致IPEC-J2损伤的分子机制

为研究沙门菌引致IPEC-J2损伤的分子机制,试验用沙门菌刺激IPEC-J2,在特定时间收集细胞及其培养上清液,采用荧光定量PCR或ELISA检测细胞紧密连接蛋白、炎症反应相关蛋白和细胞增殖相关蛋白的表达以及乳酸脱氢酶（LDH）含量,以确定该沙门菌能够引起IPEC-J2损伤,并进一步采用NF-κB抑制剂和小干扰RNA预处理IPEC-J2,分析了NF-κB/β-catenin信号通路在沙门菌引起IPEC-J2损伤中的调控作用。结果显示,与对照组相比,沙门菌感染组紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA表达量在感染后6和24 h呈极显著下降（P<0.01）;促炎性细胞因子TNF-α和IL-8的生成量以及LDH释放量在感染后6、12和24 h呈极显著上升（P<0.01）,NF-κB p65的mRNA表达在感染后1、3和6 h也呈极显著上升（P<0.01）;细胞增殖蛋白cyclin D1和c-Myc的mRNA表达在感染后6、12和24 h呈显著下降（P<0.05）,其转录调控因子β-catenin的mRNA表达在感染后24 h呈极显著下降（P<0.01）。与沙门菌感染组相比,抑制剂+沙门菌感染组ZO-1和Occludin的mRNA表达量在12和18 h呈极显著增高（P<0.01）,而NF-κB p65、TNF-α和IL-8的表达以及LDH释放量在各时间点均呈极显著降低（P<0.01）;siRNA-β-catenin+沙门菌处理组的β-catenin、cyclin D1和c-Myc的表达量在各时间点均呈极显著降低（P<0.01）,LDH释放量在6和12 h均呈极显著增加（P<0.01）,但在18 h增加不显著（P>0.05）。本试验结果表明,沙门菌激活了NF-κB信号通路,促进了促炎性细胞因子的生成,加重了细胞损伤;同时,沙门菌抑制了β-catenin信号通路,降低了细胞增殖蛋白和紧密连接蛋白的表达,影响了细胞修复,从而出现细胞损伤与细胞修复之间的失调,最终呈现出细胞损伤。本试验从NF-κB/β-catenin信号通路的角度揭示了沙门菌引致IPEC-J2损伤的分子机制。     

S100A12在胸膜肺炎放线杆菌诱导猪肺泡巨噬细胞炎性细胞因子表达及吞噬中的作用

试验旨在探究S100A12在胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）诱导猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophages，PAM）炎性细胞因子表达及吞噬中的作用。PAM细胞接种APP菌株后，用实时荧光定量PCR检测感染后不同时间点炎性细胞因子和S100A12的mRNA表达水平；构建S100A12重组蛋白表达载体并进行重组蛋白的表达纯化，用MTT法检测其对PAM的细胞毒性，实时荧光定量PCR检测不同浓度（0、5、50和500 ng/mL） S100A12重组蛋白对PAM炎性细胞因子mRNA表达水平的影响；构建S100A12干扰质粒，用Western blotting、实时荧光定量PCR及流式细胞术检测其干扰效率及其对APP感染PAM后炎性细胞因子mRNA表达水平和细胞凋亡的影响；用平板计数法检测S100A12表达对APP的黏附侵袭及其在PAM细胞内存活的影响。结果表明，APP感染促进PAM中IL-6、IL-8、IL-18、IL-1β和TNF-α等炎性细胞因子表达的同时也促进S100A12的表达，且该表达随APP感染剂量增大及时间的延长均显著或极显著增加（P<0.05；P<0.01）。5、50和500 ng/mL重组蛋白S100A12对PAM均没有毒性。5和50 ng/mL的重组蛋白S100A12均可显著促进PAM中IL-6、IL-8、TNF-α、IL-1β、IL-21和IL-5等炎性细胞因子的表达（P<0.05），而高浓度的S100A12重组蛋白则对上述炎性细胞因子表达无影响（P>0.05）。干扰质粒可成功阻断S100A12蛋白的表达，与转染shNC的对照组相比，在APP诱导下转染shS100A12干扰质粒的PAM中细胞因子IL-6、IL-8、IL-1β和IL-5的转录水平显著或极显著降低，且细胞凋亡率也显著或极显著增加（P<0.05；P<0.01）。进一步研究发现，干扰PAM中S100A12蛋白的表达可显著增强APP对PAM的黏附侵袭能力及其在PAM内的存活能力（P<0.05），相反，体外添加S100A12重组蛋白则显著抑制APP对PAM细胞的黏附侵袭及其在PAM内的存活（P<0.05）。以上研究表明，S100A12具有增强APP感染后PAM炎性细胞因子的表达、抑制APP诱导的PAM凋亡和降低APP对PAM的黏附侵袭及其在PAM内存活的作用，为进一步揭示APP感染过程中S100A12对PAM调控作用及机制奠定了基础。     

大米草中耐盐乳酸菌的分离鉴定及对大米草青贮品质的影响

本试验旨在研究大米草（Spartina anglica Hubb.）中耐盐乳酸菌的分离鉴定及对大米草青贮品质的影响，以期为大米草青贮利用提供技术支持和理论依据。试验采用传统培养法筛选出耐盐浓度为10%的乳酸菌菌株，通过生理生化及16S rDNA序列分析法综合鉴定筛选的菌株，并将其添加到大米草原料中进行青贮效果观察。结果表明：分离获得的42株乳酸菌菌株，耐盐溶度最高为10%的4株乳酸菌均为同型发酵的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum），命名为C1、C2、C3和C4。4株乳酸菌均能提高大米草的青贮发酵品质，其中C4显著提高青贮料的可溶性碳水化合物和粗脂肪含量（P<0.05），显著降低青贮料的氨态氮含量（P<0.05）；另外，C4处理组的干物质含量和乳酸含量显著高于其他3个菌株处理组（P<0.05），中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、半纤维素和丁酸含量显著（P<0.05）低于其他3个菌株处理组，青贮效果最佳。     

鸭疫里默氏杆菌RIA_0940基因缺失株的构建及主要生物学特性测定

【目的】通过构建鸭疫里默氏杆菌RIA_0940基因缺失株并测定其生物学特性,探讨RIA_0940基因的潜在功能。【方法】以鸭疫里默氏杆菌RA-GD株为亲本株,扩增其左右同源臂及红霉素抗性基因（ermR）盒片段,构建左同源臂-ermR抗性基因盒-右同源臂融合片段,通过自然转化的方法缺失RA-GD株RIA_0940基因,并利用PCR筛选、鉴定RA-GDΔRIA_0940基因缺失株。分别对亲本株RA-GD和缺失株RA-GDΔRIA_0940的生长特性、对雏鸭的半数致死量、感染鸭血液和组织载菌量及对Vero细胞的黏附和入侵性能进行比较分析。【结果】试验成功构建了RA-GD株的RIA_0940基因缺失株（RA-GDΔRIA_0940）;生物学特性检测结果显示,RA-GDΔRIA_0940株体外生长能力较亲本株低,基因缺失株在生长后期生长受到显著或极显著抑制（P<0.05;P<0.01）;RA-GDΔRIA_0940株对雏鸭的半数致死量是亲本株的114倍;与亲本株相比,缺失株感染鸭血液和组织的载菌量显著或极显著下降（P<0.05;P<0.01）;缺失株对Vero细胞的黏附和入侵性能均极显著低于亲本株（P<0.01）。【结论】本试验成功构建RA-GD株RIA_0940基因缺失株,该缺失株在体外培养条件下生长能力较亲本株低,对雏鸭的致病力、感染鸭血液和组织载菌量及对Vero细胞的黏附和入侵性能均显著或极显著低于亲本株。本试验结果为深入研究鸭疫里默氏杆菌的分子致病机理和研制基因工程疫苗奠定了基础。     

饲粮中添加丁酸梭菌和丁酸钠对产蛋鸡生产性能和蛋品质的影响

试验旨在研究在产蛋鸡饲粮中添加丁酸梭菌和丁酸钠对不同品种产蛋鸡产蛋率、鸡蛋雀斑、暗斑以及蛋品质的影响。选择270日龄狼山鸡、芦花鸡、北京油鸡各320只,随机分成2组,每组8个重复,每个重复20只鸡,对照组（CON）饲喂基础饲粮,试验组（EXP）饲粮中添加100 mg/kg丁酸梭菌＋500 mg/kg丁酸钠。预饲期3 d,试验期为5周。试验结果表明,与对照组相比,①试验组狼山鸡、芦花鸡、北京油鸡产蛋率分别提高12.5%、12.0%和24.9%（P<0.01）;②试验组狼山鸡鸡蛋雀斑3级率下降34.2%（P<0.05）,芦花鸡和北京油鸡鸡蛋各级雀斑率均无显著差异（P>0.05）,狼山鸡、芦花鸡、北京油鸡鸡蛋各级暗斑率均无显著差异（P>0.05）;③试验组狼山鸡蛋重降低1.7%（P<0.05）,蛋形指数增加2.3%（P<0.05）;芦花鸡蛋重增加1.5%（P<0.05）;北京油鸡蛋白高度增加13.9%（P<0.05）,哈氏单位增加4.7%（P<0.05）。综上,在产蛋鸡基础饲粮中添加一定量的丁酸梭菌和丁酸钠,可以提高狼山鸡、芦花鸡、北京油鸡产蛋率,对改善狼山鸡鸡蛋的雀斑也有一定的作用,且有助于提高芦花鸡、北京油鸡的蛋品质。     

丁酸梭菌对肉鸡钙磷代谢和胫骨指标的影响

试验通过在基础日粮中添加丁酸梭菌,研究其对肉鸡钙磷代谢和胫骨指标的影响。选择1日龄180只健康AA肉鸡,随机分入3个处理组,每个处理组6个重复,分别为对照组、抗生素组（ATB）和丁酸梭菌组（CB）。对照组饲喂基础日粮,ATB组在基础日粮中添加5 mg/kg黄霉素、75 mg/kg金霉素和20 mg/kg吉他霉素,CB组在基础日粮中添加2.5×10⁸ CFU/kg丁酸梭菌,试验期42 d。结果显示,与对照组相比,①CB组肉鸡血清钙（Ca）、磷（P）含量差异不显著（P>0.05）,21日龄ATB组肉鸡血清钙含量显著提高（P<0.05）;②21日龄CB组肉鸡胫骨强度显著提高（P<0.05）;42日龄CB组肉鸡胫骨磷含量极显著提高（P<0.01）;③21日龄CB组肉鸡排泄物中磷含量极显著降低（P<0.01）,并与ATB组无显著差异;42日龄CB组肉鸡排泄物中钙含量极显著提高（P<0.01）,排泄物中磷含量显著提高（P<0.05）。综合上述结果,在AA肉鸡基础日粮中添加2.5×10⁸ CFU/kg丁酸梭菌有利于改善肉鸡的胫骨发育,改善肉鸡对钙、磷的吸收利用,能有效降低21日龄肉鸡钙、磷排泄量,但并未降低42日龄肉鸡排泄物中钙、磷含量。     

丁酸梭菌对肠道上皮细胞黏附及对鳗弧菌抑制的研究

本试验以鱼肠道上皮细胞为模型,以肠道的致病鳗弧菌为对照,研究了丁酸梭菌对鱼肠道上皮细胞的黏附作用及黏附对细胞的损伤和成活率的影响。结果表明∶丁酸梭菌对鱼的肠道上皮的黏附率为7.39±1.85,低于鳗弧菌的黏附率(P<0.05);对细胞的损伤率为1.02±0.35,显著低于鳗弧菌对细胞的损伤率(P<0.05);黏附后丁酸梭菌组对细胞的成活率的影响与正常对照组比较,差异不显著;当酪酸菌、鳗弧菌与肠道上皮细胞共同培养时,使鳗弧菌的黏附率下降7.03%(P<0.05)。因此,该株丁酸梭菌可以安全地黏附鱼肠道上皮细胞,并能有效抑制鳗弧菌的黏附。     

Effects of Clostridium butyricum on Calcium and Phosphorus Metabolism and Tibia Indexes of Broilers

The effects of Clostridium butyricum on calcium and phosphorus metabolism and tibia indexes in broiler chickens were evaluated in this study.One hundred eighty 1-day-old healthy Arbor Acres broiler chickens were randomly allotted to three groups:the control group,antibiotic group and Clostridium butyricum group with six replicates per group and 10 chickens per replicate.The broilers in control group were fed with the basic diet,while the antibiotic group was fed with 5 mg/kg of flavomycin,75 mg/kg of aureomycin and 20 mg/kg of kitasamycin.Clostridium butyricum group was fed with 2.5×10⁸ CFU/kg Clostridium butyricum in the basic diet for 42 days.The results showed that:Compared with the control group,①the supplementation of Clostridium butyricum did not significantly affect serum calcium and phosphorus level of broilers (P>0.05),and adding antibiotic significantly increased serum calcium level of 21-day-old broilers(P<0.05).②The addition of Clostridium butyricum increased tibia strength at 21-day-old (P<0.05),and phosphorus content of tibia at 42-day-old (P<0.01).③The supplementation of Clostridium butyricum extremely significantly decreased the phosphorus content in feces of 21-day-old broilers (P<0.01),and had no significant difference with ATB group (P>0.05).The supplementation of Clostridium butyricum increased calcium content (P<0.01) and phosphorus content (P<0.05) in feces of 42-day-old broilers.Based on the above results,adding 2.5×10⁸ CFU/kg Clostridium butyricum could improve the tibia development,increase the absorption and utilization of calcium and phosphorus by broilers,and efficiently reduce the calcium and phosphorus excretion of 21-day-old broilers,but not for 42-day-old broilers.     

丁酸梭菌对肉鸡肠道短链脂肪酸含量和菌群多样性的影响

【目的】探究丁酸梭菌在肉鸡消化道内的定植能力以及丁酸梭菌对肉鸡肠道短链脂肪酸含量和菌群多样性的影响。【方法】选择90只健康状况良好的1日龄爱拔益加肉鸡,随机均分为空白组和丁酸梭菌组,每组3个重复,每个重复15只鸡。空白组灌喂生理盐水,丁酸梭菌组灌服荧光标记的丁酸梭菌,3 h及16日龄进行解剖并采集回肠上皮细胞观察荧光情况。随后另外选择30只健康状况良好的1日龄雏鸡,随机分为对照组和试验组,试验组1～6 d饲喂含丁酸梭菌的饲粮,之后饲喂基础饲粮,对照组全程饲喂基础饲粮,试验期21 d。在16和21日龄时,分别采集回肠和盲肠中段内容物,测定乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、己酸和总短链脂肪酸含量,并进行微生物种类、物种丰度比例、菌属以及蛋白功能丰度等差异分析。【结果】3 h及16日龄丁酸梭菌组回肠上皮细胞周围均呈现出荧光现象,表明丁酸梭菌能够定植于消化道上皮细胞。短链脂肪酸含量测定结果显示,与对照组相比,在肉鸡回肠内容物中,试验组16日龄乙酸、丙酸、异丁酸、异戊酸和戊酸含量均极显著增加(P<0.01);21日龄丙酸、异戊酸和戊酸含量均极显著增加(P<0.01),乙酸、异丁...     

鸡源高产淀粉酶丁酸梭菌的分离鉴定

为了获得产淀粉酶的丁酸梭菌,本研究从鸡小肠表面黏液中进行丁酸梭菌的分离与筛选,首先对样品进行80℃水浴10 min除去非芽孢菌后,然后接种到TSN培养基进行菌株的分离与筛选。对分离到的菌株进行菌落形态、显微形态初步观察,然后对疑似丁酸梭菌的菌株进行产酸能力和淀粉酶酶活检测,最后对既产酸又高产淀粉酶的菌株进行生理生化鉴定和16S rDNA序列分析。结果表明分离到一株革兰氏阳性厌氧菌C.B1,菌体呈短杆状,能形成圆形或椭圆形芽孢,生理生化结果也符合丁酸梭菌的基本特征,16S rDNA序列长度为1450 bp,与丁酸梭菌的同源性高达99%以上,因此确定该分离菌株为丁酸梭菌,为进一步开发新的微生态制剂奠定了基础。     

丁酸梭菌对高胆碱饮食小鼠血浆游离脂肪酸组成的影响

【目的】分析丁酸梭菌对高胆碱饮食造成脂代谢异常小鼠血浆游离脂肪酸组成(FFA)的影响,以阐明丁酸梭菌调节高胆碱膳食脂代谢的作用机制。【方法】选取4周龄健康的雄性昆明小鼠24只,随机分为3组：正常组、模型组和丁酸梭菌组,每组8只。高胆碱饮食造模8周后,给药7 d,禁食12 h,采集血浆、肝脏、附睾脂肪垫和肾周脂肪,对肝脏、脂肪称重,利用生化仪检测血脂水平;通过HE染色及油红O染色分别观察肝脏组织结构变化及脂滴沉积程度;利用液相色谱-质谱联用(LC-MS)技术检测小鼠血浆氧化三甲胺(TMAO)含量;利用气相色谱-质谱联用(GC-MS)技术及多元统计分析研究血浆中FFA组成。【结果】与模型组相比,丁酸梭菌组小鼠体重、脂肪增长得到显著抑制(P<0.05),给予丁酸梭菌后小鼠肝脏脂肪沉积减少;丁酸梭菌显著或极显著降低了高胆碱饮食小鼠血浆中甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)含量(P<0.05;P<0.01),并使高密度脂蛋白(HDL-C)含量显著升高(P<0.05);丁酸梭菌灌胃后,高胆碱饮食小鼠血浆TMAO浓度显著降低(P<0.05);丁酸梭菌可显著降低高...     

鸡用抗大肠杆菌感染的混合益生菌制剂的制备与评价

本研究旨在探索益生菌对雏鸡抵抗大肠杆菌感染的影响,为微生态制剂的开发提供依据。通过牛津杯试验和细菌黏附抑制试验,初步得到体外抑制大肠杆菌效果良好的3种益生菌及它们的等比例混合菌液,分别为植物乳杆菌ZN-3、鼠李糖乳杆菌QC、丁酸梭菌HYCB和混合菌制剂X。连续30 d向7日龄SPF雏鸡分别灌服各益生菌及它们的混合制剂,并在灌服的第26~30天每天感染1次大肠杆菌XT-13,记录雏鸡存活率和体重变化。利用相同的灌服与感染方案,分析混合益生菌组雏鸡感染XT-13后的心脏、肝脏以及大肠的剖检与病理变化,并通过免疫组织化学法检测肝脏和肠道的大肠杆菌载菌量。另外,为了分析灌服混合益生菌制剂对大肠杆菌感染后雏鸡细胞因子的影响,采用非致死剂量的XT-13感染雏鸡,分别在感染后第4、8和14天检测血清中白细胞介素-10（IL-10）、白细胞介素-17（IL-17）和肝脏中禽防御素-β1（AvBD1）的水平,并测试感染后14 d血清的杀菌能力。最后,评估混合益生菌制剂对O78血清型大肠杆菌AV006感染雏鸡的广谱保护力。结果表明,各益生菌发酵液上清的抑菌效果明显,益生菌混合后可降低XT-13对DF-1细胞的黏附率（P<0.05）;灌服混合益生菌制剂对雏鸡的增重效果优于单一益生菌,且对雏鸡感染XT-13后具有较好的保护效果,存活率达到87.50%;混合益生菌制剂可显著降低雏鸡肝脏和大肠的XT-13载菌量,减轻病理损伤,调节机体血清IL-10和IL-17以及肝脏中AvBD1的水平,并提高血清的杀菌能力;大肠杆菌AV006的保护性试验结果表明,混合益生菌制剂还可降低雏鸡感染O78型大肠杆菌的死亡率。综上,植物乳杆菌ZN-3、鼠李糖乳杆菌QC和丁酸梭菌HYCB的混合制剂可促进雏鸡增重、减少载菌量、降低组织病变程度并调节宿主的免疫反应,对禽大肠杆菌病有良好的防治作用,具有开发成为抗禽大肠杆菌病益生菌制剂的巨大潜力。     

Preparation and Evaluation of Mixed Probiotics for Chicken Against Escherichia coli Infection

The purpose of this study was to explore the effects of probiotics on chickens' resistance to Escherichia coli infections,and to provide a basis for the development of microecological agents.Based on the Oxford Cup test and the bacterial adhesion inhibition test,three kinds of probiotics and their equal proportion mixed bacterial liquid with good effect of inhibiting Escherichia coli in vitro were obtained initially:Lactobacillus plantarum ZN-3,Lactobacillus rhamnosus QC,Clostridium butyricum HYCB and mixed bacteria preparation X.The 7-day-old SPF chicks were continuously orally fed with probiotics for 30 days and infected with Escherichia coli XT-13 once a day from the 26th to 30th day,and the survival rate and weight change were recorded.Through the same oral and infection protocols,the chicks were necropsied after infection with XT-13,and the results of necropsy and pathology were analyzed,and the amount of bacteria in the liver and intestines was detected by immunohistochemistry.In addition,in order to analyze the effect of oral administration of mixed probiotic preparations on cytokines in chickens infected with Escherichia coli,non-lethal doses of XT-13 were selected to infect chickens,and the levels of interleukin-10 (IL-10),interleukin-17 (IL-17) in serum and avian defensin-β1 (AvBD1) in the liver were measured on the 4th,8th and 14th days after infection.At the same time,the bactericidal ability of the serum was tested on the 14th day after infection.Finally,the broad-spectrum protection ability of probiotics to O78 serotype Escherichia coli AV006 infected chickens was evaluated.The results showed that the antibacterial effect of the supernatant of each probiotic fermentation broth was obvious,and the mixing of probiotics could reduce the adhesion rate of XT-13 to DF-1 cells (P<0.05).The weight gain effect of mixed probiotics was better than that of single probiotics,which had a good protective effect on chickens infected with XT-13.The survival rate was 87.50%.The mixed probiotics significantly reduced the load of XT-13 in liver and large intestine,alleviated the pathological damage,and regulated the levels of IL-10 and IL-17 in serum and the levels of AvBD1 in the liver,while improving the bactericidal ability of the serum.In addition,the broad-spectrum protection test showed that the mixed probiotics reduced the mortality of chickens infected with O78 serotype Escherichia coli.Therefore,the mixed preparation of Lactobacillus plantarum ZN-3,Lactobacillus rhamnosus QC and Clostridium butyricum HYCB could promote chick weight gain,reduce bacterial load,reduce tissue lesions,regulate the host's immune response,and had a good prevention effect on avian colibacillosis,which had a great potential to develop into a probiotic preparation against avian colibacillosis.     

Effects of Lactobacillus amylovorus Metabolites on the Barrier Function of IPEC-J2 Cells Infected by TGEV

This study used Real-time PCR to detect the changes of expression quantity of claudin 3 (CLDN-3), cytokeratin 8 (KRT8) and mucin 1 (MUC1) three proteins mRNA in IPEC-J2 cells at three different time points.IPEC-J2 cells were infected by TGEV, we explored whether Lactobacillus amylovorus metabolites could enhance cell barrier function by maintaining or improving mRNA expression of CLDN-3, KRT8 and MUC1, whether had effects on the barrier function of IPEC-J2 infected by TGEV.The results showed that mRNA expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 in the normal cell control group did not change significantly with time (P> 0.05); MRS medium culture group did not change significantly compared to the normal cell control group(P> 0.05); Gene expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 proteins in Lactobacillus amylovorus metabolites alone treatment group showed significant time-dependent effect (P< 0.05).After being treated 24, 36 and 48 h, gene expressions of MUC1, CLDN-3 and KRT8 proteins in Lactobacillus amylovorus metabolites+TGEV experiment group was significantly higher than virus control group (P< 0.05).Lactobacillus amylovorus metabolites could improve MUC1, CLDN-3 and KRT8 expressions in IPEC-J2 cells, while being able to negatively regulate MUC1, CLDN-3 and KRT8 expressions that TGEV induced in IPEC-J2 cells, thereby inhencing the barrier function of IPEC-J2 cell against TGEV.