烟草赤星病菌超微结构研究初报

 根据结构决定功能的原理,研究植物病原真菌的超微结构,将有助于揭示其致病机理,为植物病原真菌的控制提供基础性的工作.     

烟草赤星病菌生物学特性的研究

１９９１－１９９３年从长春等地采集的标本中分离得到Ａｌｌｅｒｎａｒｉａ菌株。经过对病菌的致病性，形态，生长温度，ｐＨ范围及对不同碳，氮源的利用等项目的测定，确定该病菌为Ａ．ａｌｌｅｒｎａｔａ（Ｆｒ．）Ｋｃｉｓｓｌｅｒ。是引起烟草赤星病的病原菌。病菌在５－３５℃均可生长，但以２５℃，４ｈ条件下萌发率可达１００％，病菌在９种不同的培养基上生长，其中燕麦琼胶培养基，ＰＤＡ，玉米粉琼胶培养基适合于菌丝生长     

竹醋液制剂对烟草赤星病菌的抑制效果研究

为筛选出防治烟草赤星病的有效生物农药,开展了不同浓度竹醋液对烟草赤星病菌的室内抑制效果研究。结果表明,竹醋液对该病菌的生长具有较强的抑制作用,抑制效果随着浓度的增加而增大,以稀释20～40倍处理效果最好,抑菌率达100.00%;其他稀释处理对该病菌的生长仍然具有显著的抑制效果。     

云南烟草赤星病菌致病力分化研究

利用离体叶片悬滴法,将从云南烟区采集、分离的烟草赤星病菌39株分别接种到感病品种RG17上,在保湿培养箱中测定其致病力.结果表明,病菌不同菌株致病力有明显的差异.其中,致病力强的菌株有6株,病指为60～95,最高的两个菌株为97Aa0.03和98Aa612,病指分别为95.0和94.4;致病力中等的菌株有8株,病指为15～47.5;致病力弱的菌株有15株,病指在10以下;还有10个菌株不致病.病菌来源说明,在不同的烟区中都存在着致病力不同的菌株.大理、楚雄两烟区分离的菌株致病力普遍较低;昆明菌株致病力很不均衡;玉溪、红河、曲靖菌株致病力较均衡,致病力不同的菌株均出现.在同一地块的同一烟株上也存在着致病力不同的菌株.     

烟草赤星病菌与黑斑病菌生物学特性的比较

比较烟草赤星病菌和黑斑病菌基本生物学特性.结果表明:烟草赤星病菌和黑斑病菌的最适生长温度分别为25～ 30℃和20 ～ 25℃;pH6～9培养条件更有利于烟草赤星病菌的生长;烟草赤星病菌利用葡萄糖和蔗糖的能力明显大于黑斑病菌;两病原菌对硝酸铵、硫酸铵和干酪素的利用情况基本相同,利用能力大小依次为干酪素、硝酸铵、硫酸铵;...     

拮抗菌Ata 28对烟草赤星病菌的抑制及种类鉴定

从烟草叶片上分离到的细菌Ata28经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,通过平板对峙培养,测定其对不同致病力的烟草赤星病菌（Affernaria alternata （Fries）Keissler）均有拮抗作用,抑菌带的宽度达8．4mm;在温室中进一步进行盆栽控病试验,防治效果为75.8％．无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata28的无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制赤星病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强．     

云南烟草赤星病菌致病力分化研究

利用离体叶片悬滴法,将从云南烟区采集,分离的烟草赤星病菌３９种分别接种到感病品种ＲＧ１７上,在保湿培养箱中测定其致病力。结果表明,病菌不同菌株致病力有明显的差异。其中,致病力强的菌株有６株,病指为６０￣９５,最高的两个菌株为９７Ａａ０．０３和９８Ａａ６１２,病指分别为９５．０和９４．４％,致病力中等的菌株有８株,病指为１５￣４７．５;致病力弱的菌株有１５株,病指在１０以下,还有１０个菌株不致病。病     

烟草赤星病菌致病力测定方法的研究

用烟草赤星病菌(Alternaria alternata)和其它植物来源的分离物(Alternaria sp.)共39个菌株分别接种烟草品种G80和G140的幼苗,并用其中24个菌株接种此二品种的离体叶片。结果表明,不同菌株对离体叶片的穿透生长能力与致病力以及对幼苗的致病力(病叶率与病情指数),明显地表现为从低到高的组群关系。其中,烟草赤星病菌5个菌株,TBA6、TBA8、TBA12、TBA19和TBA28,为表现一致的高致病力,而TBA20和TBA27表现一致的低致病力。比较发现,病菌对离体叶片的致病力(等级)与其对幼苗的致病力,在烟草赤星病菌的24个菌株间以及在两个烟草品种间的趋势相一致,而病菌对离体叶的穿透生长能力与其对幼苗的致病力之间无一致趋势。讨论认为,离体叶片法用于测定病菌的致病力不失为一种准确快速而又易于控制的方法。     

烟草赤星病菌对菌核净的抗药性测定

为合理防治烟草赤星病,减少抗药性产生和农药残留,从云南省11个地州分离烟草赤星病菌菌株96株,就分离菌株对菌核净的抗药性进行了测定,结果表明,供试菌株中高抗菌株28个,中抗菌株39个,低抗菌株29个。不同来源的烟草赤星病原菌株的抗药性存在差异,以思茅、大理的菌株抗药性最高,昆明、红河、临沧抗药性最低。不同地州分离菌株高、中、低抗菌株的比例存在明显差别。大理永平昌街七昌村分离菌株AL208#抗药性最强,抗性倍数达20.30,玉溪市红塔区的菌株AL171#抗药性最低。96株烟草赤星病菌菌株对菌核净的EC50值平均为81.34 mg/L,范围在13.28~269.58 g/L。     

链格孢菌代谢产物的抑菌活性

采用室内生物测定方法对链格孢菌代谢产物的抑菌活性进行了研究.结果表明:链格孢菌不同极性代谢产物对小麦赤霉病菌、水稻稻瘟病菌、油菜菌核病菌、烟草灰霉病菌及杨树溃疡病菌5种植物病原真菌产生不同程度的抑制作用,乙酸乙酯相的抑制作用最强,正丁醇相次之;乙酸乙酯相含量为800 μg·mL1时,其代谢产物对5种病原真菌的抑制率分别...     

Solvent Effects on the Ultrastructure and Chemical Composition of Cuticular Wax and Its Potential Bioactive Role Against Alternaria alternata in Pingguoli Pear

Effects of different polarity solvents on the ultrastructure and chemical composition of cuticular wax in Pingguoli pear as well as their bioactive role against Alternaria alternate were studied and the results showed that the highest wax content was extracted with chloroform, and its wax content was up to 322.2 gg cm2. Long-chain fatty acids predominated in menthol extracts and n-alkanes were predominant in wax extracted with ether, chloroform and n-hexane. Pingguoli pear fruit surface was covered by a smooth and amorphous wax layer with small, scattered crystal. The morphology of recrystallized wax in vitro after removal with different solvents was not similar to that of the intact fruit surface. Removal of cuticular wax with various solvents significantly enhanced A. alternata infection, except for wax removed by methanol. The solvent extracts of methanol and chloroform stimulated the spore germination and mycelium growth ofA. alternata, but the ether and n-hexane extracts showed antifungal activity.     

木霉拮抗烟草赤星病菌菌株的筛选及其生防机制

 利用诱捕法从土壤中分离得到18株木霉(Trichoderma spp.)菌株,采用对峙法从中测定、筛选出一株对烟草赤星病菌(Alternaria alternata)具有极强拮抗作用的菌株(Tv－1),光学显微镜及透射电镜观察结果表明,Tv－1菌株的生防机制主要为生长竞争、重寄生作用以及产生生物活性类物质使病菌菌丝消解的直接抗菌作用,表现为Tv－1菌株菌丝生长迅速;能附着、缠绕于病菌菌丝上,并产生吸器侵入菌丝;同时还能分泌使病菌菌丝原生质浓缩、断裂、消解的物质。     

烟叶面细菌分离筛选及其对烟草赤星病的拮抗作用

为了从烟叶面获得防治烟草赤星病的拮抗菌,利用稀释分离方法,从湖南、云南烟区烟株下部叶片分离得到烟草叶面细菌676株,通过对峙培养试验、孢子萌发试验,结果16株菌株对烟草赤星病有较强拮抗作用;室内盆栽生防测定试验表明,16株菌株不同程度地减轻了烟草赤星病的发生,其中18,19,29,49,71号防治效果好,其防效分别为77．4％,77．4％,92．5％,92．5％和90．3％．     

一种快速、特异性检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata）的巢式 PCR 方法

为建立检测小麦中链格孢菌（Alternaria alternata ）的方法,从河南省小麦黑胚籽粒上分离得到7个优势 A．alternata 病原菌株,对其 rDNA 的内部转录间隔区序列（ITS）进行测序,序列比较表明,分离到的病原菌株与 GenBank 公布的 A．alternata 的 ITS 区序列一致性达到99％～100％。根据 Alternaria 属菌株（A．alternata、A．tenuis、A．tenuissima）和麦类根腐离蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana ）的 ITS 序列比对结果,设计出1对 A．alternata 特异性引物 Aa1F/Aa1R。利用多种河南省小麦的主要病原真菌对该引物的特异性进行验证,只有在 A．alternata 中能特异性地扩增出1条443 bp 的 DNA 片段。以真菌通用引物 ITS1/ITS4为外侧引物、特异性引物Aa1F/Aa1R 为内侧引物进行巢式 PCR 扩增,能检测到 A．alternata DNA 的最低质量浓度为50 pg/μL。因此,建立的巢式 PCR 方法能够快速、特异地检测小麦中的 A．alternata。     

烟草赤星病菌糖蛋白激发子诱导烟草抗病防卫反应

用来自赤星病菌弱毒株的糖蛋白激发子处理烟草，能明显抑制烟煤草体内过氧化氢酶（CAT）的活性，增加组织中H2O2的含量，诱导后1dCAT活性就已开始下降，至第6天下降到最低，以后又逐渐恢复，而H2O2含量的变化趋势与CAT活性的变化相反，随CAT活性的降低，组织中H2O2含量逐渐增加，在诱导后第10天达到最大值，激发子处理烟草还可以诱导碱性PR蛋白基因PR1b的表达；同时，烟草对赤星病强毒株的抗性逐渐增强，以诱导后第10天接种抗性最强，且这种抗性是系统性的，水杨酸（SA）处理后CAT及H2O2的变化与上述趋势类似。     

温度和保湿时间对烟草赤星病叶斑扩展的影响

在人工气候箱内控制条件下研究测定烟草赤星病叶斑扩展规律,结果表明,温度(T)和保湿时间(H)是影响赤星病叶斑扩展的2个主要因素。在温度恒定的条件下,保湿时间延长赤星病病斑面积增大,病斑面积增长一般可持续60h。在12～40℃的温度范围内,烟草赤星病叶斑均可扩展,在同一保湿时间内,12～36℃的温度范围内,随温度升高,病斑扩展率(IP)增大,36℃以后则开始下降。2个品种的病斑面积扩展百分率与温度、保湿时间及其互作具有线性关系NC89SQRT(SQRT(IP))=0.4971-0.00003128×T2×H+0.006659×T×H-0.00006694×T×H2;中烟99SQRT(IP)=0.08099+0.02003×T×H-0.0001078×T×H2-0.002005×H2     

烟草赤星病菌代谢产物对烟草BY-2细胞ROS爆发和ATP损耗的诱导?

 【目的】本文以烟草BY-2细胞为实验材料,探讨赤星病菌代谢产物（metabolic products of Alternaria alternata,MP）对烟草BY-2细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）产生和ATP含量变化的影响以及产生这种影响的原因。【方法】用10% MP处理烟草BY-2细胞,用氧电极检测不同时间MP处理后,烟草BY-2细胞呼吸速率和呼吸途径的变化,同时分析BY-2细胞内H2O2产生和ATP含量等的变化。【结果】 MP处理导致了烟草BY-2细胞H2O2爆发和ATP含量下降,此外MP处理也导致了烟草BY-2细胞总呼吸速率、细胞色素途径（cytochrome pathway）和及交替氧化酶途径（AOX）的下降,并且造成线粒体渗透转换孔（permeability transition pore,PTP）开放和细胞色素c释放。【结论】 MP对BY-2细胞呼吸速率和细胞色素途径的抑制不可避免地导致胞内ATP含量下降,此外MP诱导的烟草BY-2细胞氧化磷酸化的解偶联作用是MP导致胞内ATP含量下降的另一重要原因。而MP对 AOX途径的抑制则是诱导胞内ROS爆发的重要原因。     

利迪链霉菌A01活性代谢产物对甘蓝枯萎病菌的抑制作用及其机理

 【目的】明确生防利迪链霉菌A01菌株的活性代谢产物纳他霉素对甘蓝枯萎病菌的抑制作用及其机理,为其下一步的产品开发和应用提供科学依据。【方法】分别采用带毒平皿法和凹玻片法测定活性产物对病菌菌丝生长和孢子萌发的抑制作用,采用电导率法和美蓝染色法分别测定其对菌丝体细胞膜通透性和细胞存活性的影响,借助电镜观察其对菌丝超微形态和结构的影响。【结果】纳他霉素对甘蓝枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发的最低抑菌浓度分别小于或等于31.92和41.04 μg•mL-1,抑制中浓度分别为8.69和3.06 μg•mL-1;30 μg•mL-1以上浓度的纳他霉素处理90 min后可使菌丝悬浮液电导率明显升高,其作用强度与纳他霉素的浓度和作用时间呈正相关;处理后的菌丝生长异常或畸形,并出现细胞器解体、细胞液泡化等现象;10 μg•mL-1以上纳他霉素处理120 min后菌丝大部分可被美蓝染成蓝色。【结论】纳他霉素对甘蓝枯萎病菌菌丝生长和孢子萌发均有明显的抑制作用,能够增加病菌细胞膜的通透性,破坏菌丝细胞的形态和结构,导致其丧失存活能力。