大肠杆菌灭活苗的免疫试验

用甘肃省大肠杆菌的代表血清型和筛选的大肠杆菌菌株原生质体融合菌株及大肠杆菌菌株与沙门氏菌菌株原生质体融合菌株研制的大肠杆菌菌苗进行大肠杆菌灭活苗免疫学试验,试验结果表明菌苗免疫性能好,菌苗的免疫高峰期在30 d左右,凝集抗体滴度在28左右,对动物的保护期在4个月以上,而且稳定性能和安全性能均良好,是一种效果较好的菌苗。     

大肠杆菌病新型菌苗研制近况

众所周知,大肠杆菌是动物肠道常在菌之一。每克粪便中平均10~6个。目前,大肠杆菌病是危害养鸡业最严重的疾病之一,仔猪黄痢主要侵袭出生后1—5日龄的幼猪,亦由大肠杆菌引起,平均病死率30％左右。严重的可达100％,是我国目前养猪业的一大危害。因此,     

大肠杆菌多价菌苗的研究

根据我国大肠杆菌常见的血清型44563（O8：K87、K38ac：H19）、C83903 （O14：K89[B]、K88ab[L]）、C83907（O149：K91、K38ac）、44820（O101：K99：H^-）菌株研制成多价灭活口服菌苗和提纯K38粘着素抗原、肠毒素与口服菌苗混合制成的注射菌苗。对母猪行两个途径免疫，其所产仔猪经哺乳后用异种血清型的菌株进行强毒攻击。其结果：第一组（口服-肌肉注射组）新生乳猎发病率为2.5%，保护率为97.5%；第二组（后海穴注射组）发病率为10%，两组均无死亡；未进行免疫的对照组发病率为37%。带有K88粘着素和产毒素能力的异种血清型的C83552菌株进行致病力测定，其结果：口服96～120亿活菌量的新生乳猪发病率为100%，死亡率为100%；口服48亿活菌量的发病率为100%，死亡率为25%。我们选定96亿活菌量作为攻毒的活菌数，进一步扩大试验，以期用于生产。     

鸡大肠杆菌菌苗的制备

对北京市郊区某鸡场疑似大肠杆菌病的病死鸡进行细菌的分离培养，生化试验，血清型鉴定，并进行雏鸡的攻毒试验，挑选出毒力强的菌株作为种子，大量培养，经灭活，安全试验后制成自家菌苗，然后进行效力试验，该菌苗的保护率达９６％，认为自制自家菌苗的效果尚令人满意。     

致病性大肠杆菌苗用菌株的原生质体融合的研究

对筛选的5株大肠杆菌(E2:O2、E6:O78、E7:O8、E9:O9、E22:O138)进行药敏试验以及致病性大肠杆菌原生质的制备、融合和筛选试验。结果表明:①5株大肠杆菌对多种抗菌素存在抗药性,并且这种抗药性能进行培育,同时,在原生质的融合过程中能递进;②大肠杆菌原生质体选择的最佳组合是:溶菌酶2.0 g/L,处理时间是20 m in;③大肠杆菌的融合率在10-8左右,大肠杆菌之间的融合率为10-6左右;共选出3株融合菌株为E2-E6、E6-E7和E2-E22,各融合株的生化特征介于起源菌株的生化特征之间,有2株融合株的抗原特征含原菌株各自的抗原成分。     

鸡致病性大肠杆菌分离及甲醛灭活菌苗的研制

鸡大肠杆菌病为鸡的细菌传染病之一，尤其在集约化鸡场无所不在。对鸡大肠杆菌的防治方法很多，其中菌苗预防是较为有效的一种办法。但也出现由于大肠杆菌血清型繁杂而预防达不到理想的结果，鉴于大肠杆菌的这种特殊性，为探索自家菌苗的实际应用效果，笔者于1996年从三个典型发病鸡场分离了门株具高度致死性大肠杆菌，研制成自家菌苗，分别用于发病鸡场，对2000羽头10－2！日龄雏鸡进行免疫注射处理预防试验，结果免疫组的鸡大肠杆菌平均发病率为6．97％，比对照组（刀＊叽）降低匕个百分点，差异显著，且未再复发。现报告如下。三菌种分离…     

鸡大肠杆菌自家菌苗的制备

大肠杆菌病是当前鸡群重要的疾病之一,由于大肠杆菌的致病血清型很多,并且易产生耐药性,用药物控制该病不但费用高,效果不好,且会造成药物残留。鉴于各地、场发病的血清型不尽相同,所以,当今国内外尚未有适合各地禽场均有效的菌苗。据报道,有些鸡场自行分离菌株制造自家菌苗进行免疫有良好的效果。据此,笔者对一家污染严重的鸡场进行了大肠杆菌分离鉴定与自家菌苗的制备。     

仔猪大肠埃希氏菌地方多价油乳剂灭活菌苗的研制

由毒素源性大肠杆菌（ETEC）引起的仔猪黄痢、白痢是造成仔猪死亡的主要原因之一，对养猪业危害甚大。因此，对大肠杆菌疫苗的研制被广泛重视。近几年虽有大肠杆菌单价苗，但使用效果不一。鉴于大肠杆菌在一定区域流行的菌株的血清型具有稳定性，选用针对性较强的地方优势血清菌株与标准菌株混合，制成多价灭活苗来防治仔猪大肠杆菌病，现将结果报道如下。     

肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶苗的研制

从分离鉴定的49株大肠杆菌中筛选出5株致病力强、免疫原性好、具有优势血清型的大肠杆菌作为制苗菌株，经培养灭活后，以蜂胶为佐剂，研制出的肉鸡大肠杆菌多价灭活蜂胶疫苗，使用安全，免疫效果好。用该苗免疫后150d的保护率为100％，无不良反应。该苗4C下保存1年不失效。田间试验结果表明，该苗性能好，免疫后对肉仔鸡、肉种鸡的生产性能无不良影响，鸡群大肠杆菌病的死亡率明显下降。     

鸡大肠杆菌多价灭活油乳疫苗的研制与应用

选择从山东不同地区分离的6个具有优势血清型的大肠杆菌菌株，经培养、混合、灭活后，用白油、吐温、司本，按一定比例混合，制备鸡大肠杆菌多价灭活油乳疫苗，安全性检验、效力检验、稳定性试验结果表明，该疫苗安全有效，接种后无不良反应，保护率达95%以上，4-8℃保存1年，20-25℃保存半年不失效。田间免疫试验和扩大区域试验结果表明，该疫苗性能良好、安全，对蛋鸡、肉鸡、雏鸡的生产性能无明显不良影响，经免疫后，因大肠杆菌的死亡率由对照组的7.5%、9.8%、4.6%降至2.1%、2.8%、1.8%。     

Vaccination experiments on pregnant mice with E. coli vaccines prepared from septicaemic and enteropathogenic strains of E. coli

Experiments have been carried out with vaccination of pregnant mice against E. coli, followed by i.p. challenge of the offspring at one week of age.With a septicaemic strain the results were highly significant, and the method is therefore recommendable for testing of vaccines against such strains of E. coli.Results were less clear-cut with enteropathogenic strains of E. coli. However, with mortality rates of 40 to 45 % in baby mice born by non-vaccinated mothers and less than 15 % in baby mice born by vaccinated mothers, the difference in percentage mortality seems sufficient to warrant the use of the method also in the control of vaccines against enteropathogenic E. coli strains.     

滨海地区鸡致病性大肠埃希菌的分离鉴定

为了控制滨海地区鸡大肠埃希菌病的发生,对大肠埃希菌污染严重的部分鸡场进行了病原分离培养、血清型鉴定以及田间试验.结果表明,14株分离菌中有11株属于大肠埃希菌;分离株血清型主要有O78、O24、O93和O11 4种;免疫保护试验使大肠埃希菌病死率降低了6％.     

牦牛致病性大肠杆菌多价油佐剂灭活苗的初步研制

本研究在分离出牦牛致病性大肠杆菌并鉴定其血清型之后,筛选出2株致病力强、免疫原性好、具有优势血清型(O142、O148、O158)的大肠杆菌菌株作为制苗菌株,以油为佐剂,研制出的牦牛致病性大肠杆菌多价油佐剂灭活苗对家兔使用安全,免疫效果好。4 ℃冰箱至少保存12个月。     

禽致病性大肠杆菌(APEC)菌蜕的制备研究

菌蜕是通过PhiX174噬菌体溶菌基因E的可调控表达而形成的、缺少细胞浆和核酸且无繁殖能力的革兰氏阴性细菌菌体。这种非变性的灭活方式使菌蜕完好保留了细菌的各种抗原成分和免疫黏附分子,具有优良的免疫原性和固有的免疫佐剂性质以及免疫系统靶向性质。菌蜕的这些生物学特点使其在作为新型非变性灭活菌苗、作为递呈异源抗原的重组疫苗以及作为DNA疫苗甚至药物的载体方面都显现出巨大的研究开发前景。本研究成功构建了热敏诱导、pR、pL串联双启动子表达E基因的、具有不同抗性标记和复制起点的系列溶菌载体,比国外用pR或pL单启动子的溶茵载体在K-12株大肠杆菌(如XL1-blue)的溶茵效率高一个指数级。本研究还成功制备出禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic E.coli,APEC)野毒株的菌蜕,为进一步进行菌蜕疫苗的开发研究奠定了技术基础。     

鸭源巴氏杆菌-大肠埃希菌二联多价蜂胶灭活疫苗的制备与免疫效果试验

本研究选取鸭致病性大肠埃希菌（E．coli）常见血清型O1、O2、O18、O78和3株分离自发病鸭场、毒力强、免疫原性好的巴氏杆菌（Pasteurella multocida,P砌）D22、D23、D157作为制苗菌株,分别以鲜血琼脂和马丁琼脂进行固体表面培养制备的抗原与蜂胶佐剂高速乳化,制备鸭多杀性巴氏杆菌-大肠埃希菌二联多价蜂胶灭活疫苗。结果表明,疫苗安全可靠,雏鸭一免后第14天对同源E．coli、Pm攻击免疫保护率为100％和90％;雏鸭二次免疫后第14天的免疫保护率均为100％。用间接ELISA对免疫鸭进行抗体消长规律检测,7日龄商品麻鸭首免后20d抗体达到高峰,抗体维持时间在54d以上;首免7d后进行二免,可产生显著高于一免的抗体水平。疫苗免疫雏鸭能够显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）地增强T细胞的免疫力,可维持3周左右。疫苗在4℃可保存12个月以上。     

鸡大肠埃希氏菌灭活疫苗生产工艺改进试验

为解决鸡大肠埃希氏菌灭活疫苗生产时培养菌数低、使用时免疫反应重的问题,在EC24、EC30、EC45、EC50发酵培养中加入0.43～0.53%葡萄糖,试验组和对照组相比培养菌数增加了40.8%、疫苗产量增加了32%、降低了生产成本。采用高速离心方法排除了菌液中的毒素、减少了疫苗的副作用,蛋鸡免疫试验苗后产蛋率比免疫常规疫苗高8.7%。按新工艺试制疫苗4批,安全、效力检验合格,其它各项指标检验均能达到国家标准。     

陕西某种鸡场大肠埃希菌血清型调查与灭活苗研制

为控制大肠埃希菌病的危害,对从陕西某种鸡场分离鉴定的20株鸡大肠埃希菌进行了血清型调查,结果O2型5株、O6型3株、O78型4株,未定型8株,表明鸡场的大肠埃希菌有了新的流行菌株O6出现。用定型的分离菌株研制的自家灭活菌苗免疫接种雏鸡,7 d后可检测到抗体,14 d产生免疫保护力。29日龄二免,90 d后抗体水平仍在5log2以上。119日龄三免,免疫后5个月抗体水平仍维持较高,但6个月后,抗体水平已在5 log2以下,失去保护力。通过3年的应用,该场种鸡大肠埃希菌病的平均死亡率由6.7%下降至1.6%,雏鸡死亡率由4.2%下降至1.8%,差异极显著(P<0.01)。