我国地方鸡种TAP2基因SNP筛查及遗传结构分析

抗原处理相关转运体基因(TAP)位于主要组织相容性复合体区域,而由TAP1 和TAP2 组成的二聚体能够将抗原肽从细胞质转运入内质网腔,因此,其在免疫反应过程中发挥重要的呈递作用。[目的]检测26个鸡种TAP2基因全长的序列信息,分析TAP2基因单核苷酸多态性,并进一步研究TAP2不同SNPs位点对其蛋白结构的影响及其在不同鸡种中的遗传变异特点。[方法]采用目标捕获序列测序方法,检测26个鸡种的260个体的TAP2基因全长,利用DNAMAN软件对26个鸡品种的测序序列进行比对分析,筛选不同鸡种TAP2基因存在的SNP位置以及类型,并通过软件预测分析SNP对蛋白的影响,进一步构建系统进化树,探究不同鸡种同源性。[结果]TAP2基因总共有效测序长度为3 037 bp,在不同鸡种中一共发生了20个位点的突变,具有较为丰富的遗传多样性,其中9个SNP发生在外显子上,其余则存在于内含子,同时分析了对编码氨基酸产生影响的4个SNP(rs316795220、rs738706078、rs739725385、rs732937653)对蛋白结构的影响。[结论]鸡TAP2基因具有较高的多态性,这些丰富多态的基因的存在为进一步利用丰富的资源提供了原始材料。该研究为TAP2基因转运抗体功能关联研究候选SNPs的选择提供了科学依据。     

不同鸡种TLR1和TLR2基因SNP检测分析

本研究利用DNA直接测序技术对9个地方鸡种(北京油鸡、白耳鸡、溧阳鸡、河南斗鸡、泰和乌骨鸡、大骨鸡、狼山鸡、仙居鸡、茶花鸡)和1个引进品种(白来航蛋鸡)鸡Toll样受体1(chTLR1-1、chTLR1-2)、Toll样受体2(chTLR2-1、chTLR2-2)基因的全部外显子、部分内含子及5′调控区的序列进行单核苷酸多态性(SNPs)检测。结果共发现了27个SNP位点,96%的SNPs位于编码区,其中33%的SNPs为错义突变。chTLR2-1基因在所有品种中均未发现SNP位点,chTLR1-1、chTLR1-2和chTLR2-2基因在9个地方品种中突变位点较为丰富,且不同品种间SNP数量差别较大,但在白来航蛋鸡中均未发现SNPs位点。本试验为进一步开展地方鸡种chTLR1和chTLR2基因多态性与抗病研究提供了理论依据。     

鸡SH3RF2插入/缺失等位基因在中国地方鸡种中频率分布研究

中国地方鸡种资源丰富,风味较优,但存在生长速度慢、饲料效率低等缺点,因此为了加速我国地方鸡种和肉鸡品种的遗传改良,分子标记技术得到了广泛应用。已知SH3RF2基因的插入/缺失突变与肉鸡生长和体重密切相关,因此本试验对分布在我国各地的15个地方鸡品种进行了SH3RF2基因的等位基因频率检测,以确定SH3RF2基因在我国地方鸡种中的等位基因分布情况,继而将SH3RF2基因用于鸡生长性状的选择的分子育种标记。研究结果发现所检测地方鸡种和肉鸡品种均是非缺失的纯合子,没有发现缺失的等位基因。要利用SH3RF2基因对中国地方鸡种进行选择,可能需要通过杂交等手段将缺失型等位基因导入我国地方鸡种的群体之中。     

H9N2禽流感病毒PB2蛋白627位点突变对小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4表达和分布的影响

PB2蛋白627位点被证实是决定甲型流感病毒宿主范围和致病性的关键因子,为深入探究H9N2禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)及其PB2蛋白627位点突变株对BALB/C小鼠肺脏RIP3、Slit2和Robo4基因表达和组织分布的影响,该研究使用H9N2 AIV(V_K627E)和该毒株PB2蛋白627位点突变株(rV_K627E)感染BALB/C小鼠,分别在攻毒后第1、3、5、6 d采集肺组织,通过qRT-PCR和免疫组织化学技术对RIP3、Slit2和Robo4基因在小鼠肺组织中的特异性表达和分布进行研究。结果显示,攻毒组小鼠肺脏RIP3的表达量与对照组相比显著上升,同时V_K627E组RIP3的表达量显著高于rV_K627E组;Slit2和Robo4的表达量在攻毒后第1 d明显低于对照组,之后r VK627E组的表达量与对照组和V_K627E组相比显著上升。免疫组织化学检测结果显示,RIP3蛋白主要分布在小鼠肺泡壁上皮细胞以及肺动脉血管内皮细胞,呈弱阳性...     

β-catenin和BMP2基因在幼龄水貂皮肤中表达的研究

本试验旨在探讨β-catenin和BMP2基因在幼龄水貂皮肤中定量表达的规律及意义。试验选用0～6周龄的幼龄公水貂21只,每周龄各3只,采集背中部的皮肤样品,运用实时荧光定量PCR技术相对定量方法, 检测不同周龄的幼龄水貂皮肤中β-catenin和BMP2基因相对表达量的变化。结果显示,随着周龄的增加β-catenin mRNA丰度呈上调趋势,在4周龄时显著增大(P<0.05),5周龄时达最大(P<0.01),6周龄时β-catenin相对表达量与5周龄相比极显著下降(P<0.01);而BMP2 mRNA的表达保持稳定(P>0.05)。β-catenin mRNA的丰度与次级毛囊发育变化趋势一致,与前人相关报道一致,提示其可能参与水貂次级毛囊发育;而BMP2 mRNA的丰度在毛囊发育阶段变化不明显。     

鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达水平研究

为了解鸡在胚胎期以及出壳后的机体免疫状态,本研究采用SYBRGreenI实时荧光定量RT-PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后(1日龄～35日龄)脾脏中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平,并研究鸡脾脏免疫功能的建立情况。研究发现:鸡脾脏中IFN-γ和IL-2的基因表达最早于13胚龄被检测到,随后迅速升高,分别于出壳后7日龄和10日龄达到峰值。出壳后,鸡脾脏中同一种细胞因子的基因表达水平显著高于胚胎时期。研究还表明:IFN-γ和IL-2的基因表达模型与出壳后鸡脾脏的发育以及T细胞的迁移定殖情况相一致。该研究对从分子水平,进一步了解鸡在胚胎时期和出壳后,脾脏免疫功能的建立情况具有重要意义。     

PB2-340K和PB2-588V突变导致H9N2禽流感病毒在哺乳动物间传播

H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)于1966年首次在美国火鸡中发现,它在禽类之间的有效传播使其在全世界家禽中流行。H9N2亚型AIV也能够感染人和多种哺乳动物(如猪、狗、水貂、蝙蝠),中国于1998年报导了第一例人感染H9N2 AIV的病例。血清学研究发现具有家禽接触史的人(特别是从事家禽职业的工人),H9N2 AIV抗体的阳性率比普通人要高,说明H9N2 AIV可以从家禽传播感染人。     

蒙古绵羊在不同季节的生长过程中Bcl-2与Bax基因在皮肤中的表达

笔者应用免疫组化s-p法,检测个不同月份石蜡包埋组织切块Bcl-2和Bax基因的表达情痀。试验结果：Bcl-2在皮肤细胞内表达情痀各个月份不同,4月和10月之间无显著差异（P＞0.05）,而分别与5,6,8,12月4个月份之间差异显著（P＜0.05）;5,6月和8月之间无显著差异（P＞0.05）,而分别与4,10,12月3个月份之间差异显著（P＜0.05）。皮肤的厚度与Bcl的表达呈正比关系。4月份起开始变薄,5-6月份为最薄。Bax在皮肤细胞内表达4,5;6,8;10,12三组组内不同月份Bax表达差异不显著（P＞0.05）,而组间表达差异均显著（P＜0.05）Bax在5-6月份Bax表达水平急剧上升（7.313%-42.813%）;在8-10月份Bax蛋白的表达水平急剧下降（32.263%-23.00%）。结论：细胞凋亡引起的蒙古锦羊毛的生长和脱落可能与Bcl-2和Bax的表达有关,并且发重要的调控作用。Bax基因表达促进细胞凋亡。     

鸡传染性喉气管炎病毒SA2株在鸡肾细胞中增殖规律的研究

传染性喉气管炎病毒SA2株系澳大利亚分离到的一株自然弱毒,该毒株具有良好的免疫原性和安全性。SA2可以在鸡肾细胞中良好增殖,潜伏期为12-18／小时,接种后30／小时达到增殖高峰,病毒价达106.2EID50／0.2ml,最大滴度持续至48／小时以后。SA2在鸡肾细胞上产生明显的细胞病变,病变特征为相邻感染细胞融合形成多核巨细胞,内含5-10个核。鸡肾细胞接种不同滴度的病毒,产生的细胞病变程度亦差异很大。接种量为106.5-7.5EID50SA2,48小时有90％以上鸡肾细胞可产生细胞病变;接种剂量若低于105.5EID50,接种120／小时也只引起部分鸡肾细胞出现细胞病变,不能波及整个细胞单层。通过对SA2株在鸡肾细胞中蚀斑形成影响因素的研究,建立了一种应用鸡肾细胞培养物对ILTV-SA2株蚀斑研究方法。结果发现,ILTV-SA2在鸡肾细胞中37℃吸附2小时达到最大吸附量,而且病毒浓度与病毒形成蚀斑数量呈直线关系,表明1个ILTV粒子可以产生1个蚀斑。     

鸡鼻相关淋巴组织中IFN-γ和IL-2mRNA表达水平的动态变化

本研究旨在观察鸡鼻黏膜相关淋巴组织（NALT）在不同日龄时细胞因子上干扰素（IFN-γ）和白细胞介素-2（IL-2）mRNA的表达水平,分析鸡NALT免疫功能的建立情况,试验以不同日龄海蓝白鸡鼻腔后部组织为研究对象,采用SYBRGreen1qRT—PCR方法,检测鸡在胚胎时期和出壳后初期鼻相关淋巴组织中IFN-γ和IL-2mRNA的表达水平。研究发现：NALT中于18胚龄检测到IFN-7和IL-2mRNA,随后表达水平逐渐升高,并于21日龄时达到峰值。此外,在4日龄时2种细胞因子与CD4＋细胞出现的时间相同,表明2种细胞因子由该免疫活性细胞所分泌。NALT在4日龄时开始具有-定的免疫功能,并随日龄增长逐渐增强,21日龄时达到成熟水平。     

中华宫廷黄鸡肤色的研究

本文着重研究添加加丽素、球虫病、放养、圈养等因素对中华宫廷黄鸡皮肤颜色的影响。饲料中添加加丽素黄60mg/kg,加丽素红50mg/kg时，脚胫颜色达到9－10．4个色级，比对照组提高4－6个色级。70日龄彻底驱虫出售时，皮肤颜色可以提高2－3个色级，放养的圈养鸡色级高2．2－4．5色级。     

中国北京油鸡和引进白来航蛋鸡免疫性状的比较

选取同期孵化出雏的中国地方鸡种北京油鸡(Beijng-You Chicken,BYC)和引进蛋鸡品种白来航鸡(White Leghorn,WL)各250只母雏,在相同饲养条件和免疫程序下饲养,测定和对比异嗜性粒细胞(Heterophil)数量、淋巴细胞(Lymphocyte)数量和异嗜性粒细胞/淋巴细胞比率(Heterophil/Lymphocyte,H/L)、白细胞总数(Blood white cell count,BWCC)、绵羊红细胞(Sheep blood red cell,SRBC)免疫抗体滴度和不同日龄的禽流感(Avian Influenze,AI)、新城疫(Newcastle disease,ND)的免疫抗体滴度等免疫性状的差异.试验结果表明①北京油鸡的H/L值为0.36±0.21,白来航蛋鸡为0.52±0.51,二者呈极显著差异(P＜0.001);北京油鸡的白细胞总数明显高于白来航蛋鸡(P＜0.001);②SRBC抗体滴度在两品种之间差异不显著(P＞0.05);③14、28日龄两次免疫禽流感疫苗(H5N1毒株)后,在免疫后21、41、71、105天的4个测定日中,两个品种的禽流感免疫抗体滴度值均呈现先升高后降低的变化趋势,北京油鸡在4个测定日龄的AI免疫滴度值都均高于白来航蛋鸡,差异均达到极显著水平(P＜0.001);④同期免疫新城疫疫苗(LaSota毒株),在免疫后21、41、71和105天测定ND抗体滴度,北京油鸡在免疫后21天时达到最高,之后随日龄的增长而呈逐渐降低趋势;白来航蛋鸡在免疫后41天时抗体滴度水平达到最高,以后随日龄增长而下降.4个测定日龄的ND滴度水平北京油鸡均高于白来航蛋鸡.该研究结果初步显示,中国地方鸡种北京油鸡和引进白来航蛋鸡品种的免疫性状具有明显的遗传差异,北京油鸡的综合免疫性能和抗应激能力优于白来航蛋鸡.     

矮脚黄鸡、兴义矮脚鸡血清蛋白多态性的比较研究

利用聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳对贵州矮脚黄鸡、兴义矮脚鸡的血清前白蛋白(Pa)、白蛋白(Alb)、后白蛋白(Po)、运铁蛋白(Tf—1,Tf—2)5个位点多态性进行检测。结果表明:除Pa位点在矮脚黄鸡表现为单态,在兴义矮脚鸡表现为多态外,其它4个血清蛋白位点在两鸡种均具多态性,诸位点分别受2～3个(复)等位基因控制。Hardy-Weinberg平衡状态检测结果表明,两群体的Tf—1、Tf—2位点基因型频率都偏离了Hardy-Weinberg平衡状态。兴义矮脚鸡的有效等位基因数和期望杂合度(1.8792,0.4539)较大,矮脚黄鸡(1.7538,0.3772)较小,表明兴义矮脚鸡较矮脚黄鸡的遗传变异度大。     

矮脚黄鸡、兴义矮脚鸡血清蛋白多态性的比较研究

利用聚丙烯酰胺凝胶梯度电泳对贵州矮脚黄鸡、兴义矮脚鸡的血清前白蛋白(Pa)、白蛋白(Alb)、后白蛋白(Po)、运铁蛋白(Tf-1,Tf-2)5个位点多态性进行检测.结果表明:除Pa位点在矮脚黄鸡表现为单态,在兴义矮脚鸡表现为多态外,其它4个血清蛋白位点在两鸡种均具多态性,诸位点分别受2～3个(复)等位基因控制.Hardy-Weinberg平衡状态检测结果表明,两群体的Tf-1、Tf-2位点基因型频率都偏离了Hardy-Weinberg平衡状态.兴义矮脚鸡的有效等位基因数和期望杂合度(1.8792,0.4539)较大,矮脚黄鸡(1.7538,0.3772)较小,表明兴义矮脚鸡较矮脚黄鸡的遗传变异度大.     

北京油鸡与白莱航蛋鸡产蛋规律差异研究

试验旨在比较研究地方鸡与进口高产蛋鸡的产蛋规律,分析地方鸡产蛋性能低的原因.试验选用北京油鸡210只,白菜航纯系母鸡187R,观察两个品种各自在26周龄内的产蛋间隔时间和每天的产蛋高峰时间结果显示,在26周龄里,83.3%的白菜航蛋鸡的产蛋间隔分布在(25±1)h,而61.5%的北京油鸡分布在(26±1)h;74.1%的白莱航蛋鸡在每天9:30～13:30产蛋,48.4%的北京油鸡在8:30～12:30产蛋;6月龄白莱航血液中LH浓度极显著高于北京油鸡.研究表明,与进口蛋鸡相比,北京油鸡产蛋间隔时间长,产蛋时间分散,通过系统选育,有望显著提高地方鸡的产蛋性能.     

鸡黄胫基因BCDO2的多态性分析

本研究设计PCR-RFLP方法,检测了农大隐性白C系、白来航、北京油鸡、三黄鸡、丝羽乌骨鸡、寿光鸡、菊花鸡、茶花鸡8个品种的BCDO2基因多态性,其中农大C系、白来航、北京油鸡均为GG纯合型,茶花鸡表现为AA纯合型;而丝羽乌骨鸡、寿光鸡和菊花鸡等品种的BCDO2基因的杂合度分别为0.5、0.4、0.13;本试验所用的三黄鸡品系为培育品系,也存在一定的杂合度,研究结果说明黄皮肤基因在我国多个地方品种还没有进行过选择。本研究还检测了BCDO2基因在三黄鸡和农大隐性白C系鸡种背部皮肤的表达量,结果显示,三黄鸡的BCDO2基因表达量高于农大C系,推测BCDO2基因的表达对背部皮肤的颜色仍起着重要的作用,并认为鸡躯干部皮肤与胫部皮肤色素的不对称分布主要由不同部位皮肤的组织特点和类胡萝卜素的化学性质决定。     

陕北土鸡蛋与芦花鸡蛋中蛋清蛋白质比较分析

采用醋酸纤维薄膜电泳的方法,用考马斯亮蓝G250(CBB G250)染色,对陕北土鸡蛋与芦花鸡蛋的蛋清蛋白进行电泳分析.结果表明,陕北土鸡蛋蛋清与芦花鸡蛋蛋清中都含有7种蛋白质,它们的种类相同,但其相对含量稍有差异,从蛋白质组成及含量比较,两种鸡蛋的营养价值无大的差异.     

瓢鸡SLC24A5基因多态性与肤色性状的关联分析

利用DNA测序与PCR-RFLP方法,分析瓢鸡溶质载体24家族A5成员(SLC24A5)基因多态性,并与肤色性状进行了关联分析。结果表明,在SLC24A5基因第4外显子发现G482C多态位点,引起161位苏氨酸变为丝氨酸(T161S),建立了引入酶切位点的错配Nhe I PCR-RFLP分子标记,利用该标记对52只白肤色与44只黑肤色瓢鸡个体进行了基因分型。试验结果提示,SLC24A5 NheI PCR-RFLP标记与肤色性状具有显著的相关性(P0.05),G等位基因在白肤色群体和黑肤色群体均为优势基因,黑肤色群体的C等位基因频率显著高于白肤色群体。     

矮脚黄鸡与国内地方品种鸡配套生产的应用研究

选用浙江省宁波市振宁牧业有限公司育种中心携带有dw基因的纯系矮脚黄鸡K系公鸡为父本。以浙江省宁海县梅林镇当地鸡群选育而成的D系黄羽正常脚母鸡作为母本,先进行两系杂交,后分别用国内4个地方的不同品种L系、G系、H系、X系为第二父本。同KD母鸡进行三系配套杂交。通过对商品代的质量性状和数量性状的观察和测定,筛选出符合当地的配套模式。     

京海黄鸡POU1F1基因多态性及其与生长性能的遗传效应分析

采用PCR-SSCP和DNA测序技术检测POU1F1基因在京海黄鸡中的单核苷酸多态性(SNPs),并对不同基因型与京海黄鸡生长性能的相关性进行了分析.结果表明:在POU1F1基因第三外显子第5 231 bp位置有A→T碱基的点突变,在京海黄鸡群体中检测到AA、AB、BB 3种基因型,A等位基因的频率为0.500,B等位基因的频率为0.500.基因型与生长性能的关联分析得知:POU1F1基因不同基因型显著影响京海黄鸡各周龄体重,AB型显著高于从型和BB型(P<0.01).因此,推测POU1F1基因可能是影响鸡生长性状的主效基因或与主效基因紧密连锁的标记基因,并且能够在分子标记辅助选择中用于对鸡生长性状的遗传改良和固定.