绵羊精浆蛋白质组2-DE图谱的构建及初步分析

本研究比较了丙酮沉淀法制备蛋白质不同上样量对绵羊精浆蛋白质二维电泳图谱的影响。结果显示,精浆总蛋白经SDS-PAGE电泳,得到分子质量在14.4~116 ku的28条蛋白质条带。二维电泳图经PDQuest 8.0分析,上样量为0.8、1.0、1.2 mg时检测出的蛋白质点分别为207±10、281±13和374±16个,分子质量基本分布在20~80 ku、等电点为4~9的区域内,随着上样量的增加,分子质量在20~80 ku的蛋白质点明显增多,但每个分子质量区间的蛋白质点所占的比率较为恒定。研究结果表明,采丙酮沉淀制备精浆蛋白结合合适的上样量能够建立绵羊精浆全蛋白质图谱,为进一步研究绵羊精浆蛋白质组学奠定基础。     

母乳蛋白质组研究进展

母乳是人类及所有哺乳动物生命最初阶段的唯一食物,乳蛋白质是乳中最重要的营养物质,近年来随着蛋白质组学技术的发展及其在乳蛋白质研究中的应用,人类对乳蛋白质的组成、分泌调控及其中的过敏蛋白原等的认识越来越深入.本文对蛋白质组学在乳蛋白质的全面鉴定、乳蛋白质分泌调控以及乳中过敏原分析鉴定方面的研究策略和进展进行综述,以提高人类对乳蛋白质组相关生物学过程的认识.     

蛋白质组学及蛋白质翻译后修饰在畜牧领域中的应用研究进展

蛋白质组学是一门全方位研究生命结构功能、生理功能及生命活动规律的新兴学科,已成为后基因组时代研究的重要内容,在很多领域得到广泛关注,同时为畜牧科学的发展与创新提供了全新的研究思路和技术手段。目前,蛋白质组学在畜禽生长发育、繁殖、营养、疾病、肉质等方面均有涉及,并通过各种研究手段发掘出一批与畜禽重要经济性状相关的蛋白质,对生产有重要的理论指导意义。蛋白质翻译后修饰(post-translation modifications,PTMs)作为蛋白质组学研究的一个重要分支,在增加蛋白质多样性和进行复杂生理学调控过程中发挥着重要的作用,能更好地揭示生命现象的本质与规律。作者对蛋白质组学及PTMs在畜牧领域中的应用研究进展进行了综述。     

蛋白质组分析技术研究进展

蛋白质组学研究的核心技术是蛋白质成分的分离和鉴定。通过鉴定蛋白质组结构、功能及其各蛋白质间的相互作用关系,最终实现蛋白质组表达模式和功能模式的研究,其表达模式的鉴定技术主要有以质谱为核心的技术、蛋白质微测序和氨基酸组成分析等。了解肽和蛋白质的序列对理解其功能具有重要意义,测定其序列也是当前生命科学研究中的重要内容之一。质谱作为高灵敏度的测定分子结构的仪器,其高灵敏度、广泛的适用性及快速性等特性使它具有很大潜力,发展成为辅助传统测序方法的新方法,并得到了广泛的关注。     

基于2-DE结合质谱研究围产期奶牛血浆蛋白表达的变化

本试验旨在揭示奶牛围产期免疫功能下降的机理。采用二维凝胶电泳方法建立了分娩前第21天、分娩后第1和21天血浆蛋白表达图谱,SYPRO ruby染色后,ImageMaster 2D platinum 6.0软件匹配检测差异表达蛋白点,液相色谱串联质谱鉴定。结果表明:与分娩前第21天和分娩后第21天相比,分娩后第1天血浆中转甲状腺素蛋白表达量下调、而结合珠蛋白和α1酸性糖蛋白表达量上调;与分娩前第21天和分娩后第1天相比,分娩后第21天载脂蛋白A1表达量增加,这些表达变化的蛋白涉及急性期应答反应及运输和代谢等生物学功能。结果提示奶牛分娩后急性期蛋白表达量的增加可能与免疫功能下降相关。     

植物乳杆菌的生理功能和组学研究进展

植物乳杆菌是乳酸杆菌的一种,在自然界中广泛存在,尤其是各类发酵食品中。植物乳杆菌是人体肠道微生物的一员,由其生产的发酵食品的发酵作用与其对人体的益生作用使得植物乳杆菌逐渐成为基因组学、蛋白质组学、转录组学和代谢组学研究的模式微生物,阐明微生物环境适应性及发挥有益功能等的分子机制。本文综述了近年来植物乳杆菌的生理功能和组学研究进展,以期为研究者提供借鉴。     

紫花苜蓿多组学研究进展

紫花苜蓿是最重要的饲草作物之一,近几年其组学研究进展迅速,极大推动了紫花苜蓿品种的遗传改良和种质资源创新。随着高通量测序技术的发展,基因组拼接、比较基因组学、转录组学和表型组学等多组学研究日渐深入,在紫花苜蓿逆境响应机理探究、重要功能基因挖掘、优良性状选育等方面得到了广泛应用。综合阐述了紫花苜蓿基因组进化、基因家族鉴定、重要农艺性状功能基因挖掘、非生物胁迫分子响应机制和种子多光谱表型组学检测等方面的研究进展,并对未来苜蓿多组学研究的方向和热点作了展望。     

燕麦种子蛋白质组的GeLC-MS/MS分析

采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳结合液相色谱串联质谱方法(GeLC-MS/MS)对燕麦(Avena sativa L.)品种白燕2号种子不同溶解性的蛋白质进行分离鉴定,以期建立其种子蛋白质表达谱,为探讨干燥燕麦种子储藏及萌发的生理生化机理提供基础。结果表明:GeLC-MS/MS方法鉴定出溶解于超纯水、2.5%NaCl和70%乙醇的燕麦种子蛋白质分别为40,33和15个,共54个非冗余蛋白,其中29个蛋白至少可溶于2种溶剂。通过生物信息学软件对鉴定蛋白的分子功能、细胞组成和生物学功能进行预测,其中40个蛋白质功能得到明确的预测,涉及细胞过程、刺激应答及酶调节活性等12类。这些蛋白质与燕麦种子成熟干燥时期生命活动有关,为进一步从蛋白质水平探索燕麦种子生理代谢机理提供了理论依据。     

热休克蛋白70及其对精子影响作用的研究进展

分子伴侣是正常细胞和细胞损伤不同阶段蛋白质动态平衡的关键决定因素,热休克蛋白70(HSP70)是普遍存在的分子伴侣,具有多种细胞功能.伴侣蛋白通过利用各种独特的机制来维持细胞中正确的蛋白质折叠,以防止分子间的异常相互作用,防止蛋白质聚集以及蛋白质重折叠等,且HSP70在细胞中与辅助伴侣蛋白协同互作,这些辅助伴侣蛋白由J...     

蛋白质组学研究进展

人类基因组草图2001年的正式发表和2003年4月的最终完成。基于基因组学本身的局限性,它不能回答诸如:蛋白质的表达水平和表达时间,翻译后修饰,蛋白质和蛋白     

蛋白质组学研究方法及应用的研究进展

蛋白质是细胞生理功能的具体执行者,并常以蛋白复合体或与核酸相互作用的形式来发挥作用。蛋白质组代表在一定时间和特定条件下,1个细胞、组织或生物个体所表达的全部蛋白,因此蛋白质组会随着时间和空间的改变而发生动态变化。蛋白质组学从整体水平研究蛋白质组的结构、功能、表达模式及其相互作用的方式。根据研究内容的不同,蛋白质组学可分为表达蛋白质组学、结构蛋白质组学和功能蛋白质组学等。研究蛋白质组学有助于了解蛋白的结构、细胞的功能、生命的本质及活动规律,为疾病的诊断、治疗、疫苗及新药开发提供科学依据。研究蛋白质组学的常用手段主要有：双向聚丙烯酰胺凝胶电泳、质谱、酵母双杂交系统及蛋白芯片法等,文章将对蛋白质组学常用的技术方法及应用进行综述。     

基于蛋白质组学分析羊乳、牛乳和人乳的蛋白质功能特性

为进一步了解羊乳、牛乳和人乳3种乳样蛋白质相关信息,对其基本成分进行测定,并通过蛋白质组学技术对所含蛋白质进行生物信息学分析.结果表明:羊乳和牛乳的蛋白质含量高于人乳,人乳的脂肪和乳糖含量较高;3种乳中共鉴定出3370种蛋白质,乳中蛋白质的生物过程主要集中在细胞和代谢过程,细胞定位主要分布在腔体和细胞器上,分子功能表现...     

乳脂肪甘油三酯测定与分析方法研究进展

脂类是极其复杂多样的生物分子,仅已报道的乳脂肪甘油三酯（triacylglycerol,TAG）就达400多种,其中,乳脂中含量高于1%的近60种。目前液相色谱—质谱联用技术（liquid chromatography-mass spectrometry,LC-MS）是分离和鉴定TAG分子的主要手段,分离技术有反相高效液相色谱（reversed-phase high-performance liquid chromatography,RP-HPLC）、银离子高效液相色谱（silver ion high-performance liquid chromatography,Ag⁺-HPLC）、二维高效液相色谱（two-dimensional high-performance liquid chromatography,2D-HPLC）和超临界流体色谱（supercritical fluid chromatography,SFC）,分子电离常用电喷雾电离（electrospray ionization,ESI）和大气压化学电离（atmospheric pressure chemical ionization,APCI）。质谱分析可以确定分子量和脂肪酸位置,但分子异构体鉴定仍面临挑战。我国针对牛、山羊、马、骆驼、牦牛和水牛等家畜的TAG缺乏系统研究。TAG谱的建立不仅可以评价乳脂肪的营养特征,指导饲养方式科学改进,也有助于建立物种、饲养方式、产地和加工方式的鉴定模型。对乳脂肪甘油三酯测定与分析方法的研究进展进行综述,以期为乳制品质量控制以及食品完整性和真实性鉴定提供理论依据。     

过滤器辅助样品前处理法测定乳脂肪球膜蛋白质的研究

牛乳是世界上消费最广泛的乳类,并为消费者提供必需的营养物质。牛乳包括蛋白质,脂肪,糖类,维生素和矿物质。蛋白质是牛乳的重要组成部分,包括酪蛋白、乳清蛋白及乳脂肪球膜蛋白质。牛乳乳脂肪球被乳脂肪球膜覆盖,乳脂肪球膜是一个含有3层膜的膜结构,其上附着或者包含蛋白质。近些年来,对于乳中蛋白质的鉴定成为新的研究热点。随着蛋白质组学技术的发展,鉴定出的蛋白质的种类和数量都在增加。但是由于乳脂肪球膜的特殊性质,在牛乳乳脂肪球膜蛋白质的鉴定中,缺乏方便快捷及效果好的方法。作者运用过滤器辅助样品前处理法（FASP）结合纳升液相质谱（NanoLC-MS/MS）测定牛乳乳脂肪球膜蛋白质的种类和数量,共鉴别出169种蛋白质,是目前鉴别数量最大的一种方法。此方法的建立为今后乳脂肪球膜蛋白质研究领域提供一种方便快捷准确的试验工具。     

Identification of serum protein markers for early diagnosis of pregnancy in buffalo

Improper or delayed pregnancy diagnosis has significant impact over animal production, particularly in buffaloes which inherently suffer from several reproductive inefficiencies. Thus the present study has undertaken to identify serum protein markers pertaining to early pregnancy diagnosis in buffaloes. Serum samples were collected from 10 pregnant Murrah Buffalo heifers at weekly intervals from days 0‐35 post‐artificial insemination and from 12 inseminated non‐pregnant cyclic buffalo heifers on days 0, 7, 14 and 21. Two‐dimensional gel electrophoresis and densitometric analysis revealed the presence of five protein spots showing average density fold change of ≥4 during early pregnancy. Mass spectrometry analysis identified these up‐regulated proteins as anti‐testosterone antibody light chain, apolipoprotein A‐II precursor, serum amyloid A, cytokeratin type II, component IV isoform 1, which are have established roles in embryogenesis, but over‐expression of the fifth identified protein immunoglobulin lambda light chain in pregnancy has been elucidated as a novel finding in the current study. Further, with bioinformatics analysis, potential antigenic B‐cell epitopes were predicted for all these five proteins. An antibody cocktail‐based approach involving antibodies against all these five up‐regulated entire proteins or their epitopes could be developed for early detection of pregnancy in buffaloes. © 2016 Japanese Society of Animal Science     

亲水作用色谱－电喷雾串联质谱法测定生鲜牛乳及奶粉中的双氰胺

建立了检测生鲜牛乳及奶粉中双氰胺的亲水作用色谱-电喷雾串联质谱(HILIC-ESI-MS/MS)分析方法.样品经乙腈提取后经亲水作用色谱柱分离,电喷雾串联四级杆质谱检测.结果显示,双氰胺标准曲线在0.5～100μg/L浓度范围内线性良好.相关系数(r)大于0.99;在5～50μg/kg添加水平下,回收率在80.1％～88.2％之间,相对标准偏差(RSD)均小于10％(n=6);方法操作简便、灵敏度高,适用于生鲜牛乳及奶粉中双氰胺的筛查及确证分析.     

Proteome changes in renal cortex and medulla induced by dietary supplementation with inulin‐type fructans in growing pigs

The aim of the study was to evaluate the influence of dietary supplementation with inulin extract from chicory root and dried chicory root on the protein profile of the renal cortex and medulla of growing pigs. The experiment was carried out on renal cortex and medulla tissue collected from 24 50‐day‐old PIC x Penarlan P76 crossbred piglets (males). Animals were divided into three dietary groups (n = 8) and fed with a control diet, diet supplemented with 2% inulin extract from chicory root and a diet supplemented with 4% dried chicory root. Kidney samples were collected after 40 days of feeding, and renal cortex and medulla proteins were separated by two‐dimensional electrophoresis. Protein identification was performed using MALDI‐TOF mass spectrometry. The diet supplemented with 2% chicory inulin induced significant expression changes of 20 and 26 protein spots in the renal cortex and medulla respectively. Supplementation with 4% dried chicory root triggered changes in the expression of 44 and 24 proteins in the renal cortex and medulla respectively. Both forms of chicory inulin‐type fructans effectively affected the expression of proteins involved in energy metabolism, heat shock proteins and other chaperones, cytoskeletal and cytoskeleton‐related proteins, as well as other proteins. Additionally, changes in transferrin abundance in both experimental groups suggested the significance of chicory fructan supplementation for iron absorption and bioavailability. In conclusion, 2% inulin extract from chicory root and 4% dried chicory root exerted a similar effect on changes in renal protein expression; however, more pronounced alterations were induced by dried chicory root. Nevertheless, further studies are needed for better understanding the mechanism underlying the effect of chicory inulin‐type fructans and their fermentation end products on the kidneys of growing pigs.     

超高效液相色谱-串联质谱法测定牛乳、发酵乳和乳粉中四环素类药物残留

建立超高效液相色谱-串联质谱法同时检测牛乳、发酵乳和乳粉3 种基质中4 种四环素类药物残留的检测方法。对前处理方法和仪器上机条件进行研究。以EDTA-Mcllvaine缓冲液进行提取,经HLB固相萃取柱净化,甲醇-乙酸乙酯（1∶9,V/V）洗脱,氮吹后复溶,采用电喷雾离子源正离子模式、多反应监测模式进行检测。结果表明：乳粉中四环素、土霉素、金霉素和强力霉素的定量限均为10 μg/kg;液态乳和发酵乳中4 种药物的定量限均为2 μg/kg;四环素类药物添加量为2～100 μg/kg时,回收率为63.1%～1     

蛋白质组学及其在兽医学中的应用

蛋白质组学以蛋白质组为研究对象,从整体上对生命载体进行研究,已成为后基因组时代的研究热点。目前,蛋白质组学技术主要包括双向凝胶电泳、生物质谱及生物信息学。双向凝胶电泳根据蛋白质的等电点和分子质量分离蛋白质,而质谱技术已成为鉴定蛋白质的极为灵敏而迅速的工具。由此得到的肽质量图谱结合准确全面的数据库技术,就使得新的蛋白质或多肽得以鉴定。近年来,蛋白质组研究技术已应用到多种生命科学领域中,在兽医学研究领域中尤其是兽药开发方面也将会有很广阔的应用前景。     

高效液相色谱-串联质谱法快速测定乳与乳粉中20种同化激素

建立了液相色谱-电喷雾串联质谱同时测定乳与乳粉中11种甾类和9种β-受体激动剂类同化激素的快速确证方法.样品经体积分数0.1％甲酸乙腈溶液提取,正己烷脱脂,HLB固相萃取柱净化后,以0.1％甲酸甲醇-0.1％甲酸水为流动相梯度洗脱,通过C8色谱柱分离,电喷雾正离子多反应监测模式检测.在优化条件下,20种目标物在0.05～50 μg/L范围内线性良好,相关系数均大于0.996;方法定量限(RSN=10)在0.1～1.0 μg/kg之间;不同添加水平回收率为52.8％～97.4％,相对标准偏差(n=6)为2.8％～9.6％.多种市售纯牛奶和乳粉的测定结果表明,该方法操作简单、测定结果准确,可用于乳与乳粉中甾类和β-受体激动剂类激素多残留的快速测定.