FSH通过激活ERK1/2调节仔猪睾丸支持细胞GDNF的表达

以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为研究对象，研究了FSH对GDNF蛋白的调节及其信号传导机制。结果显示：（1）外源性FSH以浓度和时间依赖性促进GDNF蛋白表达：FSH浓度为50ng／mL、作用1h时，GDNF水平达到最高；（2）用FSH（50ng／mL）或dbcAMP（100μmol／L）处理支持细胞，可迅速激活MEK激酶，随FSH刺激时间的延长，ERK1／2活性逐渐升高（0～2h）；（3）MEK1／2的抑制剂U0126可显著抑制FSH对GDNF的激活作用。结果表明，FSH在诱导GDNF蛋白表达的过程中，通过cAMP-PKA-ERK1／2级联通路，促进GDNF基因的表达。     

猪细小病毒在PK细胞中的增殖过程

将猪细小病毒南京毒株1（NJ-1）、南京毒株2（NJ-2）和7909毒株接种于PK-15细胞，用免疫荧光检测方法研究了猪细小病毒增殖的基本特性与规律。在PK-15细胞中，3个毒株的增殖规律基本相似，均在感染后12h即可检测到荧光，表明其子代病毒粒子产生，随后逐渐增多，在感染后48h荧光几乎遍布所有细胞，随后荧光开始衰减，在84h时病毒引起细胞大面积崩解，荧光呈现岛屿状分布。通过绘制其一步法生长曲线可知，在病毒感染后12h，细胞培养液中的病毒TCID50／ml。为2．0左右，随后逐渐增高，感染后60h3种毒株的TCID50／mL均达到最高，子代病毒粒子向细胞外释放也达到高峰，其后TCID50逐渐下降。培养液中病毒粒子的丰寿期为7h。     

大豆黄酮和染料木素对体外培养奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响

通过体外细胞培养的方法探讨大豆黄酮（Daidzein,Da）和染料木素（Genistein,Ge）对奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平的影响。试验分空白对照组、10ng／mL雌二醇（Ez）组、不同浓度Da和Ge（1、10、100、1000ng／mL）组,培养72h后,采用MTT法检测细胞增殖情况。结果表明,10、100ng／mLGe组和100、1000ng／mLDa组同空白对照组比较可显著促进奶牛乳腺上皮细胞的增殖（P〈0．05）,但均显著低于E2组（P〈0．05）。另取处于对数生长期的乳腺上皮细胞加入不同浓度Da和Ge（1、10、100、1000ng／mL）继续培养24h,检测细胞培养液中总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—PX）活性、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量。结果表明,100、1000ng／mLDa组及100、1000ng／mL Ge组较空白组显著提高了T—SOD活性（P〈0．05）,显著降低了MDA含量（P〈0．05）;100、1000ng／mL Da组及10、100、1000ng／mL Ge组显著提高了NO含量（P〈0．05）;1000ng／mL Da组及100、1000ng／mL Ge组显著提高了GSH—PX活性（P〈0．05）。可见,Da和Ge在一定浓度范围内均有促进奶牛乳腺上皮细胞增殖及抗氧化水平提高的作用。     

瘦蛋白对体外培养的新生牛脂肪细胞Ob-Rb mRNA表达的影响

取单层生长良好的脂肪细胞，采用单因素试验，分别添加浓度为5ng／mL外源牛重组瘦蛋白（每12h添加1次）不添加作为对照至4、12、24、36、48和72h后提取总RNA，每个处理3个重复（孔），应用竞争RT-PCR法检测外源瘦蛋白对初生犊牛脂肪细胞Leptin长型受体（Ob—Rb）表达水平的影响，结果与对照组相比在12～24h内随着培养时间的增加，脂肪细胞Ob—Rb表达水平量亦显著增加（P〈0．01），之后其表达量逐渐回降，在48～72h趋于平稳（P〉0．05）。结果表明，在一定时间内瘦蛋白可提高体外培养的新生牛脂肪细胞Ob-Rb mRNA的表达水平。     

胸腺九肽对鸡脾淋巴细胞增殖转化及IL-2基因表达与分泌的影响

采用MTT比色法、相对半定量RT-PCR法和放射免疫测定（RIA）法研究了不同浓度的胸腺九肽对离体培养的鸡脾淋巴细胞增殖转化、IL-2基因表达与分泌的影响。结果表明，用10ng／mL和lng／mL胸腺九肽处理鸡脾淋巴细胞8h后，能显著增加由ConA诱导的淋巴细胞增殖转化反应，显著提高IL-2基因的表达水平以及细胞培养上清液中的IL-2含量（P〈0．05）；100ng／mL的胸腺九肽虽有增强脾淋巴细胞增殖转化反应以及提高IL-2基因表达和分泌能力的趋势，但与对照组无显著差异（P〉0．05）。提示，胸腺九肽能增强鸡脾淋巴细胞的增殖转化反应，并主要在基因转录水平上促进IL-2的合成与分泌，其作用与弃3量大小有关。     

EGF和IGF-I对绵羊卵母细胞体外成熟和卵裂的影响

本文研究了EGF、IGF-I以及EGF和IGF-I联合对绵羊卵母细胞体外成熟和卵裂的影响,以确立绵羊卵母细胞体外成熟的最佳条件。结果表明：50ng／mL的EGF的成熟率和卵裂率分别为71．2％和45．5％,显著高于对照组和10、20、30、40ng／mL组（P〈0．05）,当EGF浓度达到100ng／mL时,成熟率和卵裂率最高,分别为72．9％和45．7％;40ng／mL IGF-1的成熟率和卵裂率分别为70．7％和58．5％,显著高于对照组和10、20、60、80、100ng／mL组（P〈0．05）,当IGF-I的浓度为100ng／mL时,成熟率和卵裂率最低,分别为38．8％和20．0％,与对照组和其它各试验组差异显著（P〈0．05）;50ng／mLEGF和40ng／mLIGF-I联合使用,成熟率和卵裂率分别为85．6％和61．0％,同对照组和50ng／mLEGF组、40ng／mLIGF-I组之间差异显著（P〈0．05）。     

FSH调节仔猪睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制

本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制.以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过加入不同信号通路因子,采用RT-PCR和Western blot等方法研究了FSH对支持细胞GDNF表达的调节.结果:(1)FSH(50 ng· mL-1)处理支持细胞,可迅速激活MEK激酶,随着FSH刺激时间的延长,ERKl/2活性逐渐升高(0～30 min)；(2)dbcAMP(100 μmol·L-1)同样能迅速激活MEK激酶,诱导GDNF蛋白、mRNA的表达；ERK1/2活性随dbcAMP刺激时间的延长逐渐升高(0～30 min)；(3)加入MEK1/2的抑制剂U0126和PKA的抑制剂H89,则显著抑制了FSH对GDNF的激活作用,GDNF蛋白、mRNA和活性明显下降；(4)加入PKA的抑制剂H89(10 μmol·L-1),则明显抑制了FSH诱导的ERK1/2磷酸化的激活作用.结果表明,FSH可通过cAMP-PKA激活ERK级联调节支持细胞GDNF的表达.     

FSH通过cAMP、Ca~(2+)调节仔猪睾丸支持细胞的增殖

本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞增殖的机制。试验以2～3周龄的仔猪睾丸支持细胞为实验材料,采用体外培养模型,通过细胞数量检测、ELISA和Western blot等方法研究FSH对睾丸支持细胞的调节作用。试验结果如下:(1)在0～50ng·mL-1内,随着FSH浓度的增加,睾丸支持细胞数量呈增加的趋势(P0.05);当浓度为50ng·mL-1时,FSH促增殖作用最明显;细胞内cAMP的浓度也随着FSH的浓度而增加(P0.05);(2)FSH作用后5min内就激活了ERK1/2级联反应,在48h内,ERK1/2的激活有一定的周期性;加入ERK1/2的抑制剂PD98059和U0126明显的降低了FSH诱导的睾丸支持细胞的增殖和PCNA的表达(P0.05);(3)加入FSH和Forskolin增强了细胞的增殖和ERK1/2的激活(P0.05);而加入Rp-cAMP则明显降低了FSH诱导的细胞增殖和ERK1/2的激活(P0.05);L-Ca2+通道抑制剂Verapamil抑制了细胞的增殖和ERK1/2的激活;Rp-cAMP与Verapamil共同作用强于单独作用,表现出一定的协同效应(P0.05)。结果表明,FSH通过cAMP、Ca2+激活ERK1/2,并通过ERK1/2调节PCNA的表达进而调节支持细胞的增殖。     

生物素对肉仔鸡脾脏细胞PCNA基因的mRNA表达的影响

采用分子生物学方法研究了生物素对脾脏细胞增殖细胞核抗原（PCNA）基因的mRNA表达的影响。将60只1日龄AA雄性肉仔鸡随机分成3个处理，每个处理20只鸡，基础日粮为小麦-酪蛋白-鱼粉型日粮，在基础日粮中分别添加0．30mg／kg和2．7mg／kg2个水平的生物素，包括对照组共计3种日粮处理，为了刺激PCNA基因表达产物mRNA的表达，在48日龄采用皮下注射方式定量接种禽流感疫苗。结果表明：添加生物素显著提高了脾脏细胞PCNA基因表达产物mRNA的表达量（P〈0．01），其中2．7mg／kg处理组极显著高于对照组和0．3mg／kg处理组（P〈O．01），0．3mg／kg处理组和对照组之间无显著性差异（P〉0．05），由此推断，生物素通过促进脾脏细胞PCNA基因的mRNA表达，进而促进脾脏细胞的增殖。     

麦冬水提物对猫肾细胞的影响研究

麦冬是我国传统中药之一,兼备保健和治疗作用。为了探究麦冬能否应用在宠物食品中,本试验以不同浓度的麦冬水提物(3.91 ～8000 μg/mL)为受试药物,从细胞的形态、增殖、凋亡及周期4个方面对猫肾细胞(F81)进行安全性评价。结果表明：在试验浓度范围内,麦冬水提物没有抑制F81的增殖,且在3.91～62.5 μg/mL的浓度范围内,凋亡及周期结果经统计学分析均无显著性差异,与对照组接近,且细胞形态良好。说明在一定浓度范围内,麦冬水提物对F81细胞无毒害作用。     

干细胞研究的新进展

近年来 ,干细胞因其自身的许多特性成为生命科学的研究热点。干细胞能够自我更新和多向分化的生物学特性 ,具有重要的医学价值 ,在基因治疗、组织工程学、药学研究等许多领域都具有广泛的应用。而且干细胞的研究对于科学家重新认识细胞生长、分化、生物发育机制等基本生命规律也将起到重大作用。虽然干细胞的研究已取得许多重大的研究进展 ,并展现出诱人的应用前景 ,但仍存在不少技术难题有待于进一步的研究。文章就干细胞的概念、特性、主要研究领域的最新进展、研究存在的问题及其应用前景作一概述     

鸡视网膜移动性无长突细胞的分布

利用Nissl染色、视神经溃变试验和计算机图像处理的方法，研究了30日龄鸡（P30）视网膜移动性无长突细胞（displace damacrine     

奶牛子宫内膜细胞体外培养及应用研究概况

子宫内膜细胞体外培养技术在研究动物子宫内膜生理功能、繁殖障碍疾病机制及治疗药物筛选等过程中具有重要的作用和意义。论文就国内外有关奶牛子宫内膜细胞体外培养技术中常用的分离、纯化和鉴定等方法以及该细胞体外模型相关应用进行综述,为探索简便、高效的奶牛子宫内膜细胞体外培养方法及国内有关奶牛子宫内膜生理病理的分子细胞学研究提供参考。     

北京鸭视网膜节细胞层细胞的分布

利用 Nissl染色和计算机图像处理的方法 ,研究了 3 0日龄北京鸭 (P3 0 )视网膜节细胞层 (ganglion cell layer,GCL )细胞的形态大小、数量和密度分布。结果表明 ,北京鸭视网膜节细胞层细胞形态多样 ,有圆形、椭圆形和多角形等。不同区域细胞大小差异显著 ,由视网膜中央区向周边部逐渐增大 (CA为 (53 .3 2± 2 0 .53 )μm2 ;NP 为 89.73± 53 .0 1 μm2 ;TP 为1 4 8.71± 86.2 1 μm2 )。细胞数量分布很不均匀 ,在视网膜中央有一个高密度区即中央高密度区(CA约为为 1 0 660个 / mm2 ) ,且由视网膜中央部向视网膜周边部细胞密度逐渐降低 (TP约为53 40个 / mm2 ;NP约为 583 0个 / mm2 )。可见 ,节细胞层细胞由中央区至周边部由小至大递增而细胞密度梯度呈现递减的变化     

异荭草素抗肿瘤药理作用及其机制的研究

异荭草素是从植物中提取的含有黄酮类活性成分的化合物。研究表明,异荭草素具有多种药理作用,不仅可以抗氧化、抗炎、抗病毒,还具有良好的抗肿瘤活性。异荭草素可通过干扰肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、调控活性氧水平、诱导肿瘤细胞自噬、阻碍肿瘤细胞浸润和转移等途径发挥抗肿瘤作用。现将异荭草素的抗肿瘤作用及其机制的相关研究进展进行综述。     

野牦牛成纤维细胞的分离培养与传代

为了提高野牦牛成纤维细胞分离培养效果,研究了组织保存方法、原代培养方法、培养液类型、添加细胞生长因子和冷冻保存液配方对野牦牛体细胞分离培养与传代的作用。结果表明,PBS、D/F12和TCM199适合野牦牛皮肤组织的保存,D/F12和TCM199培养液适合组织块培养,组织块成活率达到（86.29±4.62）%,组织块法适合野牦牛成纤维细胞的原代培养;D/F12培养液培养野牦牛成纤维细胞效果较好,群体倍增时间和平台期密度分别为38.47 h和2.075×10⁶/mL,正常二倍体核型百分率为84.33%;表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞因子（bFGF）产生了较明显的促增殖作用,平台期细胞密度明显增加;2种冷冻保存液（D/F12添加胎牛血清和二甲亚砜及胎牛血清添加二甲亚砜）均能用于野牦牛细胞冷冻,细胞存活率分别是87.33%和89.00%。     

动物体细胞克隆技术的研究进展

体细胞克隆绵羊“多莉”(Dolly)的诞生,表明成年哺乳动物体细胞具有基因组的全能性。本文从“多莉”诞生的背景、体细胞克隆技术的研究现状、体细胞核移植过程中的核质互作、该技术目前存在的问题及其在制作转基因动物上的应用等方面,概述了体细胞克隆技术的研究进展。     

干细胞培养定向分化的研究进展

在广泛文献检索的基础上,笔者综述了干细胞分类、分型及诱导定向分化,并探讨了细胞定向分化机理,为组织器官的替代治疗提供参考.     

三株BHK-21悬浮细胞培养特性比较

为了筛选出适应于口蹄疫疫苗生产的最佳细胞株,用自制的GMEM培养基,以30mL/L血清浓度,在同等条件下比较了3种不同来源的BHK-21悬浮细胞培养特性。结果显示,这3种细胞在形态上无明显的差异,在显微镜下不易区分;在培养过程中,BHK-21-L细胞株在最短时间内可达到最大培养密度,细胞生长速度快,细胞活性较高,DNA合成旺盛;BHK-21C13-2P细胞株最大密度较低,在72h~96h被完全阻止在G0/G1,放大比例较小,为1∶1.5~1∶2;BHK-21-B细胞在72h~96h停止增殖,可放大较大比例,但易出现细胞结团、易贴壁的现象,影响细胞的增殖。可见,BHK-21-L细胞是生产口蹄疫疫苗可供选择的最佳细胞株。