雷公藤叶片基因组DNA不同提取方法比较

[目的]比较雷公藤叶片中基因组DNA的提取方法。[方法]采用常规CTAB法、改良CTAB法、常规SDS法、高盐低pH值法和一步法分别提取雷公藤叶片基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法测定样品OD260与OD280的比值以及RAPD扩增结果,判断所得DNA样品的纯度,并根据OD260值计算不同提取方法的DNA得率。[结果]改良CTAB法提取效果最佳,所提DNA的平均得率为219.3μg/g,OD260/OD280比值在1.869～1.903,用于RAPD-PCR均有较好的扩增结果。[结论]改良CTAB法是雷公藤叶片基因组DNA提取的最佳方法。     

四倍体菘蓝基因组DNA提取方法的比较

[目的]探讨四倍体菘蓝组培苗高质量DNA的提取方法。[方法]分别采用CTAB法1、CTAB法2、SDS法1、SDS法2和碱裂解法对四倍体菘蓝组培苗DNA进行提取试验,通过紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳,比较了5种DNA提取方法对四倍体菘蓝组培苗的提取效果。[结果]CTAB法2提取DNA的OD260/OD230值为2.311,OD260/OD280值为1.774,DNA纯度最大,浓度最大,提取率最高,PCR扩增条带清晰,重复性好,所得DNA的质量最好。[结论]CTAB法2是提取四倍体菘蓝组培苗基因组DNA最有效的方法。     

凉粉草基因组DNA提取与分析

[目的]为分子生物学研究提供高质量、高产量的凉粉草总DNA。[方法]采用改良CTAB法提取总DNA,通过测定OD260/OD280值、琼脂糖凝胶电泳和RAPD扩增对所得DNA的浓度和质量进行检测,考察该方法对DNA的提取效果。[结果]改良CTAB法提取的总DNAOD260/OD280值为1.6～2.0;电泳条带清晰,完整性好,纯度高,总DNA分子量与λDNA相近;以所提DNA为模板进行RAPD扩增时,可得到稳定的扩增条带。[结论]改良CTAB法适合凉粉草基因组DNA的提取。     

菜籽粕脱毒及菜籽蛋白分离的工艺研究

[目的]研究双低菜籽粕的蛋白提取工艺,为菜籽粕的开发利用提供理论指导。[方法]以脱毒后的双低菜籽粕为原料,采用单因素试验研究不同因素对菜籽蛋白提取率的影响,并采用响应面法对影响因素进行优化。[结果]单因素试验结果表明,菜籽粕蛋白最佳提取条件为：pH值13,温度40℃,料液比1∶12,提取时间40 min,提取次数3次。在此基础上用响应面法对pH值、提取温度和料液比的最佳水平做进一步研究和探讨,通过对二次多项回归方程求解得知,在自变量分别为pH值12.9、温度40.8℃、料液比为1∶12.6时,双低菜籽粕蛋白提取率最大预测值为57.73%。[结论]丙酮-乙醇溶液对菜籽粕具有一定脱毒效果,响应面法所得数学模型在预测各因素对菜籽蛋白提取率的影响上具有良好的指导性。     

番茄红素萃取工艺条件研究

[目的]确定番茄红素的提取工艺。[方法]采用正交试验,研究液料比、提取温度、提取时间及提取次数对番茄红素提取率的影响。[结果]乙酸乙酯的浸提效果最好,故选用乙酸乙酯作为浸提溶剂。随着液料比的升高,番茄红素提取率增加,当液料比大于4∶1(ml/g)时,色素提取率增加缓慢。当pH值小于6时,随着pH值的增大,色素提取率增加;当pH值大于6时,随着pH值的增大,色素提取率降低。各因素对番茄红素提取率的影响由大到小依次为:液料比>提取次数>提取时间>提取温度。[结论]番茄红素的最佳提取工艺为:液料比为4∶1(ml/g),提取时间50 min,提取温度45℃,提取次数3次,该条件下,番茄红素的提取率在85%以上。     

东北小油菜叶蛋白提取工艺的研究

[目的]主要研究不同提取条件对小油菜叶蛋白提取率的影响,确定小油菜叶蛋白提取的最佳工艺。[方法]以东北小油菜叶(干物)作为试验材料,分别利用凯式定氮法、索式抽提法和直接干燥法测定油菜叶中叶蛋白、粗脂肪和水分含量,研究不同pH值、提取温度、时间及料液比对叶蛋白提取率的影响。[结果]在pH值9,温度45℃,固液比1∶30,浸提时间1 h时,蛋白质提取率达88.20%。[结论]该研究确定了小油菜叶蛋白提取的最佳工艺,为当地小油菜天然叶蛋白生产的开发提供了科学依据。     

采用CTAB与SDS法提取白术DNA的研究

[目的]获取白术中高质量基因组DNA。[方法]选取新鲜白术叶片,破碎细胞壁,用经改良的CTAB与SDS法进行DNA分离纯化提取。[结果]改良CTAB法提取的DNA OD值为1.8～1.9,较改良SDS法的OD值(1.5～1.6)高。[结论]改良CTAB法提取的DNA浓度和纯度较高,可作为模板用于后续分子标记的研究。     

碱溶酸沉法提取银杏叶总黄酮

[目的]研究银杏叶总黄酮的碱溶酸沉法提取。[方法]采用碱溶酸沉法,对影响银杏叶总黄酮提取的pH值、固液比、提取温度和提取时间等因素进行系统研究。[结果]银杏叶总黄酮碱溶酸沉法的最佳提取工艺条件为:95℃时用40倍量pH值为10.0的NaOH溶液处理60 m in,酸沉pH值3.5,提取2次。[结论]在最佳提取工艺条件下,银杏叶总黄酮的提取率达到86.4%。     

不同方法提取土壤、活性污泥中总DNA的比较研究

试验目的在于研究土壤和活性污泥的最适DNA提取方法。采用9种不同的提取方法,对所提取DNA的浓度、纯度、提取率、片段大小、16SrDNA PCR结果进行了比较,结果表明,在土壤中,液氮研磨法提取DNA最优:DNA质量浓度为800mg/L,OD260/OD280为1.7。提取率为320μg/g;在活性污泥中,液氮浸泡法提取DNA最优:DNA质量浓度为1 485mg/L,OD260/OD280为1.59,提取率为594μg/g。     

复合酶法提取桑叶中多糖的工艺条件优化

[目的]采用复合酶法提取桑叶中多糖。[方法]通过单因素试验和正交试验研究了酶的浓度、酶作用的时间、酶作用的温度以及酶作用的pH值对桑叶粗多糖提取率的影响。[结果]通过复合酶法提高了桑叶多糖的提取率。[结论]提取的最佳工艺条件为：温度50℃、pH值为4.5、酶用量1.0%、提取时间1 h;提取桑叶多糖的收率可达14.32%。     

正交法优化提取苹果渣中果胶的工艺研究

[目的]研究苹果渣中果胶的提取工艺。[方法]通过酸水解乙醇沉淀法从苹果渣中提取苹果果胶,设计4因素3水平正交试验研究料水比、pH值、提取时间和温度等因素对果胶得率的影响,对酸解法提取苹果渣中果胶的最佳提取工艺进行优化,确定最佳的提取条件。[结果]结果表明,水解体系的料液比对果胶得率影响最大,其次是pH值、提取时间,最后是提取温度。最佳水解条件为：水解温度90℃,水解体系pH值2．0,水解时间90min,料液比1：12,果胶产率可达到9．25％。[结论]该研究结果为苹果渣的高效利用提供参考。     

苦参药材中总生物碱含量的测定

[目的]用酸性染料比色法测定不同产地苦参药材中总生物碱的含量。[方法]苦参总生物碱的浓度50%乙醇溶液,加一定pH值的缓冲溶液溴麝香草酚蓝指示液振摇后,氯仿萃取,萃取液于一定波长处测定吸光度A。[结果]氧化苦参碱检测浓度在0.013~0.026mg/ml范围内与吸光度线性关系良好(r=0.997 1)。用氧化苦参碱作为对照品,在pH值7.0的条件下加入2.0 ml的溴麝香草酚蓝溶液,在417 nm处有最大吸光度,该条件下可准确地测定苦参药材中总生物碱的含量。试验测得不同产地苦参药材中总生物碱含量差异较大,其中所购得的陕西、甘肃苦参药材中总生物碱含量较高,分别为1.801、1.778 mg/kg。[结论]该试验所采用的方法操作简便、准确,可通过总生物碱的含量客观全面地评价苦参药材的质量。     

正交试验法优化芍药基因组DNA CTAB法提取工艺

[目的]为芍药的杂交育种提供试验依据。[方法]通过正交试验,对利用芍药基因组DNA的CATB法提取工艺进行优化。[结果]CTAB法提取DNA的OD260/OD280为1.8~1.9,不同处理间差异较明显。除泳道c7电泳结果较差外,其他泳道DNA的完整性都相对较好。除c1c、2泳道RNA拖尾现象较严重外,c3、c4、c5c、6泳道脱尾现象均较轻微,而c8和c9电泳条带较为整齐。CTAB法提取芍药基因组DNA的最佳配方为:CTAB 0.75 g、NaCl 3 g、EDTA 2.5 mlT、ris-HCl 5 ml,pH值8.0。[结论]利用该CATB方法,可获得高纯度芍药DNA。     

异硫氰酸荧光素标记壳聚糖的研究

[目的]探究FITC和壳聚糖不同物料比对反应产物标记率和特性粘数的影响,并研究2种不同pH值下FITC-Chitosan吸收光谱和荧光光谱的变化。[方法]采用异硫氰酸荧光素对壳聚糖进行荧光标记,考查不同物料比时荧光素与壳聚糖的结合情况、产物的特性粘数以及标记物在pH值1.0、6.0的吸收光谱和荧光光谱。[结果]结果表明,物料比在小于0.5%时,标记物的特性粘数变化较小,适合用于标记壳聚糖;FITC-Chitosan在pH值1.0时可见吸收波长为438 nm,荧光激发波长440 nm,发射波长520 nm;在pH值6.0时可见吸收波长为488 nm,荧光激发波长493 nm,发射波长515 nm。[结论]该研究为FITC-Chitosan获得更深入的关注和更广泛的应用提供了试验依据。     

豆象干标本基因组DNA提取方法的改进

[目的]筛选豆象干标本基因组DNA的有效提取方法。[方法]以口岸截获时间不等的豆象干标本为材料,在传统方法上加以改进,对从干标本中提取豆象基因组DNA的方法进行了研究。将其所提取的基因组DNA的纯度和浓度与CTAB法和SDS法进行了比较,并对DNA进行了完整性及PCR验证。[结果]与CTAB法和SDS法相比,豆象干标本提取方法提取的DNA OD260/OD280值均在1.7~1.9,且浓度合适。DNA完整性及PCR验证结果表明,豆象干标本提取方法比较适合后续PCR试验的开展。[结论]豆象干标本提取方法适合该研究中豆象干标本基因组DNA的提取,可推广到检验检疫工作中截获豆象的检疫鉴定中,以缩短检验检疫工作周期,提高检验检疫工作准确性。     

双低油菜籽浓缩蛋白制备条件研究

[目的]研究更加合理的制备菜籽浓缩蛋白的方法。[方法]以乙醇溶液的浓度、pH值、液固比、洗涤次数、洗涤时间为影响因子,设计5因素4水平的正交试验制备浓缩蛋白。[结果]结果表明,浓缩蛋白最佳浸提条件为：在55℃水浴中,以pH值为4.5的70%乙醇溶液作为洗涤剂,控制液固比为8：1,洗涤7次,每次20 min。[结论]通过这种方法制备的浓缩蛋白中蛋白质的含量高达64.60%,植酸的含量为2.16%,且其中没有检测出单宁。     

NaOH水溶液提取穿心莲内酯工艺研究

[目的]探索低成本高含量的穿心莲内酯的提取工艺。[方法]以穿心莲茎叶为材料,粉碎后在不同pH值的NaOH溶液中,利用超声波法提取穿心莲内酯。测定了提取的浸膏中穿心莲内酯的含量和回收率。[结果]NaOH溶液的pH值为7.5时,穿心莲内酯浸膏的得率最低,为3.57%,浸膏中穿心莲内酯的含量最高,为9.5000%。当NaOH溶液的pH值为9.5时,穿心莲内酯浸膏的得率最高,为6.71%,浸膏中穿心莲内酯的含量最低,为0.0190%。该检测方法的平均回收率为99.9%。[结论]pH值为7.5的NaOH溶液中,超声波法提取的穿心莲内酯总量最多 在pH值为9.5的NaOH溶液中提取的穿心莲内酯总量最少。