八种药剂对节瓜炭疽病菌的毒力测定与田间防效

以节瓜品种"粤农"为试材,以节瓜炭疽病菌为防治对象,采用菌丝生长速率及农药田间药效试验方法,研究了8种药剂对节瓜炭疽病菌的室内毒力和田间防效,以期为海南节瓜炭疽病的防治提供参考依据。结果表明:代表菌株J-56与Colletotrichum gloeosporioides strain JX-1(HQ645079.1),Colletotrichum gloeosporioides isolate C16(KC010547.1)的ITS序列聚在同一分支上,同源性达99%,属于胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides。室内毒力测定中,50%咪鲜胺锰盐WP和250g·L-1嘧菌酯SC毒力较高,EC50分别为0.000 9、0.012 7μg·mL-1,其次为43%戊唑醇SC、40%多·福·溴菌腈WP、80%代森锰锌WP、70%甲基托布津WP和10%苯醚甲环唑WG,20%嘧霉胺WP的毒力最低,EC50为60.511 9μg·mL-1。大田试验中,43%戊唑醇SC和50%咪鲜胺锰盐WP 2个处理防效较高,为80.64%和78.16%,但与10%苯醚甲环唑WG、40%多·福·溴菌腈WP和250g·L-1嘧菌酯SC 5个处理间防效相当,差异不显著;20%嘧霉胺WP处理的防效最低。结合室内毒力和大田试验,生产上可使用43%戊唑醇SC、50%咪鲜胺盐锰WP、10%苯醚甲环唑WG、40%多·福·溴菌腈WP和250g·L-1嘧菌酯SC 5种药剂防治节瓜炭疽病。     

PEG介导枸杞内生真菌NQ8GⅡ4遗传转化及转化子评价

通过聚乙二醇（PEG）介导原生质体转化法将绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）表达载体转入枸杞内生轮状镰刀菌（Fusarium nematophilum）NQ8GⅡ4菌株中，通过生物学测定和PCR检测，获得与野生型NQ8GⅡ4菌株无明显差异的转化子57株，转化效率（单位质量的DNA转化子数）为2 850 株 • mg-1。通过遗传稳定性、表型、荧光性、拮抗性和致病性对比，获得1株与野生型NQ8GⅡ4菌株无差异的转化子。该转化体系的建立为枸杞内生真菌在宿主植物中的侵染定殖规律和生防作用研究奠定基础。     

氟啶胺和咯菌腈复配对草莓灰霉病菌的联合毒力及增效作用研究

为了明确氟啶胺和咯菌腈及其复配物对草莓灰霉病菌的室内毒力,研制新的防治草莓灰霉病药剂配方并明确其田间防效。采用生长速率法研究了氟啶胺、咯菌腈及其复配物对草莓灰霉病菌的室内毒力,以Wadley法进行增效作用评价,并验证该复配物对草莓灰霉病的田间防效。结果表明:氟啶胺和咯菌腈以质量比1∶5、3∶2复配对草莓灰霉病菌具有增效作用,其增效系数分别为1.82和2.07;氟啶胺和咯菌腈以质量比1∶1、1∶3、2∶3、2∶1、3∶1、4∶1复配对草莓灰霉病菌具有相加作用,但以质量比5∶1复配时,则表现拮抗作用;氟啶胺和咯菌腈以3∶2复配对草莓灰霉病的田间防效最高可达91.00%,比使用单一化学药剂效果好,而且比对照药剂高。综上,氟啶胺和咯菌腈及其复配物对草莓均无药害,且对草莓生长无影响;氟啶胺与咯菌腈以3∶2进行复配,可以在草莓生产上推广使用。     

东北油豆角腐皮镰孢菌根腐病拮抗芽胞杆菌的筛选与鉴定

以东北油豆角腐皮镰孢菌为靶标菌,采用室内平板对峙培养和温室防效测定方法,从发病油豆角根际(围)土壤中筛选拮抗能力强的芽胞杆菌菌株,以期获得腐皮镰孢菌根腐病的生防资源。结果表明:该试验筛选到一株拮抗芽胞杆菌WJ-126,初步鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),在温室人工接种条件下,该菌株对油豆角腐皮镰孢菌根腐病的相对防效可达60.92%。     

蜡蚧轮枝菌对西花蓟马成虫和若虫的毒力测定

利用蜡蚧轮枝菌MZ041024菌株的不同浓度孢子液对西花蓟马成虫和若虫进行室内毒力测定。结果表明:在3.6×10~8个/mL浓度下,蜡蚧轮枝菌MZ041024菌株对成虫的最高死亡率为(76.87±4.38)%,致死中浓度(4.140±0.10)×10~6个/mL,致死中时间为(5.54±0.22)d;若虫的最高死亡率为(80.95±1.71)%,致死中浓度(1.598±0.064)×10~5个/mL,致死中时间为(5.13±0.25)d,随浓度增加其杀虫速度加快,随处理时间延长其毒力增强。     

啶酰菌胺和咯菌腈复配对草莓灰霉病菌的室内毒力测定及田间防效

采用生长速率法测定了啶酰菌胺、咯菌腈及其复配物对草莓灰霉病菌的室内毒力,通过Wadley法进行增效作用评价,并验证了复配物对草莓灰霉病的田间防效。结果表明:啶酰菌胺和咯菌腈以质量比1∶1、5∶1、3∶1、2:1、3∶2复配对草莓灰霉病菌表现增效作用,以质量比1∶3、1∶4、1∶5、4∶1复配则表现相加作用。其中3∶1复配的增效作用最明显,增效系数为4.47,田间对草莓灰霉病的最佳防效可达74.40%。     

氟吡菌酰胺与啶菌噁唑混配对灰葡萄孢的联合毒力

采用菌丝生长速率法测定了氟吡菌酰胺与啶菌噁唑不同配比(质量比2∶1、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4)混配对灰葡萄孢XSZH1的联合毒力,以及最佳增效配比对XSHF6、XSHF2、17RC12和XSHF7等4株灰葡萄孢的联合毒力,并在田间验证了最佳组合对番茄灰霉病的防治效果。结果显示,氟吡菌酰胺与啶菌噁唑以质量比2∶1和1∶4混配时,对灰葡萄孢XSZH1具有毒力增效作用,前者的增效作用最明显,增效系数为1.69。氟吡菌酰胺与啶菌噁唑以质量比2∶1混配时对其他4株灰葡萄孢菌株也显示出毒力增效作用,且在田间有效剂量为150～250g·hm-2时,对番茄灰霉病的防治效果为80.50%～90.13%。可见氟吡菌酰胺与啶菌噁唑以质量比2∶1混配可以有效地控制番茄灰霉病,适合在田间应用推广。     

几种杀菌剂对裂褶菌的室内毒力测定

在室内培养条件下,采用生长速率法测定了6种杀菌剂单剂及复配对林木病原腐朽菌—裂褶菌的抑菌毒力。结果表明:药剂浓度与抑制作用呈显著的正相关关系,毒力回归方程的相关系数都在0.94以上;不同杀菌剂对裂褶菌的菌丝生长都表现出抑制作用,代森锰锌、退菌特、可杀得、多菌灵、石硫合剂和百菌清的EC50分别为33.79、41.20、441.93、475.231、430.34和4 117.42 mg/L;退菌特和代森锰锌按1∶3比例复配增效作用明显,按1∶1比例复配略有增效,按3∶1比例复配表现为相加作用。     

荧光假单胞菌YG-1与杀菌剂复配对番茄灰霉病的联合毒力

采用室内毒力测定方法,明确了8种化学杀菌剂和荧光假单胞菌YG-1对番茄灰霉病菌的毒力作用,并利用平板计数法测定8种杀菌剂与YG-1菌株的生物相容性,筛选生防菌株与杀菌剂复配的最佳配比,通过盆栽试验进一步验证荧光假单胞菌株YG-1与杀菌剂复配对番茄灰霉病的防治效果。研究结果表明,8种杀菌剂中啶酰菌胺和咯菌腈对番茄灰霉病菌的毒力作用较强,EC_(50)值分别为0.081、0.075 mg · L~(-1),其中啶酰菌胺与荧光假单胞菌YG-1菌株有较好的生物相容性。1.97 × 10~(8 )CFU · mL~(-1)荧光假单胞菌YG-1菌悬液与0.081 mg · L~(-1)啶酰菌胺复配最佳配比为体积比5∶5,对番茄灰霉病菌的毒性比率为1.411?2,表现为增效作用,且盆栽防治试验防效达到71.31%,极显著高于单剂防效。可见荧光假单胞菌YG-1与啶酰菌胺复配对番茄灰霉病菌的防治具有增效作用,同时啶酰菌胺的施用量降低了50%,有效减少了杀菌剂的使用量。     

黄瓜棒孢叶斑病菌的毒力分化及AFLP分析

以6个黄瓜品种(系)为试材,以来自山东、辽宁、黑龙江的200个黄瓜棒孢叶斑病菌为供试菌株,采用苗期接种鉴定及AFLP分子标记技术,研究了黄瓜棒孢叶斑病菌的毒力分化。结果表明:黄瓜棒孢叶斑病菌存在生理小种分化现象,并将200个菌株分为4个生理小种,初步筛选出D0330、D1306、D0649和D2025作为研究黄瓜棒孢叶斑病菌生理小种分化的鉴别寄主备选材料;AFLPs与菌株的地理来源无关,与毒力存在相关性。     

栗疫病菌的致病力分化

采用树皮下接种和打孔接种的方法,在板栗树苗和离体栗枝上测定了栗疫病菌的致病力。结果表明,两种接种方法测定病菌致病力比较一致;据此可将菌株分为强致病力和低致病力两类。对低致病力菌株分生孢子后代的不同培养型也进行了致病力测定,野生型单孢菌株的毒力明显比亲本型单孢菌株的强。讨论了低致病力菌株的毒力降低的原因。     

瓜枝孢弱毒菌株诱导黄瓜抗病相关基因表达的cDNA-AFLP 分析

 利用cDNA-AFLP 技术,分析瓜枝孢弱毒菌株诱导黄瓜苗后72 h 内抗病相关基因的差异表达。结果显示,诱导的基因表达差异始于接种后3 h,接种后6 h 差异表达片段总数达到高峰。8 个取样时间点的诱导性差异表达片段数大于抑制性表达片段数。仅在接种后第12 h 呈现相反趋势。通过回收、克隆、测序和同源性比对,获得的5 个片段分别与拟南芥中病原菌诱导的水杨酸糖基转移酶、梨磷脂酶C编码的基因等具有较高的同源性,初步推断瓜枝孢弱毒菌株诱导黄瓜抗病可能是通过依赖于水杨酸介导的信号传导途径诱导黄瓜的系统抗病性（system acquired resistance, SAR）,作为胁迫抗性信号传递中的关键酶——磷脂酶C 可能参与了上述过程。经Northern 杂交结果证实,克隆分离的DNA 差异片段是瓜枝孢弱毒菌株诱导表达的特异片段。     

原核表达的PRSV HC-Pro 基因同源dsRNA 诱导番木瓜抗性的研究

 利用番木瓜环斑病毒（PRSV）HC-Pro 基因3′端824 bp 区段,通过OZ-LIC 法构建了含有PDK 内含子的发夹RNA 编码结构,并选用pSP73 和M-Jm109LacY 分别作为宿主载体和宿主菌,构建了高效的同源dsRNA 原核表达工程菌M-Jm109LacY/pSP73-RNAi-H824,经IPTG 诱导表达的dsRNA 不被DNase I 和RNase A 降解,稳定性较好。采用喷洒dsRNA 粗制品的方式对番木瓜植株进行保护性处理和治疗性处理,症状观察及ELISA、Real-time RT-PCR 分析结果表明,保护性处理能有效诱发对番木瓜环斑病毒的抗性（发病率低,发病时间晚）;治疗性处理（植株已接种PRSV 25 d）能在处理初期引起番木瓜环斑病毒积累量发生短暂降低。     

生物间遗传学在梨品种与梨黑星菌相互作用中的应用研究

用生物间遗传学的原理和方法对8个梨黑星菌单孢分离物与10个梨品种相互作用进行了分析,结果表明：供试梨品种中至少含有6个抗梨黑星病基因。其中,鸭梨不含抗病基因,菊水梨只含1个抗病基因,金川梨、金花梨、苍溪梨可能分别含1～2、1～3、1～4个抗病基因,其余品种可能分别含有1～5或1～6个抗病基因;根据分离物与梨品种相互作用的抗感表现,可把8个梨黑星菌划分为5～6个不同的类型。     

野生型农杆菌Ti和Ri质粒对马铃薯的双转化研究

用不同的野生型根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）T37，B6，TFA16YE和发根农杆菌（Agrobacteriu．rhizogenes）TR105，15834，A4对马铃薯普通栽培种品种“甘农薯1号”的块茎圆片、茎段采用两步侵染法和一步侵染法进行了双转化实验。结果表明：两步侵染法效果较好，并得到了分化苗。试验证明，Ti和Ri质粒上的T-DNA可进入同一个受体细胞并进行表达，2种T-DNA上的不同激素在受体细胞中表达可以使受体细胞建立新的激素平衡，从而提高了转化细胞分化苗的能力，可以克服野生型农杆菌难以分化苗的缺点，为今后用野生型质粒作载体以及同时向一个受体细胞中转移多个基因打下了基础；此外不同菌种组合的效果不同，分化植株的形态差异也很大；试验还发现，T-DNA在整合到受体细胞染色体上时，可以引起某些基因发生突变。因此，今后只要用双转化法能使野生型农杆菌双转化的细胞分化出正常植株，则野生型农杆菌就可以作为一种重要的诱变源为育种提供较多的变异。     

番茄茉莉酸缺失突变体灰霉菌侵染响应miRNA及其表达分析

为揭示miRNA对番茄灰霉菌胁迫的响应机制，以番茄茉莉酸（JA）缺失突变体def1、spr2及其野生型（CM）为试验材料，构建了3个材料接种灰霉菌前后（0 h、48 h）2个时期的miRNA文库，并采用Illumina平台测序，对测序数据进行生物信息分析，结合实时荧光定量检测目的miRNA及其预测的靶基因表达情况。结果表明灰霉菌侵染番茄后，JA缺失突变体def1和spr2的病情指数显著高于CM，H2O2含量低于CM。高通量测序鉴定了130个已知miRNA和811个新miRNA。进一步筛选出8个保守miRNA（Sly-miR156e-3p、Sly-miR166c-5p、Sly-miR171f、Sly-miR172b、Sly-miR319a、Sly-miR390b-5p、Sly-miR399b、Sly-miR482d-5p），其在6个样本中表达模式各异。预测差异miRNA靶基因122个，结合qRT-PCR技术分析了8个miRNA和8个靶基因的表达情况，与高通量测序结果基本一致。推测Sly-miR156e-3p、Sly-miR390b-5p、Sly-miR399b、Sly-miR482d-5p通过依赖JA信号途径参与番茄对灰霉病的抗性。     

烟草花叶病毒山西番茄分离物的全基因组序列测定及分析

为明确山西省晋中市侵染番茄的病毒种类,采用双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)技术和非序列依赖PCR扩增(sequence-independent amplification,SIA)方法对感病番茄进行分子鉴定。序列测定及分析发现,具有花叶、卷曲症状的番茄为烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)所侵染。进一步克隆TMV番茄分离物(TMV-SXFQ)的全基因组序列,得到TMV-SXFQ(Gen Bank登录号为JX993906)全长为6 394 bp,含4个开放阅读框(open reading frame,ORF)。序列比对分析表明,TMV-SXFQ与烟草花叶病毒属其他分离物的同源性为86.3%~99.6%;系统进化分析表明,TMV-SXFQ与韩国分离物IM聚为一簇、亲缘关系最近。     

湖北省十堰地区野生板栗cpSSR遗传多样性研究

为了明确神农架地区野生板栗资源遗传背景,选用4对呈现多态性的叶绿体微卫星引物,对湖北省十堰辖区内野生板栗进行了遗传结构和叶绿体单倍型分析。结果表明4个位点在4个居群的53个样本中扩增出10个等位基因。等位基因数(A)平均为2.5,有效等位基因数(Ne)平均为1.696,PIC值平均为0.312,各遗传参数值远低于核基因组对群体研究的相应值。4个等位基因从53个样本中共给出5种单倍型,既有共享率超过66%的单倍型,在房县居群中也存在稀有单倍型,其中丹江口和房县板栗天然野生居群,具有较高的单倍型多样性,杂合度分别为0.4062和0.3794,明显高于其他地区,显示两地是板栗的分布及遗传多样性中心。基于cpSSR数据,对板栗地方品种与天然野生居群间的遗传结构、关系及地方品种的起源进行了初步探讨。AMOVA分析显示,83%的cpSSR变异存在于居群之间,17%来自居群内。研究表明,十堰地区野生板栗具有较高的多样性,叶绿体单倍型分析更能直观的表现野生板栗的区域分布规律。     

四种寄主来源的灰葡萄孢对草莓的致病力分化研究初报

 从合肥、蚌埠、长丰、和县等地采集的番茄、辣椒、草莓、葡萄等发病组织上分离鉴定获得23个灰葡萄孢菌株, 采用菌丝块创伤接种法, 分别测定了这些菌株对草莓果实和叶片的致力。结果初步表明, 所有供试菌株接种草莓果实和叶片后均引起发病, 但病斑的平均直径有显著差异, 并在不同草莓品种上表现也有差异, 显示灰葡萄孢菌株间对草莓果实和叶片的致病力存在明显的分化。按照在草莓果实和叶片所致病斑的平均直径大小可将供试菌株划分为致病力较强、中等和较弱3种类型。总体来说, 来自草莓和番茄的菌株对草莓果实和叶片的致病力较强, 来自辣椒的菌株对草莓果实和叶片的致病力较弱, 但来自相同寄主的菌株间致病力也存在差异, 菌株致病力差异与菌株地域来源无明显相关。     

Phytophthora nicotianae transmission and growth of potted kalanchoe in two recirculating subirrigation systems

Recirculating subirrigation systems are frequently exposed to the risk of plant pathogens transmission, which may deteriorate the growth and quality of the plants. The transmission of Phytophthora nicotianae was examined using Kalanchoe blossfeldiana cv. New Alter in two recirculating subirrigation systems, a nutrient-flow wick culture (NFW) system and an ebb and flow (EBB) system. When the nutrient solution was infested, the pathogen was recovered from roots in both subirrigation systems. However, foliar blights and browning of roots appeared 4 and 7 weeks, respectively, after inoculation in the EBB system. Only a little discoloration appeared in the NFW system. The fresh and dry weights were lower in the EBB system than in the NFW system. When growing medium was inoculated, the pathogen was unable to be isolated from the plants in the NFW system. However, disease symptoms appeared in the EBB system 4 weeks after inoculation, and the pathogen was observed in the basal leaves and roots. Similar to the infested nutrient solution, the plant growth in the EBB system was inhibited. These results suggested that when the nutrient solution was infested, pathogen transmission could occur in plants in both systems, although differences existed with regard to disease symptoms and the time it took for symptoms to appear. However, we observed that when growing medium was inoculated the pathogen was not transmitted to adjacent plants in the NFW system using wick.